甲型H1N1流感病毒致宿主细胞脱氧核糖核酸氧化损伤的研究

目的:通过检测DNA损伤标志物8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxo-dG)在甲型H1N1型流感病毒感染MDCK细胞中的表达,初步探讨甲型H1N1型流感病毒诱导细胞凋亡的脱氧核糖核酸(DNA)损伤机制。方法:MDCK细胞培养后,甲型H1N1流感病毒感染继续培养0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h,细胞爬片免疫组织化学方法检测各时间点DNA损伤标志物8-oxo-dG的表达。结果:甲型H1N1流感病毒感染后各时间点实验组MDCK细胞8-oxo-dG的表达均显著高于相应的正常对照组(P<0.05),病毒感染各组间两两比较发现各组间差异显著。结论:甲型H1N1流感病毒感染能造成宿主细胞DNA氧化损伤。

艾滋病毒1型逆转录酶抑制剂的小鼠血清活性动态研究

目的:观察艾滋病毒1型逆转录酶(HIV-1RT)抑制剂在小鼠血清中的活性动态,探讨其在药效评价中的可应用性。方法:不同途径给予小鼠已知和未知HIV-1RT抑制剂后,在不同时间取血分离血清,体外测定血清抑制 HIV-1RT的活性。结果:正常小鼠血清有非特异性抑制HIV-1RT的活性,经稀释后可排除;非核苷类RT抑制剂可在体外直接测定小鼠体内用药后的血清抑制HIV-1RT活性和动态,核苷类RT抑制剂的血清抗HIV-1RT的活性可测出,但血清活性不如非核苷类药物为高,主要因核苷类药物的活性物质是其三磷酸盐,在细胞内转化后形成。此种体外测定小鼠用药后血清活性的体内体外结合的实验方法,简便快速,可初步分析药物与血清蛋白的结合率以及估算其生物利用度和清除率。结论:体内与体外相结合的逆转录酶抑制剂的小鼠血清活性的测定方法,可应用于非核苷类HIV-1RT抑制剂的药效评价,对于核苷类HIV-1RT抑制剂,取血时间要长,并同时测定血清在细胞内的活性,以便综合分析。

中国部分地区艾滋病病毒1型母婴传播回顾性追踪调查

目的 了解中国艾滋病病毒1型(HIV-1)母婴传播的现状,特别是母婴传播的发生率和影响因素,为进一步开展预防阻断工作提供背景资料。方法 以地方卫生防疫和医疗机构的哨点监测、产前筛查、日常检测和门诊中发现的HIV-1阳性孕产妇为对象,对其所生子女进行追踪调查和检测。结果 对来自云南、河南、新疆等10个省(自治区、直辖市)的87例HIV-1阳性母亲所生的94名儿童进行追踪,最后追踪到75例母亲及其所生的80名儿童,HIV-1母婴传播发生率为35.0％(28/80)。而河南省的母婴传播率为41.7％(10/24),云南省和新疆维吾尔自治区分别为33.3％(11/33)和27.3％(3/11)。对相关影响因素的分析发现,母亲的感染途径、生产胎次和喂养方式对HIV-1母婴传播有一定的影响作用,其中输血传播、初产和母乳喂养是高危因素。相应的母婴传播率分别为45.5％、39.2％和36.2％,而性传播、多胎生产及人工喂养分别为32.1％、25.9％和22.2％,但差异无显著统计学意义。结论 该研究表明,中国HIV-1母婴传播率与亚非发展中国家相似,而高于西方发达国家。对相关的高危因素(如孕妇的感染途径,特别是输血传播)有必要作进一步地研究。

中国艾滋病病毒1型流行毒株V_3环序列变异性的研究

目的 研究中国艾滋病病毒1型(HIV-1)毒株V3环序列的变异性。方法 对中国1996～2000年491例HIV-1感染者env基因C2-V3区经聚合酶链反应(PCR)扩增并测序,测得的序列经DNA软件编辑后,用Wisconsin公司GCG软件包进行分析。结果 从核酸序列可以看出,V3环的核苷酸存在着点突变和基因的漂移。各亚型流行株V3顶端的四肽特征主要为:GPGQ 72.6％,GPGR 13％,GPGK 7.6％,其它形式6.7％。在V3环氨基酸序列11、25位点未同时出现带正电荷的氨基酸。基因离散率的分析表明呈现逐年递增趋势。结论 中国V3环顶端四肽序列主要为GPGQ,从1990的10％、1993年的29％上升到2000年的72.6％。而GPGR则从1990年的80％、1993年的57％下降到2000年的13％。更加证明了在中国存在着HIV-1毒株V3区顶端四肽由GPGR向GPGQ漂移的现象。从V3环序列的高度变异性分析表明中国正处于HIV快速流行期。

外周全血HIV-1 DNA定量检测在艾滋病病毒感染诊断与病程监测中的应用性研究

目的通过研究外周全血HIV-1 DNA定量检测与其他检测指标的相关性,探讨外周全血中HIV-1 DNA定量检测在艾滋病病毒感染诊断及病程监测中的作用。方法对南昌地区部分艾滋病筛查实验室送检的65例HIV-1抗体筛查有反应的样品,分别进行HIV-1抗体确证、HIV-1 DNA定量和HIV-1 RNA定量检测、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数,并将HIV-1 DNA与其他各项进行统计分析。结果65例HIV-1抗体筛查有反应样品经免疫印迹法(WB)确证:50例为HIV-1抗体阳性,11例为HIV-1抗体不确定,4例为HIV-1抗体阴性。50例HIV-1抗体阳性的受检者中,检出HIV-1 DNA的有45例,检出HIV-1 RNA的有33例;11例HIV-1不确定受检者中,有6例同时检出HIV-1 DNA和HIV-1 RNA,其余均未检出HIV-1 DNA和HIV-1 RNA;4例HIV-1抗体阴性受检者中,HIV-1 DNA和HIV-1 RNA均未检出。56例艾滋病感染者(患者)的HIV-1 DNA的量值与HIV-1 RNA的量值呈显著性正相关(r=0.417,P=0.001),与CD4+T淋巴细胞数值呈显著性负相关(r=-0.29,P=0.03),与CD8+T淋巴细胞数值呈正相关,但相关性不显著(r=0.249,P=0.064)。结论外周全血HIV-1 DNA定量检测可为艾滋病早期感染诊断,监测艾滋病病程进展及高效抗病毒治疗疗效提供实验依据。

人类免疫缺陷病毒1型Tat参与艾滋病及相关疾病的研究进展

人类免疫缺陷病毒1型感染早期合成的Tat不仅是感染细胞中病毒复制所必需,而且感染细胞分泌的细胞外Tat可以诱导靶细胞上该病毒辅助受体的表达,促进病毒的播散,并对不同类型的未感染细胞有多种作用,在艾滋病相关疾病,如卡波济肉瘤、神经紊乱、免疫缺陷等的病理机制中起作用。

吸毒人群尿液、血液平行检测艾滋病病毒1型抗体结果分析

目的 利用吸毒人群尿液和血液标本比较不同方法检测艾滋病病毒1型(HIV-1)抗体结果的一致性。方法 平行采集强制戒毒所234名吸毒者的尿液和血液标本,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定不同标本中HIV-1抗体。结果234人中5人血液标本HIV-1抗体为阳性,其平行尿液标本中4人阳性,另1人蛋白印迹试验确认为阴性。结果显示:两种标本检测HIV-1抗体的符合率为99.6％。结论 尿液标本ELISA试剂的检测结果是可靠的。

采用流式细胞仪检测艾滋病病毒1型膜蛋白小鼠免疫后IFN-γ的表达

目的通过流式细胞技术检测艾滋病病毒1型(HIV-1)Gp120膜蛋白免疫小鼠后的IFN-γ的表达。方法 构建表达HIV-1gp120基因的复制型重组痘苗病毒。与DNA疫苗联合免疫小鼠,用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的表达。结果 获得表达中国HIV-1流行株gp120基因的重组痘苗病毒rVVgp120、rVVM304,能正确表达Gp120蛋白。与DNA疫苗p120-VRC、pM304-VRC联合免疫小鼠后,用流式细胞仪检测到小鼠脾淋巴细胞能特异性的表达IFN-γ。结论 用流式细胞检测技术成功检测到免疫小鼠的脾淋巴细胞特异性的表达IFN-γ,用此方法可方便快捷地检测小鼠的细胞免疫效果。

艾滋病病毒-1型感染艾滋病患者载毒数量的作用及与常见机会感染发生的关系

目的探讨艾滋病病毒-1型(HIV-1)感染艾滋病患者病毒载量的作用及与常见机会感染发生的关系。方法选取艾滋病患者110例,采用流式细胞仪检测患者CD_4^+T细胞计数,采用全自动病毒载量仪检测患者HTV-1病毒载量。结果 110例患者中,HIV-1病毒载量(Log_(10))为1.43~6.51,平均为(4.41±1.02);CD_4^+T淋巴细胞<200个/μl者53例,≥200个/μl者57例。CD_4^+/T淋巴细胞<200个/μl患者HIV-1病毒载量明显高于CD_4^+T淋巴细胞≥200个/μl患者(P<0.05)。Spearman相关分析显示HIV-1病毒载量与CD_4^+T淋巴细胞水平呈负相关(r_s=-0.324,P<0.05)。病毒载量(Log_(10))<4.41组和≥4.41组口腔假丝酵母菌感染、细菌性肺炎、肺结核以及总机会感染发生比例差异无显著性(P>0.05)。CD_4^+T细胞<200个/μl AIDS患者机会感染发生率为89.47%,明显高于≥200个/μl患者。结论 HIV-1感染AIDS患者病毒载量与机会性感染无明显关系,但与患者CD_4^+T淋巴细胞数有关,而CD_4^+T淋巴细胞数与机会性感染有明显关系。

病毒载量检测对1型艾滋病病毒的诊断价值分析

目的探讨病毒载量检测对1型艾滋病病毒(HIV-1)的诊断价值。方法选取2018年8月~2020年3月我院收治的128例疑似艾滋病患者,所有患者均进行酶联免疫吸附试验、WB检测,不确定患者进行病毒载量检测。根据随访结果确定HIV-1感染情况。结果经WB法诊断,128例疑似艾滋病患者确诊12例,不确定114例。其中114例进行病毒载量检测,检测值<检出限患者26例,占比22.81%,检测值>检出限患者88例,占比77.19%;114例患者进行首检筛查阳性后,进行酶联免疫吸附法试验复检,复检结果出现双阳或单阳两种结果,对于病毒载量<检出限患者,双阳和单阳的患者数相比,差异无统计学意义(P>0.05),病毒载量>检出限患者,双阳和单阳的患者数相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HIV-1抗体不确定患者可通过病毒载量检测进行鉴别,但必要时仍需根据随访结果以及流行病学资料进行综合判断。

出入境人群艾滋病病毒env基因部分序列特征和亚型研究

〔目的〕对出入境人员中的HIV感染者进行病毒基因型测定,监测国内外流行的HIV毒株的状况及其变化。〔方法〕用RT-PCR或直接巢式PCR方法扩增HIV env基因C2-V3区及其邻近的基因片段,然后直接进行核苷酸序列测定,与国际标准亚型序列比较确定基因型并进行系统进化分析。〔结果〕2003年确认的19例HIV阳性样品中有15例扩增出目的基因片段并进行了序列测定,确定为B亚型4例、B’亚型2例、D亚型2例、CRF01-AE重组亚型1例、CRF02-AG重组亚型6例。这些不同亚型的HIV-1感染者来自包括中国在内的6个国家。HIV-1基因型的分布与我国国内有很大不同。〔结论〕出入境人群中HIV-1基因种类多且复杂,监测出入境人群HIV基因型及其变化对于发现和鉴定新型变异毒株十分重要。

U_1小核核糖核酸抗HIV特点及载体作用

基因治疗方法在人免疫缺陷病毒(HIV)感染的治疗上吸引了人们的广泛关注,抗HIV的关键在于抗HIV基因和载体的选择。本文就U_1小核核糖核酸的抗HIV特点及载体作用作了综述。

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

在大肠杆菌中，利用新构建的含Ｔ７噬菌体ｇ－１０核糖体结合位点（ＲＢＳ），以及λ噬菌体ＰＲ启动子的新型原核表达载体，通过表达ｇａｇ－ｐｏｌ基因片段，获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）核心蛋白ｐ２４（ＣＡ）的高效表达。克隆的ｇａｇ－ｐｏｌ基因片段在其阅读框架移位区域插入了４ｂｐ碱基，其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与ｇａｇ一致，从而实现了对ｇａｇ－ｐｏｌ融合蛋白的有效加工，产生成熟的核心蛋白ｐ２４及其它产物。重组ｐ２４以可溶形式存在，可以被抗ｐ２４的单克隆抗体特异识别。测定的Ｎ－端７个氨基酸序列与从病毒纯化的ｐ２４完全一致，在使用硫酸铵沉淀后，采用两步离子柱层析，可将重组蛋白纯化到９５％以上的纯度。ＥＬＩＳＡ分析表明，纯化的ｐ２４可以作为特异性很强的试剂而用于ＨＩＶ感染的诊断及病情的预后，并可用于ｐ２４的生化及结构分析。

TZM-b1细胞系检测我国HIV-1病毒表型耐药性

目的利用TZM-b1细胞系检测艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)对逆转录酶抑制剂(AZT、d4T、ddI、NVP)的药物敏感性,并用该方法检测中国抗病毒治疗失败者的表型耐药。方法用两种实验室适应毒株SF33和ⅢB来评价TZM-bl细胞方法的敏感性;用外周血单个核细胞(PBMC)共培养法分离扩增抗病毒治疗失败者的临床毒株;用TZM-b1法检测16例临床毒株对逆转录酶抑制剂的表型耐药。结果AZT、d4T、ddI、NVP对SF33/ⅢB毒株的抑制50%病毒复制的药物浓度(IC_(50))分别为0.009/0.005μumol/L、0.125/0.113μmol/L、0.495/1.905μmol/L、0.093/ 0.045μmol/L。16例临床分离毒株中分别有13(81.396)株、13(81.396)株对AZT和NVP耐药。其中7株(53.8%)显示对AZT高度耐药;对NVP耐药的均为高度耐药,其中8株IC_(50)升高1000倍以上。结论TZM-b1细胞系可用来快速检测HIV-1病毒表型耐药。我国抗病毒治疗失败者的表型耐药主要表现为对AZT和NVP耐药。

Xpert HIV-1病毒载量检测试剂盒的检测线性和精密度评估

目的 评价1型艾滋病病毒(HIV-1),Xpert病毒载量测定试剂盒的检测线性、精密度及与参比试剂的符合性。方法 采用定值质控物对Xpert病毒载量进行测定,并对其进行线性及精密度测定。采集血样383份,采用双盲试验法,以TaqMan病毒载量测定试剂进行检验。依据多项卫生推荐标准(WS/T),利用卡方检验和Kappa检验法对两种试剂进行定性检验;采用多元回归、Bland-Altman模型等统计学方法对两种试剂进行一致性比较。结果 用Xpert病毒载量测定试剂对给定的质控物有很好的线性关系,批内和批间的方差都在10%以内。用1 000个copies/mL和5 000个copies/mL作为检测线,两种方法的一致性分别为97.91%、97.12%。卡方检定和Kappa分别为P=0.549(>0.05)和0.919(P<0.001),表明两者的诊断具有良好的一致性。两种方法的测定值之间的相关性为0.890,相关系数R^(2)=0.896。通过Bland-Altman模型比较,发现两种试剂的检出值均在95%上下限范围内的符合率为98.79%(327/331)。在1 000 copies/mL以下,病毒载量的相关性相对较低。结论 评价试剂(Xpert)与参比试剂(TaqMan)在整体上具有很好的一致性,可以满足大部分的临床检验需要。

慢性乙型病毒性肝炎患者血清TGF-β_1水平与肝纤维化、HBV DNA载量的关系——附116例报告

目的:探讨慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)患者血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平与肝纤维化、HBVDNA载量的关系。方法:检测116例慢乙肝(慢乙肝组)患者和60名正常人(对照组)的血清TGF-β1、4项肝纤维化指标[透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原],以及HBVDNA载量,并作比较。结果:与对照组比较,慢乙肝组的血清TGF-β1水平、4项肝纤维化指标升高,病情严重程度不同的慢乙肝患者的TGF-β1水平及4项肝纤维化指标均高于对照组(P<0.05～0.01),上述指标的增高水平与病情严重程度呈正比,且TGF-β1与4项肝纤维化指标呈正相关(r值分别为0.629、0.586、0.622、0.618,均为P<0.01)。慢乙肝患者的TGF-β1水平与HBVDNA载量呈正比。结论:慢乙肝患者血清TGF-β1水平与其病情严重程度、肝纤维化指标及HBVDNA载量呈正比,检测慢乙肝患者的血清TGF-β1水平有助于判断其肝纤维化程度和病毒复制的活跃程度。

HIV-1型前病毒基因检测芯片的研制及应用

目的研制艾滋病病毒1型(HIV1)前病毒基因检测芯片,并将其应用到临床样本的检测中。方法合成多对引物,经筛选实验后选出6对适宜的引物用于逆转录聚合酶链反应(RTPCR),扩增HIV基因组gag区(保守区)6个HIV目的基因片段,扩增小鼠GAPDH基因片段作为阳性内参片段,PCR扩增辣椒红素基因片段作为阴性对照片段。将上述片段克隆到pMD18T载体上,从中选取3个HIV1目的片段、阳性对照片段和阴性对照片段进行PCR扩增,扩增产物经纯化后点在尼龙膜上,制备成核酸检测芯片。地高辛PCR标记样本核酸与芯片杂交后,用酶联显色,分析结果。结果共检测了98份阳性样本和30个阴性样本,敏感性达939%,特异性为1000%。结论该HIV1前病毒基因检测芯片成本较低,具有较高的特异性和灵敏度,可以用于HIV1感染和母婴传播的早期诊断。

应用全自动核酸检测系统MPLC-COBAS筛查献血员HIV-1 RNA

目的建立一套全自动核酸检测系统筛检献血员艾滋病病毒1型(HIV-1)核糖核酸(RNA)。方法应用MagNAPureLC(MPLC)系统提取核酸,COBASAmplicor系统进行基因扩增与检测,再应用国际标准品和临床标本验证MPLC-COBAS系统。结果该系统的检测灵敏度(95%CI)HIV1RNA病毒为45～67IU/ml,5124份标本混样检测结果为阴性,81份HIV抗体(抗HIV)酶联免疫吸附试验(ELISA)假阳性混样检测结果及6份追踪样本核酸检测结果均为阴性。结论该系统具有全自动检测、灵敏度高、特异性好的特点,可进一步扩大临床标本检测量,探索出切实有效的核酸检测系统进行献血员筛查HIV1RNA。