艾烟可吸入颗粒物对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响

目的观察艾烟可吸入颗粒物(PM10)对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响,并探讨其诱导凋亡的可能机制。方法采用体外实验方法,以A549细胞为研究对象,采用Hoechest33258染色法,荧光显微镜观察艾烟PM10对A549细胞凋亡的影响,检测细胞内Ca2+水平、核因子(NF)-κB p65表达量及细胞内活性氧(ROS)的水平。结果艾烟PM10处理4 h在400μg/mL时出现部分凋亡细胞。艾烟PM10干预A549细胞4 h后,随着浓度增加,细胞内Ca2+水平显著增加(P<0.01)。与空白对照组比较,艾烟干预4 h,各浓度组A549细胞内NF-κB p65表达量均降低(P<0.05);干预20 h,70μg/mL组和280μg/mL组NF-κB p65表达量均降低(P<0.05),140μg/mL组NF-κB p65含量无明显变化(P>0.05)。相同浓度下,不同时点艾烟干预各组间比较,NF-κB p65表达量无明显变化(P>0.05)。与空白对照组比较,艾烟PM10处理各组细胞内ROS水平均显著降低(P<0.05)。结论艾烟PM10能诱导A549细胞凋亡、提高A549细胞内Ca2+水平。

艾烟可吸入物对大鼠神经细胞氧化损伤的影响

目的探讨艾烟可吸入物(PM10)对大鼠神经细胞氧化损伤的影响及PI3K/Akt信号通路在其中的作用。方法采用24 h内新生SD大鼠乳鼠前额叶皮质及海马组织体外培养原代神经细胞,H_2O_2诱导建立氧化损伤细胞模型;随机分为空白组、氧化损伤组、氧化损伤+PM10组、氧化损伤+PM10+抑制剂组、PM10组。采用TUNEL和DAPI染色观察神经细胞凋亡形态;MTT法及Western blot分别检测细胞存活率及目的蛋白表达,并用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002验证作用通路。结果 MTT检测显示,200μmol/L H_2O_2能降低神经细胞50%存活率(P<0.001),0.1、0.5 ng/mL艾烟PM10能明显抑制H_2O_2诱导氧化损伤的神经细胞凋亡(P<0.001);TUNEL和DAPI染色显示,0.5μg/m L艾烟PM10能拮抗H_2O_2诱导氧化损伤神经细胞凋亡的形态学变化(P<0.001);Western blot检测显示,H_2O_2及LY294002能降低p-Akt、Bcl-2的表达(P<0.05,P<0.001),上调active-Caspase-3的表达(P<0.01,P<0.001),而艾烟PM10作用相反(P<0.01,P<0.001)。结论艾烟PM10能减少神经细胞氧化应激的凋亡,其机制可能是激活PI3K/Akt信号通路并调控下游凋亡蛋白Bcl-2、active-Caspase-3的表达,拮抗细胞凋亡。