绵羊大肠杆菌和艾美尔球虫混合感染病原分离与病理组织学观察

【目的】对宁夏某规模化绵羊场大肠杆菌和艾美耳球虫混合感染进行分离鉴定并对靶器官的组织病理学变化进行分析。【方法】采用固体培养基进行细菌病原分离,饱和盐水漂浮法进行寄生虫检测;采用大肠杆菌16S rRNA引物进行基因序列扩增和测序,使用DNA Star软件将分离菌株测序结果与GenBank中的标准株序列进行同源性比较;采用MEGA 7.0软件中的邻接法,依据16S rRNA序列构建分离株系统发育树并进行遗传进化分析;对靶器官组织进行病理组织学观察。【结果】在伊红美蓝培养基中观察到金属光泽的黑色单一菌落,在血平板中有溶血环的灰色圆形单一菌落,染色为革兰氏阴性杆菌,共分离得到3株菌株;麦克马斯特法检测显示,粪便中有卵圆形、表面光滑的孢子化艾美尔球虫卵囊,其平均OPG为2200,属于轻度感染;对3株菌株16S rRNA扩增片段与阳性对照一致,16S rRNA基因序列构建的系统发育树与大肠杆菌在同一分支;病理组织学观察显示,肠系膜淋巴结淋巴细胞数量减少,有中性粒细胞浸润;肠组织黏膜层绒毛溶解坏死、黏膜上皮结构丢失;回肠固有层内有球虫虫体,呈嗜酸性圆形;空肠间质有中性粒细胞浸润,腺腔有镰刀状球虫裂殖体;结肠局部黏膜有溃疡灶,并有大量弱嗜碱性短杆状物质沉积。【结论】结合病原形态学和分子生物学结果分析表明,该例绵羊群腹泻是由大肠杆菌和艾美尔球虫共同感染所致。

鸡柔嫩和巨形艾美尔球虫混合感染试验

鸡柔嫩和巨形艾美尔球虫混合感染试验陶建平符敖齐（扬州大学农学院动医系扬州２２５００９鸡球虫病的病原体有９种，对鸡的致病性不同，其中柔嫩艾美尔球虫的致病性最强，巨形艾美尔球虫的致病性中等，这些已有许多学者进行了广泛的研究，但这两种球虫混合感染的致病性研...

柔嫩艾美尔球虫厦门株(Eimeria tenella)生物学研究

采用单卵囊分离方法从厦门地区饲养的鸡盲肠中获得艾美尔球虫．经显微观察、测量和感染实验．从寄生部位、卵囊形态、孢子化时间和潜伏期等指标测定．实验结果：采用琼脂板方法分离和挑选单卵囊方法进行感染效果理想。单卵囊感染小鸡成功率为60％．该球虫寄生在鸡盲肠部位．其余部位未发现．卵囊形态长卵圆形．长25．80(23．5～28．5)．宽20．86(18．5～23．5)．长／宽：1．23(1．21～1．27)．27℃条件下孢子化时间为20h．．潜伏期为146h．与国内一些株进行比较存在差别．确定该艾美尔球虫为柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)，并定名为柔嫩艾美尔球虫厦门株．

柔嫩艾美尔球虫裂殖子免疫原性的研究

本文评价了柔嫩艾美尔球虫第二代裂殖子的免疫原性。试验采用弗氏完全佐剂乳化的裂殖子抗原及从组织中分离得的活游离裂殖子，以不同剂量在不同时间接种健康小鸡，随后用同源球虫进行攻击。效果评价指标为：（１）比较各抗原组的鸡只死亡率及盲肠病变记分；（２）各抗原组鸡只的增重差异。结果表明，柔嫩艾美尔球虫第二代裂殖子抗原不能刺激鸡体产生保护性免疫力；具有活力的裂殖子接种于健康鸡盲肠能诱发部分免疫力，但较自然感染者为弱。本研究揭示了柔嫩艾美尔球虫裂殖子的免疫原性，为进一步研制疫苗提供了依据。

人工合成青蒿素对鸡柔嫩艾美尔球虫病的预防试验

应用新红褐公雏 ,检测了人工合成青蒿素对鸡柔嫩艾美尔球虫病的预防效果。结果表明 :2 0 ,40 ,80 ,1 60mg/kg人工合成青蒿素均能很好地控制因人工感染鸡柔嫩艾美尔球虫引起的鸡只死亡 ,但不能防止增重率降低、血便、病变及卵囊的产生。依据抗球虫指数 (ACI)判定 ,该药对鸡柔嫩艾美尔球虫病的预防效果较差 ,不适于用作鸡柔嫩艾美尔球虫病的临床预防药物。

艾美尔球虫防治高原鼠兔实验及对其胚胎发育的影响

高原鼠兔是青藏高原地区危害高寒草甸植被的主要有害小哺乳动物。生物控制为有害动物防治的主要发展方向,但存在防治效果见效慢的缺点。艾美尔球虫是高原鼠兔肠道内的主要寄生物,并对宿主具有专一性寄生的特点。为将艾美尔球虫研发成新型的高原鼠兔无公害生物防治制剂,本文测定了球虫毒饵对高原鼠兔致死率并在野外进行了灭鼠实验。结果表明,添加增效剂的300万球虫毒饵在室内可导致63.6%的成年个体死亡,在野外可导致54.9%成体和71.0%幼体死亡。灭鼠后残存高原鼠兔的球虫感染率和感染强度显著大于对照个体,且妊娠雌体的胚胎重较对照显著降低。上述结果说明,艾美尔球虫防治高原鼠兔具有较好的速效性,并能影响残存妊娠雌体的胚胎发育。

葡萄原花青素对感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加葡萄原花青素（GPC）对感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响。选用350只1日龄科宝-500（Cobb-500）健康肉仔鸡（公雏）,随机分为5个组,每组7个重复,每个重复10只鸡。空白对照组和负对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮基础上添加7.5、15.0和30.0 mg/kg GPC的试验饲粮。14日龄时,负对照组和3个试验组每只肉仔鸡经口腔攻毒5×10^4个柔嫩艾美尔球虫卵囊,空白对照组每只肉仔鸡灌服同体积的生理盐水。试验期42 d,分为前期（1-21日龄）和后期（22-42日龄）2个阶段。结果表明：1）与空白对照组相比,负对照组肉仔鸡试验各阶段的平均日增重（ADG）均显著降低（P〈0.05）,22-42日龄和1-42日龄时的料重比（F/G）显著增加（P〈0.05）;饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC显著改善了柔嫩艾美尔球虫攻毒引起的22-42日龄和1-42日龄时ADG的降低和F/G的增加（P〈0.05）;而饲粮中添加30.0 mg/kg GPC显著降低了22-42日龄时的ADG、平均日采食量（ADFI）和1-42日龄时的ADG（P〈0.05）。2）与负对照组相比,饲粮中添加GPC显著降低了肉仔鸡的盲肠病变评分、血便堆数和球虫卵囊排出数（P〈0.05）。3）饲粮中添加GPC显著抑制了柔嫩艾美尔球虫攻毒引起的肉仔鸡脾脏指数增加（P〈0.05）;柔嫩艾美尔球虫攻毒引起T淋巴细胞转化率显著增加（P〈0.05）,饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC使T淋巴细胞转化率进一步增加（P〉0.05）;饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC可使B淋巴细胞转化率增加（P〉0.05）;柔嫩艾美尔球虫攻毒引起外周血γδT细胞比例显著增加（P〈0.05）,饲粮中添加15.0 mg/kg GPC使外周血γδT细胞比例进一步增加（P〉0.05）。4）与空白对照组相比,柔嫩艾美尔球虫攻毒显著增加了回肠上皮内淋巴细胞（IEL）数量和盲肠黏膜分泌型免疫球蛋白A（s Ig A）水平（P〈0.05）,饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC使IEL数量和s Ig A水平进一步增加（P〈0.05）。综上所述,饲粮中添加GPC可提高感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡的免疫功能,缓解柔嫩艾美尔球虫感染造成的生长抑制,其中7.5和15.0 mg/kg GPC的抗球虫效果较好。

IL-6基因启动子区单核苷酸多态对京海黄鸡柔嫩艾美尔球虫抗性指标的影响

为探究白介素6(IL-6)基因5′启动子区单核苷酸突变对鸡柔嫩艾美尔球虫抗性指标的影响,以京海黄鸡为试验材料,对IL-6基因5′调控区单核苷酸多态性(SNPs)进行检测,根据感染组与对照组血浆抗性指标酶联免疫吸附试验检测结果,分析SNPs突变形成的基因型与抗性指标的关联。结果表明:感染组与对照组间过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量差异极显著,超氧化物歧化酶(SOD)活性及IL-2、IL-16、IL-17、γ干扰素(IFN-γ)水平和体增重差异显著;通过京海黄鸡IL-6基因启动子区基因序列与GenBank上的SNPs数据库比对,发现3个新的SNPs(A-663G、C-447G和G-357A),其中A-663G位点只有1种基因型GG,C-447G和G-357A位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态且多态性丰富;C-447G突变位点各基因型间比较发现,血浆CAT、SOD、GSH-Px活性及IL-2、IL-16、IL-17水平和体增重差异极显著,MDA含量差异显著;G-357A突变位点各基因型间比较发现,血浆CAT、SOD活性及IL-16水平和体增重差异极显著,GSH-Px活性和IL-17水平差异显著。就主要抗性指标而言,C-447G和G-357A2个突变位点的CC和AA纯合型个体优于其他基因型个体,CC和AA基因型分别为2个突变位点鸡球虫抗性有利基因型,这一结果为京海黄鸡鸡球虫抗性分子标记辅助育种提供了参考。

中药抗柔嫩艾美尔球虫机制研究

根据中兽医理论和鸡球虫病的特点 ,用纯中药组方 ,经组方药效筛选试验 ,选用抗球虫效果最佳的组方进行抗球虫机制研究。结果表明 ,所选中药组方具有明显的抑制未孢子化柔嫩艾美尔球虫卵囊的成熟 ,对孢子化卵囊具有杀灭作用 ,并且使外周血液中淋巴细胞尤其是T淋巴细胞增多 ,提高免疫器官中T和B淋巴细胞的数量和活性 ,从而提高机体的免疫能力 。

柔嫩艾美尔球虫感染对鸡的若干生理生化指标的影响

以74只33日龄蛋公鸡作为试验对象,随机分成感染组(n=37)和对照组(n=37).感染组每只口服接种1.5×105个柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,分别于感染前(0 d)和感染后(2、4、6、8 d)颈静脉采血研究球虫感染对鸡生理生化指标的影响.结果表明柔嫩艾美尔球虫感染后鸡红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量、血清中葡萄糖显著减少,血清钾含量显著升高,血清钠、血清钙、氯化物、无机磷都显著降低.血清镁含量也降低,但与对照组相比无差异.

药物对柔嫩艾美尔球虫内生阶段超微结构影响的研究

本文对柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)在鸡体内正常发育的超微结构和分别用三种抗球虫药物处理情况下超微结构的变化进行了观察和比较研究,注意到125ppm尼卡巴嗪(Nicarbazin)能引起裂殖生殖阶段的滋养体或初生裂殖体及裂殖子的线粒体、内质网等膜结构系统和核的异常变化;168ppm磺胺喹恶啉(SQ)对滋养体、初生裂殖体及裂殖子、大配子和卵囊壁的形成均有影响,对裂殖生殖阶段的影响主要表现为核膜的增生复制等一系列核的异常变化;对配子生殖阶段的影响表现为Ⅰ型和Ⅱ型卵囊壁形成颗粒(WFB_1和WFB_2)的异常变化;80ppm盐霉素(Salinomycin)对上皮内淋巴细胞(IEL)中的子孢子及粘膜中成熟裂殖子的影响表现为表皮的分离或破裂及胞浆内微线粒(MN)和多糖颗粒(PG)等的轮廓模糊。由药物引起的其他一些超微结构的异常变化也作了观察和描述。

中药复方对鸡柔嫩艾美尔球虫病的疗效观察

通过人工感染预防试验和治疗试验,对由常山、青蒿、柴胡、苦参、苦楝根、黄芪等13种中草药按不同组成和配比组成的5个不同中药复方的抗球虫效果进行了试验观察。结果在5个中药复方中,预防试验复方4(0.5 mL/d)的抗球虫指数最高(ACI=110.07),是阳性对照组的193.0%,存活率为100%,卵囊值较低,为20;治疗试验复方4高剂量组(1.0 mL/d)的存活率相对较高,为95%;预防试验复方1和复方3存活率较高,均为93.33%,在预防试验和治疗试验复方1和复方3的卵囊值均为20,相对于其他中药复方和阳性对照组较低。结果表明,常山配比高的复方可明显降低鸡球虫感染后的卵囊值,青蒿配比高的复方可明显提高鸡球虫感染后的存活率。

鸡堆型艾美尔球虫3-1E抗原表位的生物信息学预测

应用生物信息学分析和预测鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白二级结构和抗原表位,为确定和筛选优势表位,研制安全、高效表位疫苗奠定基础。以克隆获得的鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白氨基酸一级结构为基础,采用DNAStar软件和生物信息学在线分析程序Prot Param、SOSUI、IEDB、SYFPEITHI等预测3-1E蛋白理化性质和二级结构,并分析其序列跨膜区、可溶性、亲水性、可及性、柔韧性参数以及抗原指数,预测B细胞表位和T细胞表位的可能区域。3-1E蛋白由170个氨基酸组成,分子式C818H1257N213O272S3,分子质量18.5234 ku,理论等电点为4.25,半衰期为10 h;无跨膜区均为膜外区,是一种可溶性蛋白。其二级结构中α螺旋占31.76%,β转角为12.35%。B细胞表位预测区域:44-49、65-67、86-87、111-116;分值较高的T细胞表位区域:52-60、94-102、97-105、154-162、157-165。运用生物信息学方法确定3-1E存在多个抗原表位,对进一步研究3-1E的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要意义。

帝克珠利对鸡柔嫩艾美尔球虫的药效研究

试验了国产帝克珠利对鸡柔嫩艾尔球虫的药效。结果表明，帝克珠利以每ｋｇ饲料０５ｍｇ、１０ｍｇ和２０ｍｇ的剂量混饲给药，连续服药６天，对经口一次人工感染１０×１０４个／只柔嫩艾美尔球虫卵囊的雏鸡均有很好的保护作用，保护率分别为９７５％、１００％和１００％，而感染不治疗组死亡率为２２５％，差异极显著（Ｐ＜００１）。帝克珠利给药各组雏鸡均不出现血便等临床症状，盲肠内容物中除帝克珠利（每ｋｇ饲料０５ｍｇ）组查见少量卵囊外，其余均未查到卵囊。帝克珠利以每ｋｇ饲料０５ｍｇ、１０ｍｇ和２０ｍｇ混饲给药的抗球虫指数分别为１９４１、１９７０和１９８９，属高效抗球虫药。

帝克珠利对鸡堆型艾美尔球虫的药效实验

球虫病是威胁养鸡业的重要疾病之一，目前对该病的防治仍主要依赖药物［１］。但耐药虫株的出现使现有许多抗球虫药物疗效降低甚至丧失。因此，除了采取轮换用药及穿梭用药等方法以减少或延缓耐药性的产生外，开发评价和应用新型抗型抗球虫药物极为重要和必要。本文报道我...

柔嫩艾美尔球虫郑州株的抗药性研究

柔嫩艾美尔球虫郑州株的抗药性研究宁长申张龙现许兆孟王志祥武爱梅（河南农业大学牧医工程学院，郑州４５０００２）柔嫩艾美尔球虫病是对鸡危害很大的原虫病，暴发该病的雏鸡群，死亡率可达４０％～８０％以上；耐过的病鸡，生长受阻，饲料利用率降低，常给养鸡业造成很...

球虫散防治鸡柔嫩艾美尔球虫病试验

试验观察了中药制剂球虫散分别以 0 .5 %、1%和 2 %添加于饲料中的抗鸡柔嫩艾美尔球虫效力 ,结果发现将球虫散按 1%以上添加于饲料中其抗球虫指数达到 180以上 ,具有高效抗球虫作用。由于中药具有毒性低、残留少等优点 ,在防治鸡球虫病方面具有很好的应用前景。

日粮中加硒对鸡柔嫩艾美尔球虫的效力试验

试验在日粮中添加两个水平（０．５ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ）亚硒酸钠，分试验组与对照组对海赛鸡人工感染柔嫩艾美尔球虫（Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ）进行试验，通过抗球虫指数（ＡＣＩ）、平均增重、病变值、死亡率等几项指标测定，说明日粮中添加硒对鸡抗柔嫩艾美尔球虫的效力。

鸡感染柔嫩艾美尔球虫后某些血清生化指标变化的研究

2 3日龄 AA鸡 36只均分为 3组 ,第一组和第二组分别经口感染 E.tenella卵囊 35万 /只和 7万 /只 ,第三组为对照组 ,对病鸡 10项血清生化指标进行检测 ,结果如下 :( 1)血清葡萄糖含量在感染后 5天 ( 5天 )和 8天与感染前 ( 0天 )无显著差异 ( P>0 .5 )。 ( 2 )血清总蛋白、白蛋白、甘油三酯的含量 ,天冬氨酸氨基转移酶、酸性磷酸酶的活性在 5天均显著低于 0天 ( P<0 .5 ) ,第一组所降的幅度较第二组大 ,其中总蛋白和甘油三酯含量在两组间的差异达到显著水平 ( P<0 .5 ) ;甘油三酯含量和酸性磷酸酶活性在 8天继续下降 ,其他指标在 8天都有不同程度回升。( 3)两感染组的碱性磷酸酶活性和第一组的血清尿酸含量在 5天显著高于 0天 ( P<0 .5 ) ,到 8天又回落。第二组尿酸含量在 0天、5天和 8天之间无显著差异。 ( 4)球蛋白含量在 5天和 8天均显著高于 0天 ( P<0 .5 )。 ( 5 )胆碱酯酶活性在第一组的 8天显著高于 0天和 5天 ( P<0 .5 ) ,在第二组的 0天、5天和 8天之间无显著差异。

鸡柔嫩艾美尔球虫ZJ株3-1E基因的原核表达及鉴定

本实验对E.tenellaZJ株的3-1E基因进行了克隆和表达。根据已报道的柔嫩艾美尔球虫3-1E基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增得到一条特异片段,将扩增产物克隆至pUCM-T,转化感受态菌DH5α,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99.5%。然后将重组质粒和表达载体pET-30a分别以EcoRⅠ、SalⅠ酶切后构建重组表达载体pET-30a-3-1E,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Westernblot检测显示,3-1E基因在大肠杆菌中成功表达;融合蛋白的分子量约为27ku,诱导6h的蛋白表达量可达到47.024%。