节瓜抗镰刀菌酸突变体NBS类RGAs序列的分离鉴定

为挖掘和利用节瓜抗病种质资源,根据已克隆植物NBS-LRR（nucleotide binding site and leucine rich repeat）类抗病基因保守区设计简并引物,从节瓜抗镰刀菌酸突变体＂LT3＂的基因组DNA中扩增得到250 bp目的条带,通过重组克隆及测序获得22条NBS抗病同源序列（命名为JNB1～JNB22）。利用DNAStar软件及NCBI Blastx同源搜索发现,这些抗病同源序列长度为249～250 nt,推导氨基酸序列具有P-loop、Kinase-2a典型NBS类R基因保守结构域,其中21条具连续ORF（open reading frame）;核苷酸序列相似性在48.8%～99.2%,氨基酸序列相似性为18.1%～100.0%;氨基酸序列聚类分析分为6个组。Blast结果显示,节瓜RGAs（resistance gene analogs）核苷酸序列与其他植物R基因最高相似性为72%～99%,对应氨基酸序列与其他植物具有36%～100%相似性,多数序列与冬瓜R基因相似性最高;同源进化分析表明,所有节瓜RGAs序列均为non TIR-NBS-LRR类,与氨基酸序列同源比对结果一致。节瓜NBS类抗病同源序列的分离鉴定为进一步克隆功能性抗病基因及分子标记辅助抗病育种提供参考。