新芋螺毒素SO3的合成优化与折叠关系

用Fmoc/But方法合成了从线纹芋螺中筛选的具有镇痛作用的芋螺多肽SO3,通过对合成中偶合方法及裂解条件的优化,提高了线性肽的合成效率,减少了副产物的形成,使合成的线性肽不仅纯度好,且无需纯化即可用于下一步折叠。

高效液相色谱法考察新芋螺毒素SO3的化学稳定性

采用高效液相色谱法 ,对SO3的干粉和盐水制剂在不同温度下的化学稳定性作了比较。结果显示SO3纯品在 - 2 0℃以下更稳定 ,盐水制剂的稳定性优于干粉制剂。

ω-芋螺毒素SO3对大鼠慢性神经痛镇痛作用及对血清IL-6浓度影响

目的观察持续鞘内注射新型特异性N型电压依赖性钙通道阻滞剂—ω-芋螺毒素SO3对慢性压迫性损伤所致的神经痛大鼠的长期镇痛效果,及其对神经痛大鼠血清IL-6浓度的影响。方法建立大鼠CCI模型,比较观察连续鞘内注射ω-芋螺毒素SO3后大鼠热刺激爪退缩阈值和冷水中抬足次数变化以及血清IL-6水平的改变。结果CCI大鼠术后出现热刺激爪退缩阈值缩短(P<0.01)、冷水中抬足次数增加(P<0.01);血清中IL-6水平明显升高(P<0.01)。持续鞘内注射生理氯化钠溶液对这两种阈值变化以及血清中IL-6水平无明显影响;持续鞘内注射ω-芋螺毒素SO3(60ng/h)能明显提高CCI大鼠热刺激爪退缩阈值(P<0.01),减少冷水中抬足次数(P<0.01);并显著降低血清中IL-6水平(P<0.01)。结论长期持续鞘内注射ω-芋螺毒素SO3可有效地治疗CCI大鼠的冷、热痛觉过敏,并显著降低CCI大鼠血清IL-6浓度。

大鼠转铁蛋白受体单链抗体和芋螺毒素SO3的融合蛋白在大肠杆菌中的表达

人工合成了芋螺毒素SO3的基因片段,通过链延伸方法获得了SO3的全长基因。在此基础上,将SO3基因插入到含抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因的pTIG-Trx表达载体中,构建含抗大鼠转铁蛋白受体单链抗体和SO3融合基因的重组表达载体,转化大肠杆菌BL21穴DE3雪和Origmia穴DE3雪/DsbC并得到了表达,该融合蛋白主要以包涵体形式存在。为进一步研究芋螺毒素SO3跨血脑屏障转运和治疗作用奠定了基础。

芋螺毒素SO3对小鼠中枢神经系统作用的研究

目的 研究芋螺毒素SO3对小鼠中枢神经系统的作用，并探讨其可能的作用机制。方法 观察芋螺毒素SO3脑室给药对小鼠一般行为、自发活动、协调运动及阈下戊巴比妥钠催眠作用的影响，以及阿托品、美加明、酮色林、螺哌酮、地西泮、东莨菪碱预防给药对芋螺毒素SO3脑室注射所致震颤的拮抗作用，探讨其对中枢神经系统影响的可能机制。结果 芋螺毒素SO3（0．75～12μg·kg^-1，icv）引发小鼠剂量依赖性震颤，显著降低小鼠自发活动计数；芋螺毒素SO3（1．5～12μg·kg^-1，icv），造成小鼠显著性运动障碍；芋螺毒素SO3（0．75、1．5μg·kg^-1，icv）对阈下戊巴比妥钠催眠作用有协同作用；阿托品、美加明、东莨菪碱（1-10mg·kg^-1，ip）、地西泮（1、5mg·kg^-1，ip）对芋螺毒素SO3诱发的小鼠震颤无抑制作用；而螺哌酮（1、2．5mg·kg^-1，ip）、酮色林（0．1-1mg·kg^-1）以及高剂量东莨菪碱（20mg·kg^-1，ip）、地西泮（10、20mg·kg^-1，ip）可以显著抑制芋螺毒素SO3诱发的小鼠震颤。结论 芋螺毒素SO3对小鼠神经系统有一定抑制作用，同时伴有剂量依赖性震颤，其机制可能与中枢5-羟色胺系统有关。

鞘内注射ω-芋螺毒素SO_3对神经痛大鼠脊髓Fos及Jun蛋白表达的影响

目的ω-芋螺毒素SO3是从海洋生物线纹芋螺中提取的一种多肽,为新型、特异性N型电压敏感性钙离子通道阻滞剂。通过研究鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对坐骨神经慢性挤压伤(CCI模型)大鼠脊髓Fos、Jun蛋白表达的影响,探讨N型钙通道在伤害性信息传递中的作用。方法雄性SD大鼠72只,随机均分为9组,其中3组为假手术或单纯制作CCI模型后3、14d;3组为单次鞘内注射生理盐水或不同剂量SO3;另3组为持续鞘内注射生理盐水或不同剂量SO3共7d。在预定时间点,经左心室灌注4%多聚甲醛,取L4-L6段脊髓制备石蜡切片。用相应抗体行免疫组织化学染色,检测各组动物脊髓标本中Fos样或Jun样免疫反应阳性细胞的数量。结果大鼠CCI后脊髓背角Fos样或Jun样免疫反应阳性细胞数量显著升高;单次或持续鞘内注射生理盐水对其无明显影响;单次或持续鞘内注射SO3均可剂量依赖性抑制其上升。结论神经损伤后脊髓Fos、Jun蛋白表达增加,鞘内注射SO3可以减轻此种反应,提示N型钙通道阻滞剂在脊髓水平可以部分阻断伤害性信息传递。

鞘内注射ω-芋螺毒素S03对大鼠慢性神经痛的镇痛作用及对DRG细胞内Ca^(2+)含量的影响

目的ω-芋螺毒素SO3是通过分子生物学手段从海洋生物线纹芋螺中提取的一种多肽,为新型、特异性N型电压敏感性钙离子通道阻滞剂。观察鞘内注射(it)ω-芋螺毒素SO3对大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CC I模型)所致神经痛的镇痛作用,以及对背根神经节(DRG)细胞内Ca2+含量的影响。方法♂SD大鼠40只,随机均分为5组,即正常对照组(N组)、CC I后14 d组(C组)、CC I 14 d it生理盐水组(CN组)、CC I 14 d it SO3 600 ng组(CS 1组)和CC I 7 d后连续鞘内注射SO3 30 ng.h-1共7 d组(CS 7组)。观察各组动物热痛觉过敏及机械刺激痛觉异常的反应阈值,并测定DRG细胞内Ca2+含量。结果CC I 14 d时结扎侧与非结扎侧热及机械刺激痛阈值均下降,同时DRG细胞内Ca2+含量也升高。it SO3后,结扎侧及非结扎侧痛阈值均升高,而DRG细胞内Ca2+含量降低。结论it SO3对慢性神经痛有镇痛作用,同时可以抑制CC I引起的DRG细胞内Ca2+含量增加,提示DRG细胞N型Ca2+电流在此伤害性信息传递中起作用。

ω-芋螺毒素SO3溶液构象的核磁共振研究

w-芋螺毒素(w-CTX)是由海洋中的芋螺分泌的一系列毒素中的一种, 能特异地阻断并区分不同的突触前电压敏感型钙离子通道并能抑制神经递质的释放. w -CTX SO3是从中国南海一种食鱼性浅纹芋螺(Conus striatus)的毒液中分离出来的. 通过二维核磁共振技术对w -CTX SO3在水溶液中的氢谱进行了完全指认和结构计算, 确定其溶液构象为由3对二硫键、3股反平行b -折叠、4个b -转角和氢键构成的致密球蛋白. 与其他w-CTX溶液构象的比较指出它们的差别仅在于b -片层长度和b -转角类型不同. w-CTX特异结合钙通道的主链骨架构象具有高度的保守性, 它们结构上的差异暗示在功能上可能具有差异.

NMR谱图图像分析法研究两态动力学

核磁共振（NMR）技术是获取生物大分子溶液构象信息的一种重要手段.利用NMR谱图图像分析方法可以快速方便地获得蛋白质在溶液中构象变化的动力学信息.通过采用ω-芋螺毒素SO3（ω-CTXSO3）作为模型蛋白对图像参数与动力学过程之间的关系进行了详尽的探讨,对图像参数的物理学意义进行了理论阐释.结果显示出图像分析方法在利用NMR技术研究广泛存在的两态动力学过程中具有很大的可靠性、简便性和潜在的优势.