含有D型氨基酸的新型毒肽——芋螺马芬在pH5的溶液结构(英文)

从大理石芋螺毒液中分离得到一种新型的含有D型氨基酸,并属于M超家族的芋螺毒素——芋螺马芬.应用2DNMR方法测定了芋螺马芬在pH5条件下的三维结构,由205个距离约束,8个二面角约束以及两个氢键约束得到了20个最优结构.它们骨架原子的均方根偏差为(0.074±0.029)nm.芋螺马芬在pH5条件下的二级结构是位于C端的一个短的310螺旋,同时在Ala6附近呈一个较为松散的环状区域.将芋螺马芬在pH5以及pH3条件下的溶液结构以及表面电荷进行了比较.尽管芋螺马芬在pH5条件下的溶液结构与在pH3条件下的相比,在C端有一个相似的二级结构单元,但是整体的骨架结构截然不同,在pH5条件下,芋螺马芬的表面结构从正面看起来像一个"曲臂".结构的差异揭示了芋螺马芬对pH相当敏感,预示着它在体内的活性可能与酸度密切相关.

合成芋螺多肽SO3实验动物毒性及依赖性研究

通过对中国南海线纹芋螺毒素的基因克隆并经多肽化学合成,得到了一种含有25个氨基酸残基、3对二硫键的芋螺多肽SO3,并用电生理方法确定其属于N型钙离子通道抑制剂。金鱼采用脊背注射给予4μl不同浓度的药物来观察毒性反应。小鼠按2.5、5、12.5、15、25、62.5、125mg/kg的剂量侧脑室给予10μl药物来测定LD50。大鼠采用脊髓鞘内套管重复给药,剂量为2.0μg/kg,给药体积10μl,用烫尾法及压尾法测定其痛阈反应,观察连续给药15d时大鼠对SO3的药物依赖性。结果表明,当药物量分别为0.5、1.0、3.0、8.5μg时,MⅦA对金鱼的致死率分别为60%、80%、100%和100%,而SO3的致死率均为零。小鼠SO3的LD50为13.5mg/kg。经大鼠15d连续给药,未发现大鼠对SO3有药物依赖性。与进入III期临床的无致瘾镇痛剂MⅦA相比,SO3同样没有药物依赖性,且副作用低。

烟碱受体拮抗剂α-芋螺多肽Eb1．6对L5脊神经切断大鼠热痛阈及脊髓星形胶质细胞和IL-1β表达水平的影响

目的探讨烟碱受体拮抗剂旷芋螺多肽（α—conotoxin，α-CTX）Ebl．6对L5脊神经切断（SNT）大鼠热痛阈（TWL）及脊髓IL-1β表达水平和星形胶质细胞活性的影响。方法180～220g成年雄性SD大鼠50只，随机分为五组：假手术组（N组），SNT后分别腹腔注射α-CTXEb1．60．15nmol／kg组（E1组）、1．5nmol／kg组（E2组）、15nmol／kg组（E3组）和SNT后生理盐水对照组（C组），每组10只。在造模手术术后第7天疼痛模型稳定后开始腹腔注射相应剂量药物或生理盐水，连续用药7d。分别于术后第7天、术后第13天测定各组大鼠给药前、给药后1、2、4、7、12h热缩爪潜伏期（TWL）。于术后第13天行为学测试结束后将各组大鼠处死取L5脊髓组织，以Western blot法测定脊髓星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary Acidic protein，GFAP）表达水平，ELISA法测定脊髓IL-1β表达水平。结果与给药前比较，E1、E2、E3组大鼠第7天给药后1、2、4hTWL明显延长（P〈0．05），给药后2h延长最明显；E1、E2、E3组大鼠第13天给药后1、2、4、7h以及E2、E3组第13天给药后12hTWL明显延长（P〈0．05），且均长于各组第7天相应时点的TWL（P〈0．05），给药后2h延长最明显；与E3组比较，E1、E2组大鼠第7天及第13天给药后2h的TWL明显缩短（P〈0．05）。且E1组明显短于E2组（P〈0．05）。与N组比较，E1、E2、E3组和C组大鼠脊髓IL-1β与GFAP表达水平明显升高（P〈0．05）；与C组比较，E1、E2、E3组脊髓IL-1β与GFAP表达水平明显下降（P〈0．05）；与E3组比较，E1、E2组脊髓IL-1β与GFAP表达水平明显升高（P〈0．05），且E1组明显高于E2组（P〈0．05）。结论腹腔注射Eb1.6能够剂量依赖性地减轻L5脊神经切断大鼠的热痛敏且连续用药能够增强其镇痛效果。其镇痛作用可能与抑制脊髓背角星形胶质细胞活化、降低IL-1β表达水平有一定关系。

芋螺睡眠肽结构和功能研究进展

芋螺睡眠肽是一类与众不同的芋螺毒素,一级结构有高度同源性,它含有丰富的γ-羧基谷氨酸,和其他类芋螺毒素不同的是一般不含二硫键(除了芋螺睡眠肽-R),在结合金属离子后,构像中α-螺旋结构的成分会有不同程度地增加。芋螺睡眠肽是一类非竞争性的N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体的选择性抑制剂,并且具有受体亚型特异性,颅内注射芋螺睡眠肽后,实验鼠会呈现一种睡眠样症状。序列及结构分析显示,正是芋螺睡眠肽序列中高度保守的氨基酸残基决定了它们的结构及功能,文中对其结构和功能的关系作了综合分析。

芋螺多肽及其突变体对小鼠吗啡身体依赖发展的抑制作用

目的:评价N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体抑制剂芋螺多肽Con-G、Con-T及其突变体对小鼠吗啡身体依赖发展的抑制作用。方法:每天8:30和16:30在小鼠皮下注射吗啡30mg/kg,连续3d,形成吗啡身体依赖模型;第1d和第3d16:30给完吗啡30min后,侧脑室给予15nmol/kg的Con-G、Con-T或其突变体;第4d8:30注射纳洛酮催促戒断,测定小鼠10min内的跳跃次数。结果:Con-G突变体中,Con-G[S16Y]抑制小鼠吗啡身体依赖发展的活性显著提高,Con-G[Q6A]活性与Con-G相似,Con-G[N8A]和Con-G[γ14A]无活性,Con-G[γ10K]活性较弱。Con-T突变体中,Con-T[M8I]、Con-T[M8A]抑制小鼠吗啡身体依赖发展及急性戒断活性活性最强,Con-T[R13A]、Con-T[γ14A]、Con-T[M8F]及Con-T[M8N]有明显活性,Con-T[L9A]和Con-T[γ10A]活性低。结论:一些Con-G及Con-T突变体对小鼠吗啡身体依赖发展具有很强的活性,活性强弱与其对NMDA受体NR2B的活性及选择性相关。

芋螺多肽AuIB对小鼠骨癌痛的影响及其作用机制

目的探讨芋螺多肽AuIB在骨癌痛小鼠中的镇痛作用及其可能的作用机制。方法将36只C57BL/6小鼠随机分成假手术组(SHAM组)、骨癌痛组(BCP组)、生理盐水对照组(NS组)、低剂量(0.6 mg/kg)AuIB给药组(AuIB1组)、中剂量(1.2 mg/kg)AuIB给药组(AuIB2组)和高剂量(2.4 mg/kg)AuIB给药组(AuIB3组)。术后第14天利用X影像和HE染色观察小鼠股骨病理学变化情况;分别于癌细胞接种前1 d以及接种后3 d、5 d、7 d、11 d和14 d时检测机械缩足阈值;Western blot法检测脊髓L4-L5段背根神经节和大脑皮层组织中PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达水平。结果与SHAM组相比,术后14 d BCP组的X影像提示骨质破坏,HE染色提示癌细胞浸润;与SHAM组相比,术后第7天起BCP组的机械缩足阈值明显降低(P<0.05);与BCP组相比,AuIB1组、AuIB2组和AuIB3组分别在术后第14 d、11 d和7 d出现机械缩足阈值明显升高(均P<0.05);与BCP组相比,AuIB3组背根神经节和大脑皮层组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比例显著减少(均P<0.05)。结论芋螺多肽AuIB可减轻骨癌痛小鼠的机械痛行为,作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

SO3——一种新型具镇痛活性的芋螺多肽

目的 :通过对中国南海线纹芋螺毒素的基因克隆、多肽的化学合成及大量筛选 ,获得一种具有镇痛作用的芋螺多肽SO3。该肽含有 2 5个氨基酸残基CKAAGKPCSRIATNCCTGSCRSGKC NH2 ,三对二硫键 ,其作用靶位为N型钙通道。方法 :小鼠采用侧脑室给药 ,每只 2 0 μl。小鼠镇痛活性采用热板法、光热辐射法及扭体法测定。大鼠采用脊髓鞘内套管给药 ,每只 10 μl,大鼠镇痛活性采用烫尾法及尾部压痛法。结果 :生物活性测定表明该肽对小鼠的镇痛活性ED50 为 0 .75 μg/kg ,对小鼠的急性毒性试验LD50 为 13.5mg/kg。LD50 比ED50 大 180 0 0倍 ,具有很高的用药安全性。结论 :与国外已进入Ⅱ～Ⅲ期临床实验的ω 芋螺毒素MVIIA进行对照实验的结果表明两者活性相当 ,SO3毒副作用更低 ,而且作用靶位与MVIIA类似 ,无成瘾性。

芋螺镇痛多肽研究进展

芋螺多肽由芋螺毒液管和毒囊内壁的毒腺所分泌,大多数芋螺多肽由10～40个氨基酸残基组成,且富含二硫键,能特异性作用于乙酰胆碱受体(nAChR),及钙、钠、钾等多种离子通道亚型。目前已发现作用于N-型钙通道、nAChR的α9α10亚基、TTX-R钠通道、NMDA受体的芋螺多肽具有很强的镇痛活性,其中N-型钙通道抑制剂ω-MVIIA已于2004年上市。该类镇痛多肽具有相对分子质量小、结构稳定、活性及选择性高等特点。芋螺镇痛多肽不仅会成为镇痛机制等相关神经生物学研究的重要工具,也会为开发新一代无致瘾镇痛药起到重要作用。本文对芋螺镇痛多肽研究的最新进展予以评述,着重介绍芋螺镇痛多肽的作用靶位、构效关系及其应用进展。

芋螺多肽Eb1.6的制备工艺研究

目的研究α-芋螺多肽Eb1.6的制备工艺,为其临床前实验奠定基础。方法采用Fmoc保护氨基酸,以Rink树脂为固相载体,N,N-二异丙基碳二酰亚胺(DIC)/1-羟基苯并三唑(HOBt)为缩合剂,手工固相法规模合成目标肽。线性肽折叠采用空气氧化法,将线性肽按0.2 mg/ml的浓度溶于0.1 mol/L NH4HCO3缓冲液中,室温下搅拌16～24 h。折叠结束后,加入Amberlite XAD16大孔吸附树脂富集,树脂用乙醇浸洗,旋转蒸发浓缩得折叠后粗品,然后进行反相纯化。结果 Eb1.6线性肽的粗产率为94.6%,Eb1.6折叠肽粗品的回收率为82.3%,粗品经C18反相纯化后纯度高于98.5%。结论以DIC/HOBt为缩合剂合成Eb1.6的纯度及产率均较高,Eb1.6折叠后用吸附树脂富集,乙醇浸泡再释放多肽,可实现缓冲体系及树脂的反复循环,降低了成本。

靶向烟碱型乙酰胆碱受体的芋螺毒素研究进展

芋螺毒素是由海洋肉食性芋螺所分泌的用于捕杀猎物的高活性生物多肽类毒素,据估计,全世界范围内约含100万种不同的芋螺毒素,按照保守的信号区可分为A、B2、C、D、O、M、T等27个超家族。不同家族的芋螺毒素能够特异性的靶向各种离子通道和受体,因而成为了具有潜在药用价值的先导化合物和研究神经药理学的分子探针。当前报道的靶向烟碱型乙酰胆碱受体的芋螺毒素来自10个超家族,分别为A、B3、C、D、J、L、S、O1、M和T。本文对这10个超家族中靶向烟碱型乙酰胆碱受体的芋螺毒素的序列、结构及功能进行综述。

信息

壳聚糖酶生产菌及低聚壳聚糖的生产方法；一种制造新琼八糖、新琼十糖和新琼十二糖的方法；一种海洋芽孢杆菌生产抗真菌抗生素的发酵方法；海藻中提取铁超氧化物歧化酶的方法；一种海洋绿藻两步法生物光解水制氢方法；深海远古生物基因免疫调控酒及其生产方法；海洋芋螺镇痛多肽的制备方法。

新型镇痛多肽Eb1.6的含量及有关物质检测

目的:建立一种适用于新型alpha芋螺镇痛多肽Eb1.6含量及有关物质的分析方法,以及其水分和乙酸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定Eb1.6原料药中Eb1.6的含量。使用Zorbax XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为含0.1%三氟乙酸(TFA)的水,流动相B为含0.1%TFA的乙腈,梯度洗脱,流速1 m L·min-1,检测波长214 nm,柱温25℃;采用卡尔菲休库仑滴定法及高效液相色谱法测定样品中水分及乙酸含量。结果:3批Eb1.6原料药中Eb1.6含量范围在(98.85±0.63)%^(99.04±0.33)%之间(按无水物计算),总有关物质含量在0.45%~0.84%之间,样品中水分含量在(1.23±0.32)%^(2.23±0.23)%之间,乙酸含量在(11.16±0.08)%^(12.66±0.03)%之间。结论:该方法快速简便,结果准确可靠,可用于Eb1.6的质量分析。