CXCL12/CXCR4在佐剂性关节炎大鼠脾脏中的表达及芍药苷-6′-O-苯磺酸酯的作用

目的观察CXCL12及其受体CXCR4在佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠脾脏中的表达,以及芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(CP-25)对其的影响。方法完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)诱导AA模型,随机分为正常对照组、模型组、CP-25(50 mg·kg^(-1))组和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX,0.5 mg·kg^(-1))组。造模后d 14~28给药。HE染色观察脾脏的病理情况;免疫组化法和ELISA法检测脾脏中CXCL12的表达;免疫组化法和Western blot法检测脾脏CXCR4的表达。结果与正常对照组相比,AA大鼠脾脏动脉周围淋巴鞘的细胞密度增加,淋巴小结增多,脾脏中CXCL12和CXCR4表达增加;CP-25可以明显减少AA大鼠脾脏动脉周围淋巴鞘的细胞密度,改善淋巴小结增生,下调脾脏中CXCL12和CXCR4表达,且CXCL12和CXCR4表达与脾脏病理呈正相关。结论 AA大鼠脾脏CXCL12和CXCR4的高表达与脾脏病理改变有关,CP-25减少AA大鼠脾脏中CXCL12和CXCR4的表达可能是其发挥抗炎免疫调节作用的机制之一。

芍药苷-6′-O-苯磺酸酯对胰岛素抵抗HASMC作用及机制

目的探讨芍药苷-6′-O-苯磺酸酯(CP-25)对胰岛素抵抗人主动脉平滑肌细胞(HASMC)的作用及部分机制。方法1μmol/L胰岛素诱导建立胰岛素抵抗HASMC模型;葡萄糖氧化酶法检测CP-25对胰岛素抵抗HASMC葡萄糖消耗量的影响;CCK-8法、Transwell、流式细胞术检测细胞的增殖、迁移和凋亡变化;Western blot法测定G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)、胰岛素受体(INSR)、磷酸化胰岛素受体底物(p-IRS)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达;免疫共沉淀法测定GRK2与INSR、GRK2与p-IRS的相互作用。结果与胰岛素模型组相比,CP-25可增加HASMC的葡萄糖消耗,抑制其异常增殖和迁移、促进凋亡;1μmol/L胰岛素作用细胞后,CP-25下调胰岛素所致的GRK2的胞膜表达增高,上调IR-HASMC时INSR、p-IRS、PI3K的表达和GLUT4的胞膜表达;CP-25下调IR-HASMC时增高的GRK2与INSR、GRK2与p-IRS的共表达。结论CP-25可能通过抑制GRK2的膜转位和表达水平,促进INSR/IRS/PI3K/GLUT4信号通路的活化,改善HASMC的胰岛素抵抗。

芍药苷-6'-O-苯磺酸酯在甲醇中降解杂质结构解析和降解机制研究

目的:探究芍药苷-6’-O-苯磺酸酯在甲醇中的降解杂质,确证其结构,阐明降解机理。方法:将芍药苷-6’-O-苯磺酸酯溶于甲醇中,在加热的条件下生成降解杂质,通过硅胶柱层析和制备液相分离得到2个降解杂质,采用核磁共振、红外、质谱等技术确证杂质的结构,并对其降解机理进行推理。结果:鉴定了2个降解杂质结构,推测出芍药苷-6’-O-苯磺酸酯在甲醇中的降解机理。结论:为芍药苷-6’-O-苯磺酸酯的杂质研究提供了物质基础,同时也为其工艺路线的选择、分析方法开发以及质量研究与控制提供较为科学的依据。

顶空-气相色谱法测定芍药苷-6'-O-苯磺酸酯中的残留溶剂

目的:建立顶空-气相色谱法测定芍药苷-6’-O-苯磺酸酯中的6种残留溶剂的测定方法。方法:采用顶空-气相色谱法,HP-INNOWAX(0.530 mm×30 m,1μm)石英毛细管柱,氢火焰离子化检测器,载气为氮气,流速5 mL/min;柱温为程序升温,进样口温度为120℃,检测器温度260℃。顶空进样条件:顶空平衡时间为30 min,平衡温度80℃,定量环温度95℃,传输线温度90℃。结果:测定的6种有机溶剂完全分离,在相应浓度范围内线性关系良好。甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷、乙酸乙酯和碳酸二甲酯的定量限分别是10.0 mg/kg,5.0 mg/kg,1.0 mg/kg,1.5 mg/kg,1.0 mg/kg和5.0 mg/kg,检测限分别是3.0 mg/kg,1.5 mg/kg,0.3 mg/kg,0.45 mg/kg,0.3 mg/kg和1.5 mg/kg。加标回收率、精密度、重复性和耐用性的RSD均小于10%。结论:本方法可以较好地用于测定芍药苷-6’-O-苯磺酸酯中的残留溶剂,对芍药苷-6’-O-苯磺酸酯的质量控制提供了科学依据。

芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过TLR-4/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:CCK-8实验检测人卵巢癌细胞A2780、SK-OV-3、HO8910及正常卵巢细胞HOSEpiC的活性。A2780细胞分为对照组(0.01%二甲基亚砜)、CP-25低(0.5 mg/ml CP-25)、中(1 mg/ml CP-25)、高(2 mg/ml CP-25)浓度组和CP-25高浓度+LPS组(2 mg/ml CP-25和0.1μg/ml TLR-4激活剂LPS)。CCK-8和克隆形成实验评估细胞增殖能力;流式细胞术和TUNEL染色分析细胞凋亡情况;Western blot分析增殖蛋白Ki67、凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-3、Caspase-3、Bax、Bcl-2)、TLR-4、p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达水平;免疫荧光染色观察TLR-4、NF-κB p65蛋白表达。结果:与HOSEpiC细胞相比,A2780、SK-OV-3、HO8910细胞活性随CP-25浓度增加而逐渐减弱(P<0.05),且CP-25在低、中、高浓度下对A2780细胞的生长有50%左右的抑制作用,故采用A2780细胞进行实验。与对照组相比,CP-25低、中、高浓度组A2780细胞克隆形成率显著下降,细胞凋亡率和凋亡指数明显上升,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平显著降低,Cleaved caspase-3/Caspase-3、Bax表达显著升高(P<0.05),且呈现浓度依赖性。与CP-25高浓度组相比,CP-25高浓度+LPS组细胞活性、克隆形成率明显升高,细胞凋亡率和凋亡指数明显降低,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平明显升高,Cleaved caspase-3/Caspase-3和Bax表达明显降低(P<0.05)。结论:CP-25通过抑制TLR-4/NF-κB信号通路抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡。

芍药苷-6-O′-苯磺酸酯在Caco-2细胞模型中吸收机制研究

目的考察芍药苷-6-O'-苯磺酸酯(代号CP-25)在Caco-2细胞模型中吸收和转运机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,建立高效液相色谱方法(HPLC)测定细胞模型中顶端侧(AP侧)和基底侧(BL侧)中CP-25的浓度并计算表观渗透系数(Papp)和表观渗透比(PDR);考察不同浓度和温度对CP-25转运的影响;分别考察P-糖蛋白(P-gp)抑制剂GF120918、多药耐药蛋白2(MRP2)抑制剂MK571和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)抑制剂KO143对CP-25在Caco-2细胞吸收的影响。结果 CP-25(5、10、20μg/ml)从AP侧到BL侧的Papp值随着浓度的增加而增加;在2、5、10、20μg/ml浓度范围内,CP-25的吸收随着浓度的增加而增加,各浓度CP-25 PDR值均小于1. 5;在4℃条件下,CP-25 Papp值与37℃条件下的Papp值相比显著降低; GF-120918和MK571可显著降低CP-25从BL侧到AP侧的Papp值,显著提高从AP侧到BL侧的Papp值; KO143对CP-25双向转运Papp值无影响。结论 CP-25主要吸收机制是被动转运,可能存在主动转运的参与; CP-25是P-gp、MRP2的底物,但并不是BCRP转运蛋白的底物。

芍药苷-6-O'-苯磺酸酯理化性质研究

目的考察芍药苷-6-O'-苯磺酸酯(代号CP-25)的理化性质。方法 CP-25理化性质以外观性状、Lieberman-Burchard反应、薄层色谱图、紫外吸收光谱、溶解度和稳定性进行评价;CP-25含量采用高效液相色谱法进行测定。结果CP-25具有萜类化合物特征颜色反应;其最大紫外吸收波长为220 nm;CP-25在水和石油醚中均微溶;影响其稳定性的主要因素是湿度。结论当前考察的CP-25理化性质为其质量标准制定和制剂设计提供一定实验依据。

芍药苷-6-O'-苯磺酸酯体外降解动力学研究

目的考察芍药苷-6-O'-苯磺酸酯(CP-25)体外降解动力学。方法制备大鼠肝匀浆液和肠匀浆液,采用高效液相色谱法(HPLC)法测定匀浆液中CP-25的浓度。结果CP-25在肝匀浆液和肠匀浆液中均显著降解,降解半衰期随匀浆液浓度升高而显著降低;肠道不同区段匀浆液对CP-25代谢作用有差异,十二指肠和结肠代谢作用相对较弱,空肠和回肠相对较强。结论 CP-25口服给药受到小肠和肝脏双重首过消除,通过合适的药物制剂可能会进一步提高CP-25口服吸收。

PGE_(2)通过EP4/PKA信号通路调控滑膜细胞OAT1的表达及CP-25的作用

目的明确前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE_(2))对滑膜细胞有机阴离子转运体1(organic anion transporter 1,OAT1)膜表达的调控机制及芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(CP-25)的作用。方法免疫荧光法检测不同浓度CP-25对PGE_(2)处理后滑膜细胞OAT1和前列腺素E受体4(prostaglandin E receptor 4,EP4)表达的影响;使用EP4激动剂(TCS2510)与拮抗剂(GW627368X),探究EP4在OAT1调节中的作用;使用CP-25和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂H-89,探究CP-25和PKA对滑膜细胞OAT1表达的影响。结果PGE_(2)在0~10 min内明显下调EP4与OAT1的膜表达,20~60 min后明显上调(P<0.05);CP-25明显上调PGE_(2)处理后细胞膜OAT1和EP4的表达(P<0.05);EP4激动剂TCS2510明显上调细胞膜OAT1的表达(P<0.01);CP-25上调PGE_(2)处理的细胞中OAT1的表达,GW627368X和H-89均能下调PGE_(2)和CP-25处理的滑膜细胞中OAT1的表达(P<0.01)。结论PGE_(2)介导的EP4/PKA信号通路可以调控OAT1在滑膜细胞膜上的表达,CP-25可以通过活化EP4/PKA信号通路明显上调滑膜细胞中OAT1的膜表达。

CP-25对大鼠胶原性关节炎OAT1的调控作用及机制

目的 明确胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜有机阴离子转运蛋白1(organic anion transporter^(-1),OAT1)的表达变化及芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(paeoniflorin-6'-O-benzenesulfonate,CP-25)的作用,并初步探讨其可能的调控机制。方法 建立大鼠CIA模型,给予CP-25、帕罗西汀、前列腺素E受体4 (prostaglandin E receptor 4,EP4)拮抗剂或CP-25+EP4拮抗剂联用治疗,甲氨蝶呤为阳性对照药。测量足爪容积,进行全身及关节炎指数评分,计算关节肿胀数,进行足爪X线摄片、踝关节病理检查及评分。ELISA测定血清前列腺素E_(2) (prostaglandin E_(2),PGE_(2))水平;Western blot测定CP-25用药后大鼠滑膜组织膜蛋白及总蛋白表达水平。结果 CP-25可减轻CIA大鼠足爪肿胀情况,降低CIA大鼠全身评分、关节炎指数、足爪容积和肿胀关节数,能明显缓解CIA大鼠组织病理学改变及骨侵蚀程度。此外,CP-25能降低CIA大鼠血清PGE_(2)浓度。CIA大鼠滑膜组织OAT1和EP4膜表达均下调,CP-25或帕罗西汀处理增加了OAT1和EP4的表达水平,而EP4拮抗剂可抑制CP-25对OAT1的影响。此外,CIA模型大鼠滑膜组织p-GRK2表达上调;CP-25或帕罗西汀干预后p-GRK2表达均降低;PKA的表达趋势与OAT1相似。结论 OAT1在CIA大鼠滑膜组织中膜表达降低,CP-25治疗可上调OAT1的表达。PGE_(2)-EP4-PKA信号通路可能参与了CP-25对OAT1的调控。

生藤中新甾体皂苷衍生物的结构鉴定

目的 研究生藤的化学成分。方法 利用各种色谱技术分离纯化 ,通过理化常数测定和波谱方法鉴定其结构。结果 从生藤茎的 95 %Et OH提取物中分离得到 7个化合物 ,其结构经波谱等方法鉴定为 β-谷甾醇 - 3- O- β- D-葡萄糖苷 - 6′- O-二十烷酸酯 ( ) ,2α,3β,2 3-三羟基 -齐墩果 - 12 -烯 - 2 8-酸 ( ) ,2α,3β,2 3-三羟基 -乌苏 - 12 -烯 - 2 8-酸( ) ,β-谷甾醇 - 3- O- β- D-葡萄糖苷 ( ) ,硬脂酸 ( ) ,葡萄糖 ( )和蔗糖 ( )。结论 所有化合物均为首次从该植物中分离得到 ,其中化合物 为 1新化合物。

中药白头翁地上部分的三萜皂苷成分

为了研究白头翁地上部分的三萜皂苷成分,采用不同色谱技术对白头翁地上部分乙醇提取物的正丁醇部位进行分离纯化,并用波谱和化学方法鉴定化合物的结构.从正丁醇部位中共分离得到7个三萜皂苷类化合物,其结构分别被鉴定为2β-羟基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→4）-β-D-吡喃葡糖（1→6）-β-D-吡喃葡糖酯苷（1）、3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→4）-β-D-吡喃葡糖（1→6）-β-D-吡喃葡糖酯苷（2）、3-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→4）-β-D-吡喃葡糖（1→6）-β-D-吡喃葡糖酯苷（3）、3-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→2）[β-D-吡喃葡糖（1→4）]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→4）-β-D-吡喃葡糖（1→6）-β-D-吡喃葡糖酯苷（4）、3-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→4）-β-D-吡喃葡糖（1→6）-β-D-吡喃葡糖酯苷（5）、常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→4）-β-D-吡喃葡糖（1→6）-β-D-吡喃葡糖酯苷（6）及常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（7）.其中化合物1为新化合物,化合物2～6为首次从该植物中分离得到.

樱草杜鹃中一个新的葡萄糖基苯甲酸酯类成分(英文)

目的:研究樱草杜鹃(Rhododendron primulaeflorum)的干燥地上部分的化学成分。方法:应用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20柱色谱,制备高效液相色谱等方法分离和纯化化合物, 通过光谱方法及理化性质鉴定化合物的结构。结果:从樱草杜鹃中分离得到1个新化合物,鉴定为2-羟基-6-甲基苯甲酸甲酯4-O-β-D-葡萄糖苷(1),及苔色酸甲酯(2)。结论:从该植物中分得一个新化合物,丰富了樱草杜鹃的化学成分。

高效液相色谱法同时测定时行感冒1号方合剂中6种有效成分含量

目的建立和优化了时行感冒1号方合剂中6种有效成分的含量测定方法,为该中药复方制剂的质量控制提供方法依据。方法采用Agilent C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长203 nm。结果葛根素、芍药苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、桂皮醛、6-姜辣素的质量浓度分别在19.19~191.94μg/mL、9.80~98.04μg/mL、1.10~22.08μg/mL、1.07~21.40μg/mL、1.14~22.87μg/mL和1.09~21.74μg/mL内呈良好的线性关系(均r≥0.9997),6种成分方法回收率均符合含量测定要求。结论该方法简便快捷,灵敏度和准确度较高,适用于时行感冒1号方合剂的质量控制。

反相HPLC同时测定白花蛇舌草口服液中4种组分含量

目的：建立反相HPLC同时测定白花蛇舌草口服液中3，4-二羟基苯甲酸甲酯（Ⅰ）、对香豆酸（Ⅱ）、阿魏酸（Ⅲ）和反式6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯（Ⅳ）的含量。方法：采用Diamonsil^TM C18柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相A乙腈，B甲醇-水-冰醋酸（5：95：0.25），梯度洗脱：0～20min，1％～16％A；20～42min，16％A；42～46min，16％～20％A；46～65min，20％A。检测波长265nm；流速1．0mL·min^-1。结果：Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ与Ⅳ分别在2．1～105（r=0．9998），3．5～175（r=0．9998），1．72～86（r=0．9999），4．0～200mg·L^-1（r=1．0000）线性关系良好，方法平均回收率分别为99．9％，97．9％，98．6％，98．1％。结论：方法简便快速、准确度高，可用于白花蛇舌草口服液中4种组分的同时测定。

壮药九层风化学成分研究

目的研究壮药九层风化学成分。方法采用硅胶吸附色谱法、重结晶等现代分离方法和技术对其石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部位化学成分进行分离和纯化,所得单体化合物利用其理化性质及MS、1H-NMR、13C-NMR等波谱方法进行结构鉴定。结果从九层风石油醚,乙酸乙酯和正丁醇部位共分离得到9个化合物,分别鉴定为:正三十一烷烃(I),α-波甾醇(II),豆甾醇(III),β-谷甾醇(IV),油酸(V),正二十四烷酸(Ⅵ),α-波甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷-6/-十七酸酯(Ⅶ),正十六烷酸(Ⅷ),丝石竹皂苷元(Ⅸ)。结论上述化合物均为首次从该植物中分离得到。

苗药金铁锁的薄层色谱研究

目的:建立苗药金铁锁的薄层色谱鉴别方法。方法:金铁锁药材经不同溶剂提取后,以氯仿:甲醇=10∶1(体积比)为展开系统,对金铁锁药材中α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷和α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷-6′-O-棕榈酸酯作定性鉴别。结果:采用此法检测,斑点清晰,分离效果好。结论:建立了一种快速、有效的金铁锁的薄层色谱鉴别方法。

丁香中的一个新没食子酸酯酚苷(英文)

目的:对丁香花蕾部分的化学成分进行研究。方法:采用柱层析方法分离纯化,通过理化性质和波谱分析确定化合物结构。结果:分离鉴定了1个没食子酸酯酚苷,命名为methyl2-O-(6’-O-galloyl)-β-D-glucopyranosylbenzoate。结论:化合物1为新化合物。

星宿菜的黄酮类化学成分

为了解星宿菜(Lysimachia fortunei Maxim.)的化学成分,利用溶剂萃取和色谱分离手段,从星宿菜全草的乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到了5个黄酮类化合物。经波谱分析及与文献数据对照,分别鉴定为:槲皮素(1)、异鼠李素-3-O-(6-香豆酸酯)-β-D-葡萄糖苷(2)、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷(3)、金丝桃苷(4)和山奈酚-3-O-[6-(3-羟基-3-甲基戊二酸单酯)]-β-D-葡萄糖苷(5),其中化合物2和5为首次从珍珠菜属植物中分离获得。

HPLC法同时测定大黄药材中8个非蒽醌类成分的含量

目的:建立同时测定大黄药材中8个非蒽醌类成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Symmetry C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0mL/min,柱温为30℃,检测波长为280nm,进样量为30μL。结果:没食子酸、儿茶素、表儿茶素、白藜芦醇4′-O-葡萄糖苷、表儿茶素没食子酸酯、白藜芦醇4′-O-β-D(- 6″-O-没食子酰)-葡萄糖苷、番泻苷A、4′-羟基苯基-2-丁酮-4′-O-β-D(- 2″-O-没食子酰-6″-O-对羟基桂皮酰)-葡萄糖苷检测进样量的线性范围分别为6.16~2 464 ng(r=0.999 9)、37.4~14 960 ng(r=0.999 9)、7.635~3 054 ng(r=0.999 7)、7.63~3 052 ng(r=0.999 9)、8.32~3 328 ng(r=0.999 9)、11.5~4 600 ng(r=0.999 9)、16.08~6 432 ng(r=0.999 9)、29.3~11 720 ng(r=0.999 9);定量限分别为3.48、4.30、6.40、4.40、3.39、2.87、8.40、4.95ng,检测限分别为2.32、2.58、2.40、2.64、2.26、1.23、4.20、2.97ng;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于5%;加样回收率分别为94.32%~100.54%(RSD=2.78%,n=6)、91.15%~99.36%(RSD=3.72%,n=6)、92.16%~98.04%(RSD=2.39%,n=6)、93.41%~100.73%(RSD=3.17%,n=6)、93.89%~98.40%(RSD=1.99%,n=6)、92.61%~101.74%(RSD=3.71%,n=6)、92.66%~103.40%(RSD=3.76%,n=6)、95.45%~102.70%(RSD=3.06%,n=6)。结论:所建方法简便、准确、专属性强,可用于同时测定大黄药材中8个非蒽醌类成分的含量。