芒柄花黄素通过DRP1-NLRP3信号通路缓解过敏性哮喘的作用机制

目的本研究旨在探讨芒柄花黄素(formononetin,FN)通过干预ROS的生成抑制线粒体动力相关蛋白1(dynamic-related protein 1,DRP1)-NLRP3轴减轻过敏性气道炎症的有关机制。方法为建立过敏性哮喘小鼠模型,50只8周龄的BALB/c小鼠通过卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导后分为对照组、模型组、FN治疗组及地塞米松组。采用HE和Masson染色检测气道炎症和胶原沉积,ELISA测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中Th2型细胞因子和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)以及IgE水平,DCFH-DA染色评估BEAS-2B细胞中ROS,免疫组织化学和免疫荧光检测肺组织和BEAS-2B细胞中DRP1表达,免疫印迹分析DRP1-NLRP3途径。结果FN治疗可有效改善哮喘小鼠模型的症状,包括减少嗜酸性粒细胞聚集、气道胶原沉积,降低Th2细胞因子和IgE水平,减少ROS和MDA生成,提高SOD和CAT活性,并调节DRP1-NLRP3途径相关蛋白表达,从而缓解炎症。结论FN通过调节DRP1-NLRP3途径改善哮喘气道炎症。

芒柄花黄素对裸鼠人胃癌细胞SGC7901移植瘤生长的影响及其机制

目的 :探究芒柄花黄素(Form onone tin,Form)对注射人胃癌细胞系SGC7901细胞悬液裸鼠的保护作用和具体机制。方法:建模成功后将裸鼠分为对照组,低、中、高浓度(10、20、40 mg/kg)芒柄花黄素处理组。观察皮下肿瘤,称量湿重,计算出肿瘤湿重抑制率及体积抑制率。Western blot法检测β-catenin、p-β-catenin、CyclinD1、CDK4以及p-Akt、Akt、Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的相对表达量;免疫组织化学方法测定各组裸鼠肿瘤组织中β-catenin、p-β-catenin、CyclinD1、CDK4、Caspase 3、Caspase 9蛋白表达情况。结果 :免疫组织化学方法结果显示β-cate nin、p-β-cate nin、CyclinD1、CDK4表达情况随Form干预浓度增加而减弱;Caspase3、Caspase 9表达随Form干预浓度增加而增强。Western blot结果显示β-Catenin、p-β-Catenin、CyclinD1、CDK4以及p-Akt、Akt、Bcl-2等蛋白的相对表达量随Form干预浓度增加而降低;Caspase3、Bax等蛋白的相对表达量随Form干预浓度增加而上升。结论:Form可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制胃癌细胞的增殖,同时还可以上调Caspase3来促进胃癌细胞的凋亡。

芒柄花黄素对人胃癌细胞系SGC7901生长、增殖及侵袭影响

目的:探讨芒柄花黄素(Form)对人胃癌细胞株SGC7901的作用及机制。方法:用不同浓度(0、20、40、80μmol/L)Form处理SGC7901后,采用Hoechst、MTT、流式细胞术等检测细胞抑制率、细胞周期、细胞核形态及凋亡。采用蛋白质印迹检测β-Catenin、p-β-Catenin、Cyclin D1、CDK4及p-AKT、AKT、BCL-2、BAX、Caspase3等蛋白的表达,RT-PCR检测BCL-2、CDK4、CDK6、AKT、Cyclin D1及BAX、Caspase3等m RNA表达。结果:Form抑制SGC7901细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性。Hoechst结果表明,相比于对照组(0μmol/L),实验组Form(20、40、80μmol/L)作用48 h后,细胞核固缩、溶解,破裂后呈颗粒状聚集。流式细胞术结果显示,不同浓度Form处理48 h,细胞凋亡率分别为17.0%、21.5%、32.5%,呈浓度依赖性。RT-PCR结果显示,SGC7901中Caspase3、BAX m RNA表达量随Form浓度增加而上升(P<0.01);BCL-2、CDK4、CDK6、AKT、Cyclin D1的m RNA表达量逐渐降低(P<0.01)。WB结果表明,SGC7901细胞中β-Catenin、p-β-Catenin、Cyclin D1、CDK4以及p-AKT、AKT、BCL-2等蛋白的相对表达量随Form浓度增加而降低(P<0.01);Caspase3、BAX等蛋白表达逐渐上升(P<0.01)。结论:Form具有促进SGC7901细胞凋亡的作用;其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号,活化Caspase家族实现的。

芒柄花黄素通过HNF4A抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的分析芒柄花黄素(formononetin,FORM)通过肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4A)抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法使用不同浓度的芒柄花黄素处理EC109和KYSE510,利用CCK8检测细胞相对存活率和细胞的增殖,利用细胞克隆实验培养癌细胞,并检测加入芒柄花黄素前后细胞克隆数量,利用Transwell检测加入芒柄花黄素前后EC109和KYSE510细胞的迁移和侵袭。裸鼠皮下注射肿瘤细胞,加入芒柄花黄素,观察移植瘤体积和重量变化,并利用免疫组化检测移植瘤组织中Ki67蛋白表达。采用蛋白质印迹法检测芒柄花黄素对HNF4A基因表达的影响。构建稳定过表达HNF4A的EC109和KYSE510细胞系,加入芒柄花黄素,观察HNF4A的表达情况。结果加入芒柄花黄素后,EC109和KYSE510的细胞相对存活率明显降低(P<0.05),与0μmol/L芒柄花黄素作用比较,EC109细胞系在芒柄花黄素浓度≥150μmol/L时,细胞相对存活率降低显著(P<0.05),KYSE510细胞系在芒柄花黄素浓度≥120μmol/L时,细胞相对存活率降低显著(P<0.05);芒柄花黄素组EC109和KYSE510增殖、侵袭、迁移的细胞数量均明显低于对照组(P<0.05)。移植瘤体积和重量明显低于对照组(P<0.05),Ki67蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。随着芒柄花黄素浓度越高、作用时间越久,HNF4A蛋白表达下调更为明显。HNF4A过表达可以恢复芒柄花黄素抑制的细胞增殖、侵袭和迁移(P<0.05)。结论芒柄花黄素通过HNF4A抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。

芒柄花黄素调控miR-182/FOXO3轴对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨芒柄花黄素(FM)对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的影响,以及其作用机制。方法用0、12.5、25.0、50.0、100、200μmol/L FM处理人子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率;取生长状态良好的Ishikawa细胞,分别用25.0、50.0、100μmol/L FM处理,并命名为FM-L组、FM-M组、FM-H组,另取未处理的Ishikawa细胞作为对照组;利用细胞转染技术对处于对数生长期的Ishikawa细胞进行转染,分为miR-182 mimics组、miR-NC组、miR-182 inhibitor组、miR-NC inhibitor组、pcDNA-FOXO3组、pcDNA组,将miR-NC、miR-182 mimics转染Ishikawa细胞后再用100μmol/L FM处理,记为FM+miR-NC组、FM+miR-182 mimics组;Transwell测定细胞迁移及侵袭;Western Blot检测细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、叉头转录因子O亚型3(FOXO3)蛋白表达;RT-PCR检测细胞中miR-182表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-182与FOXO3的靶向关系。结果与0μmol/L FM相比,12.5μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L FM均可促进Ishikawa细胞凋亡,且25.0μmol/L、50.0μmol/L、100μmol/L FM对Ishikawa细胞凋亡的促进作用最显著;与对照组比较,FM-L组、FM-M组和FM-H组的Ishikawa细胞迁移及侵袭数目、MMP-2及MMP-9蛋白和miR-182表达水平显著降低,FOXO3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且FM浓度越高,对应的变化趋势越明显;miR-182可靶向负调控FOXO3的表达;抑制miR-182表达或上调FOXO3表达均可抑制Ishikawa细胞迁移及侵袭数目和MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05);miR-182过表达逆转了FM(100μmol/L)对Ishikawa细胞迁移及侵袭的作用。结论FM可通过抑制miR-182并上调FOXO3的表达来抑制Ishikawa细胞的迁移和侵袭。

不同浓度芒柄花黄素对PC-3细胞增殖及ALDOA蛋白水平的影响

目的探讨不同浓度芒柄花黄素对前列腺癌PC-3细胞增殖及醛缩酶(ALDOA)蛋白水平的影响。方法体外培养的PC-3细胞株分为4组,A组(无药物干预的PC-3细胞株)、B组(A组+20μmol/L芒柄花黄素)、C组(A组+40μmol/L芒柄花黄素)及D组(A组+80μmol/L芒柄花黄素),显微镜观察PC-3细胞株数目及形态改变;噻唑蓝(MTT)比色法检测PC-3细胞株生长;荧光Hoechst法检测PC-3细胞株凋亡程度;采用Western印迹及qRT-聚合酶链反应(PCR)检测时添加E组(D组+shRNA-ALDOA)分别检测ALDOA、蛋白激酶B(AKT)蛋白及mRNA相对表达。结果A组:PC-3细胞呈现贴壁生长,呈现梭形生长,相邻细胞出现融合生长;B~D组:经多个浓度的芒柄花黄素干扰下细胞形态改变呈现圆形,体积减小,连片生长状态改变,出现脱落;PC-3细胞OD值在相同时间内,B组、C组和D组活性OD值均显著低于A组,B组、C组和D组之间随着芒柄花黄素浓度的不断增加而OD值降低,且组间相互比较具有明显差异(P<0.05);各组PC-3凋亡率均存在明显差异(P<0.001),B组PC-3凋亡率与A组差异较大(t=7.831,P=0.001),C组明显高于B组(t=7.576,P=0.001);D组PC-3凋亡率明显高于C组(t=6.840,P=0.001);各组ALDOA、AKT蛋白及mRNA均存在明显差异(均P<0.001),且B组明显低于A组,C组明显低于B组,D组明显低于C组(均P<0.05),E组ALDOA、AKT蛋白及mRNA与D组比较无明显差异(P>0.05)。结论芒柄花黄素能够加快PC-3细胞凋亡,生长受到抑制,并呈现时间浓度依赖性。

芒柄花黄素通过TLR4/NF-κB通路抑制肝癌荷瘤小鼠肿瘤免疫逃逸

目的:揭示芒柄花黄素对肝癌免疫逃逸的作用机制。方法:采用不同浓度(50、100、200μg/ml)芒柄花黄素处理人肝癌细胞系HepG2 24 h,CCK-8检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。雄性C57BL/6小鼠皮下接种HepG2细胞(4×105个)建立荷瘤小鼠模型,10/50 mg(/kg·d)芒柄花黄素治疗28 d,计算抑瘤率。qRT-PCR、Western blot检测小鼠肝癌组织和HepG2细胞TLR4和NF-κB p65表达,ELISA检测小鼠血清和HepG2细胞TNF-α、IL-1β和IL-10水平。结果:芒柄花黄素可提高HepG2细胞增殖抑制率和凋亡率(P<0.05),降低荷瘤小鼠血清和HepG2细胞TNF-α、IL-1β和IL-10水平(P<0.05),提高荷瘤小鼠抑瘤率(P<0.05),降低荷瘤小鼠肿瘤组织和HepG2细胞TLR4和细胞核NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:芒柄花黄素通过抑制TLR4/NF-κB通路介导的肿瘤免疫逃逸抑制肝癌发生发展。

芒柄花黄素调控P2X7R/NLRP3通路对高糖诱导的心肌细胞炎症反应与焦亡的影响

目的探讨芒柄花黄素(FN)调控嘌呤能2X7受体(P2X7R)/核苷酸结合寡聚化结构域受体蛋白3(NLRP3)通路对高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡的影响机制。方法将H9C2细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+FN低浓度(FN-L)组、HG+FN中浓度(FN-M)组、HG+FN高浓度(FN-H)组、HG+FN-H+P2X7R激活剂(ATP)组。24 h后,CCK-8检测H9C2细胞活力变化;TUNEL染色检测细胞焦亡变化;qRT-PCR检测焦亡因子白细胞介素(IL)-18、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)、NLRP3 mRNA表达水平;ELISA检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和IL-1β水平;Western blot检测P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达水平。结果与对照组相比,HG组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05);与HG组相比,HG+FN-L组、HG+FN-M组、HG+FN-H组细胞活力显著增加(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.05);与HG+FN-H组相比,HG+FN-H+ATP组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论FN通过抑制P2X7R/NLRP3通路减轻高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡,缓解细胞损伤。

芒柄花黄素对小鼠H22肝癌移植瘤的抗肿瘤作用

目的 揭示芒柄花黄素对H22肝癌移植瘤小鼠免疫的影响。方法 雄性C57BL/6小鼠皮下接种H22细胞(4×10^(5)个)建立荷瘤小鼠模型,用[10 mg/(kg·d)]或[50 mg/(kg·d)]的芒柄花黄素治疗小鼠28 d,然后计算抑瘤率。卡瑞利珠单抗作为阳性对照药物。免疫组织化学染色分析肝癌组织中CD8、颗粒酶B(granzyme B)和叉头盒P3(FOXP3)的表达,实时定量PCR或Western blot法检测肝癌组织中的程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)及其配体1(PD-L1)的mRNA和蛋白表达,ELISA检测血清中白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的水平。结果 芒柄花黄素提高荷瘤小鼠的抑瘤率,增加肝癌组织中CD8和granzyme B染色阳性率。各组小鼠肿瘤组织中的FOXP3染色阳性率均无显著差异。芒柄花黄素降低的荷瘤小鼠血清中IL-10和TGF-β的水平,降低荷瘤小鼠肿瘤组织中PD-1和PD-L1的mRNA和蛋白相对表达量。结论 芒柄花黄素通过阻断PD-1/PD-L1通路激活CD8^(+)T细胞数量并减弱调节性T细胞(Treg)中免疫抑制因子的释放,从而发挥抗肿瘤作用。

芒柄花黄素对脓毒症小鼠炎性反应及MAPK/NF-κB通路影响的实验研究

目的:探究芒柄花黄素对脓毒症小鼠炎性反应的作用及机制。方法:利用随机数法将40只小鼠随机分为四组,在小鼠腹腔注射脂多糖建立脓毒症模型(内毒素组),在给予脂多糖小鼠中分别按照10 mg/kg(低剂量组)和20 mg/kg(高剂量组)腹腔注射芒柄花黄素,对照组给予等量0.9%氯化钠溶液。观察各组小鼠存活率,并预测腹腔灌洗液白细胞计数;利用试剂盒检测小鼠脾脏中的炎症指标,并对脾脏染色后观察其损伤程度;利用免疫印迹技术检测相关通路蛋白表达。结果:芒柄花黄素能够提高脓毒症小鼠的存活率(P<0.05);芒柄花黄素降低了脓毒症小鼠腹腔灌洗液中的白细胞(白细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞)计数(均P<0.05)和脾脏中的炎症指标(C-反应蛋白、单核细胞趋化蛋白-1、髓过氧化物酶活性、白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α)(均P<0.05);芒柄花黄素缓解了脓毒症小鼠脾脏白髓周围巨噬细胞的浸润,减少了脾脏的坏死细胞和凋亡小体;芒柄花黄素降低了丝裂原活化蛋白激酶和核因子-κB通路中关键分子的表达量(均P<0.05)。结论:芒柄花黄素可能通过抑制丝裂原活化蛋白激酶和核因子-κB通路活化减轻小鼠脓毒症炎性反应。

芒柄花黄素抗肿瘤作用机制研究进展

恶性肿瘤的发病率和死亡率不断增加,严重威胁全球人类生命健康,寻求有效的防治策略已刻不容缓。中药因其良好的抗肿瘤作用受到全世界的关注。芒柄花黄素是从黄芪、甘草、降香、葛根等传统中药中提取的活性成分,具有诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞迁移和侵袭、阻滞细胞周期等作用,本文对其抗肿瘤作用机制进行综述,以期为临床治疗癌证提供理论基础和新线索。

芒柄花黄素改善脂多糖诱导的小鼠抑郁样行为和神经炎症的作用研究

目的:观察芒柄花黃素(formononetin,FMN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠抑郁样行为和神经炎症的影响。方法:雄性ICR小鼠随机分为正常组、LPS组、帕罗西江组(20 mg·kg^(-1))、FMN低剂量组(20 mg·kg^(-1)),FMN高剂量组(40 mg·kg^(-1)),每组8只,灌胃给药14天后采用糖水偏好实验(sucrose preference test,SPT)、悬尾实验(tail suspension test,TST)和旷场实验(open field test,OFT)观察小鼠抑郁样行为;采用晦联免疫吸附测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量聚合晦链式反应实验(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)测定小鼠海马组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的蛋白和mRNA表达水平;采用免疫荧光染色观察小鼠海马组织中小胶质细胞钙结合蛋白-1(ionized calcium binding adapter molecule1,Iba-1)的表达水平以评价小胶质细胞活化水平。结果:与正常组相比,LPS组小鼠糖水偏好率、中心区域活动时间、中心区域活动距离、进入中心区域的次数显著下降(P<0.01),TST不动时间显著延长(P<0.05),海马组织IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.01),海马组织CA1、CA3和DG区域Iba-1荧光强度显著增加(P<0.01)。与LPS组相比,FMN组小鼠糖水偏好率、中心区域活动时间、中心区域活动距离和进入中心区域的次数均显著升高(P<0.05或P<0.01),TST不动时间显著缩短(P<0.01),海马组织IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),海马组织CA1、CA3和DG区域Iba-1荧光强度显著降低(P<0.01)。结论:FMN可能通过抑制LPS诱导的小胶质细胞活化,减轻海马神经炎症,改善小鼠的抑郁样行为。

芒柄花黄素对鼻咽癌细胞增殖和周期的影响及其可能机制

目的 探讨芒柄花黄素对鼻咽癌5-8F细胞增殖和周期的影响及其可能的作用机制。方法 将5-8F细胞分为溶剂对照组(加入完全培养液)、不同浓度芒柄花黄素组(加入终浓度为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L的芒柄花黄素)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)组(加入5-Fu)。分别干预24 h、48 h后,采用MTT法检测各组5-8F细胞增殖率。干预24 h后采用PI染色检测溶剂对照组、20μmol/L芒柄花黄素组、40μmol/L芒柄花黄素组、80μmol/L芒柄花黄素组、5-Fu组的5-8F细胞周期。干预24 h后采用Western blot检测溶剂对照组、20μmol/L芒柄花黄素组、40μmol/L芒柄花黄素组、5-Fu组的5-8F细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的蛋白表达水平。结果 (1)干预24 h和48 h后,20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L芒柄花黄素组及5-Fu组5-8F细胞增殖率低于溶剂对照组(P<0.05)。干预24 h后,10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L芒柄花黄素组5-8F细胞增殖率高于5-Fu组;干预48 h后,各浓度芒柄花黄素组5-8F细胞增殖率高于5-Fu组(P<0.05)。(2)与溶剂对照组相比,20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L芒柄花黄素组和5-Fu组的G0/G1期细胞比例降低、G2/M期细胞比例增加(P<0.05);20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L芒柄花黄素组的G0/G1期细胞比例高于5-Fu组,G2/M期细胞比例低于5-Fu组(P<0.05)。(3)与溶剂对照组相比,20μmol/L、40μmol/L芒柄花黄素组和5-Fu组的CDK1和PCNA蛋白表达水平下降(P<0.05);5-Fu组的CDK1和PCNA蛋白表达水平高于40μmol/L芒柄花黄素组,PCNA蛋白表达水平低于20μmol/L芒柄花黄素组(P<0.05)。结论 芒柄花黄素能够抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖,并阻滞细胞周期于G2/M期,其作用机制可能与下调PCNA和CDK1的表达水平有关。但药物的抗肿瘤作用机制复杂,芒柄花黄素的抗鼻咽癌效果仍有待优化,其具体作用机制亦仍有待深入探究。

芒柄花黄素对小鼠肠道菌群结构和丰度的影响

目的 研究芒柄花黄素(formononetin,FMN)对小鼠肠道菌群结构与丰度的影响。方法 将12只无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和FMN组,每组6只。FMN组每天灌胃1次FMN,5 mg·kg-1d-1,连续10 d,对照组灌胃相同体积的磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffer saline,PBS)。于第11天收集小鼠新鲜粪便,用DNA提取试剂盒提取粪便菌群DNA,使用引物338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)对16S rRNA基因V3-V4可变区进行PCR扩增。最后利用Illumina公司的Miseq PE300平台进行测序(上海美吉生物医药科技有限公司)并对测序结果进行分析。结果 小鼠灌胃FMN后,肠道菌群丰富度与多样性指数Sobs、Chao、Ace和Shannon明显升高。PCoA和Venn分析结果显示,摄入FMN后小鼠肠道菌群结构明显改变。在门水平上,FMN组拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度显著增加,厚壁菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria)丰度显著减少,脱铁杆菌门(Deferribacteres)有上升趋势;在属水平上,FMN组的粪球菌属(Coprococcus)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、unclassified_o__Clostridiales、norank_o__Clostridiales、Odoribacter和norank_o__Bacteroidales丰度显著增加,unclassified_f__Lachnospiraceae丰度显著降低。结论 芒柄花黄素可提高小鼠肠道菌群丰富度与多样性,并改变菌群结构、增加有益菌优势。

芒柄花黄素对人胃癌细胞株MKN-45增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察芒柄花黄素对人胃癌MKN-45细胞株增殖、凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法取对数生长期人胃癌MKN-45细胞分为A、B、C、对照组,A、B、C组分别加入20、40、80μg/m L芒柄花黄素培养,对照组加入不含芒柄花黄素的完全培养基。采用MTT法观察给药24、48、72 h各组细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率。采用DAPI染色法评价其对MKN-45细胞形态学的影响。采用Western blotting法检测给药48 h时各组细胞磷酸化IκB(p-IκB)及NF-κB p65。结果随芒柄花黄素浓度升高,细胞增殖抑制率升高,且随干预时间增加,细胞增殖抑制率升高(P均<0.05)。给药72 h时A、B、C、对照组的凋亡率分别为25.62%±2.57%、48.27%±3.18%、72.51%±4.35%、1.07%±0.54%,A、B、C组与对照组相比,P均<0.05。给药48 h时A、B、C组细胞p-IκB、NF-κB p65蛋白相对表达量均高于对照组,且随芒柄花黄素浓度升高,细胞p-IκB及NF-κB p65蛋白相对表达量增加,P均<0.05。结论芒柄花黄素可抑制人胃癌MKN-45细胞株的增殖、促进细胞凋亡,其机制可能为芒柄花黄素激活NF-κB信号通路。

芒柄花黄素对人胃癌细胞MKN-45荷瘤裸鼠模型的抑制作用及机制研究

目的研究芒柄花黄素对人胃癌细胞MKN-45荷瘤裸鼠模型的抑制作用及作用机制。方法建立人胃癌MKN-45细胞荷瘤裸鼠癌症模型,经环磷酰胺(20mg/kg)和芒柄花黄素(10、20、40mg/kg)干预14d,观察荷瘤重量变化及应用TUNEL染色评估荷瘤组织中细胞凋亡数量,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测荷瘤内源性p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及细胞周期蛋白(CyclinD)表达。结果与模型对照组比较,芒柄花黄素明显抑制胃癌细胞MKN-45荷瘤裸鼠肿瘤的生长(P<0.01),并且肿瘤组织中细胞凋亡计数增加(P<0.01)。同时,芒柄花黄素干预组肿瘤组织中的p38MAPK蛋白表达增加,CyclinD蛋白水平减少(P<0.01)。结论芒柄花黄素具有明显抑制胃癌细胞MKN-45增殖作用,其机制与激活细胞内MAPK信号转导通路而诱导细胞凋亡有关。

山奈酚和芒柄花黄素对缺氧/复氧条件下H9C2心肌细胞活性氧水平的影响

目的:分析中药单体山奈酚和芒柄花素对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法:采用缺氧复氧的造模方法对H9C2心肌细胞进行造模,选用夹竹桃作为阳性药组,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验阐明含药培养基对实验体系的影响,并初步确定中药单体的给药浓度;通过倒置荧光显微镜观察经乙酰乙酸双氯荧光素(DCFH-DA)染色的H9C2心肌细胞的荧光强弱,即细胞内活性氧的变化;通过流式细胞仪进一步测定细胞内活性氧的定量变化。结果:通过MTT实验确定各组给药浓度为10-6mol/L,用DCFH-DA法染色后经倒置荧光显微镜观察各组细胞内绿色荧光有显著变化,即正常组镜下观察细胞内的荧光很暗,模型组细胞内的绿色荧光很强,发光细胞数量也相对很多,给药组细胞内绿色荧光介于两组之间,与阳性药组相似;流式细胞仪测定结果显示除山奈酚组外,各给药组与模型组相比都有统计学差异,其中以芒柄花素组、混合组、夹竹桃组最为显著。结论:山奈酚和芒柄花素对心肌细胞有一定的保护作用,能够改善细胞贴壁的状态,增加细胞存活率,降低心肌细胞内ROS水平。

芒柄花黄素对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察芒柄花黄素对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将结直肠癌细胞HCT116随机分为两组,观察组分别以25、50、100μmol/L芒柄花黄素处理,对照组以等量二甲基亚砜处理;用MTT法检测细胞增殖情况(A490),Hoechst荧光染色法计数凋亡细胞,qRT-PCR法检测细胞中的HOC转录反义RNA(HOTAIR),Western blot法检测细胞中的Bax和Bcl-2。结果与对照组比较,观察组随着芒柄花黄素浓度增加及处理时间延长HCT116细胞A490值降低(P均<0.05);观察组以25、50、100μmol/L芒柄花黄素处理48 h后HCT116细胞凋亡数分别为(3.20±0.84)、(20.20±1.92)、(31.00±2.92)个/HP,均高于对照组的(1.6±1.14)个/HP(P均<0.01);与对照组比较,观察组细胞HOTAIR、Bcl-2表达量降低,而Bax表达量增加,P均<0.05。结论芒柄花黄素可能通过抑制HOTAIR调节Bax和Bcl-2的表达,从而抑制结直肠癌细胞的生长并诱导细胞凋亡。

芒柄花黄素对人膀胱癌细胞T739增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察芒柄花黄素对人膀胱癌细胞T739增殖与凋亡的影响及其机制探讨。方法分别采用0、15、30、60μmol/L的芒柄花黄素作用T739细胞后,CCK8法检测T739细胞的增殖情况,流式细胞术检测凋亡率的变化,Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡情况,Western blot检测GSK-3β、Axin、β-catenin蛋白含量变化。结果 15、30、60μmol/L的芒柄花黄素以浓度和时间依赖方式明显抑制T739细胞的增殖(P<0.05),且作用T739细胞48 h后凋亡率随药物剂量增加显著上升(P<0.05),呈浓度-效应关系。Hoechst33258染色显示T739细胞随药物浓度的升高,凋亡明显增多。Western blot法显示GSK-3β及Axin蛋白表达随药物浓度升高而增加(P<0.05),β-catenin蛋白水平则随药物浓度升高而降低(P<0.05),且均呈浓度-效应关系。结论芒柄花黄素对T739细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与芒柄花黄素上调GSK-3β、Axin蛋白表达和降低β-catenin蛋白水平有关。

芒柄花黄素对膀胱癌细胞凋亡作用及对β-catenin通路的影响

目的研究芒柄花黄素对膀胱癌细胞的凋亡作用及对β-catenin通路的影响。方法选择不同浓度(20、40、80μmol/L)的芒柄花黄素作用膀胱癌T24、EJ细胞,同时设对照组(芒柄花黄素浓度为0μmol/L),采用CCK8法检测两种细胞被各浓度药物处理0、24、48和72 h后的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测两种细胞被各浓度药物处理48 h的细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测T24细胞被各浓度药物处理48 h后的细胞凋亡情况,RT-PCR检测T24细胞被各浓度药物处理48 h后β-catenin mRNA表达水平。结果 CCK8实验显示芒柄花黄素明显抑制膀胱癌T24、EJ细胞增殖,呈剂量和时间依赖性(P<0.05),并且药物对T24细胞的抑制增殖效果比EJ细胞高(P<0.05);流式细胞术显示T24细胞的对照组及20、40、80μmol/L芒柄花黄素组48 h后凋亡率分别为(1.75±0.71)%、(5.21±1.02)%、(17.78±1.67)%、(30.48±2.51)%,而EJ细胞凋亡率分别为(1.95±1.21)%、(4.84±1.35)%、(14.87±2.59)%、(21.84±2.64)%,与对照组比较,两种细胞的40、80μmol/L芒柄花黄素组凋亡率显著增高(P<0.05),并且芒柄花黄素对T24细胞的凋亡影响比对EJ细胞更明显(P<0.05);Hoechst33258染色显示T24细胞随药物浓度的升高,凋亡明显增多;RT-PCR结果显示T24细胞中β-catenin的mRNA表达水平随着药物浓度升高而降低(P<0.05)。结论芒柄花黄素能抑制膀胱癌T24细胞和EJ细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与抑制β-catenin通路有关。