芦丁鼠李糖苷酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达

芦丁鼠李糖苷酶目的基因亚克隆至pPIC9K表达载体,电转化至毕赤酵母GS115中,进行了基因表达研究.结果表明,该转化宿主菌在甲醇诱导培养至144 h,表达产蛋白具有芦丁鼠李糖苷酶活性,运用SDS-PAGE电泳技术确定其分子质量为53 ku,与理论值基本相符.

芦丁-α-鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质

报道了微生物sp.R9g产芦丁 α 鼠李糖苷酶的分离提纯及其酶性质鉴定。该酶能水解芦丁的一个 α 鼠李糖基,从而制备异槲皮甙。该酶蛋白的分子量约为72kDa,且酶反应的最佳温度是40℃,最适pH值是5。

芦丁-α-鼠李糖苷酶基因的克隆

根据芦丁 α 鼠李糖苷酶N端氨基酸序列设计简并引物,从Absidiasp.R9g的总RNA出发,通过逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)扩增出芦丁 α 鼠李糖苷酶基因片段。将RT PCR获得的1条1.6kb的目的条带与pMD18 T载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞。酶切鉴定结果表明目的片段克隆成功。

两种菌产两种不同天然苷类α-鼠李糖苷酶的研究

采用TLC法和分光光度计法研究了Absidia sp.G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶(RhaG)和Ab-sidia sp.R9g产芦丁-α-鼠李糖苷酶(RhaR)的酶反应特性。实验结果表明,RhaG只水解人参皂苷Re的C-6位末端上的一个α-鼠李糖基,而RhaR能水解芦丁、橙皮苷、柚皮苷的α-鼠李糖基。两种酶反应条件中相同之处是酶反应最适底物质量浓度为1.0 g/mL、最佳反应pH 5.0,不同之处是RhaG反应的最佳反应温度是50℃,而RhaR则为40℃。

芦丁的酶法转化及其产物异槲皮苷的分离

利用微生物Absidiasp.R9g产的芦丁-α-鼠李糖苷酶(RhaR)转化芦丁制备异槲皮苷,采用硅胶柱层析法对酶解产物进行分离纯化。结果表明,24.0g芦丁的酶解产物,经分离可得到较纯的异槲皮苷单体13.1g,其得率为49.4%。通过高效液相色谱检测其纯度达到98.3%。