芦荟多糖对D-半乳糖致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨芦荟多糖对HepG2细胞氧化损伤的保护作用,分析其体外抗氧化能力。方法:以HepG2细胞为研究对象,建立D-半乳糖诱导细胞氧化损伤模型,以不同浓度芦荟多糖进行预保护处理。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒测定HepG2细胞存活率,生物化学法检测细胞超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力,酶联免疫吸附法测定细胞总抗氧化能力及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,实时荧光定量PCR检测细胞Keap1、Nrf2、NQO1和HO-1基因表达水平。结果:与D-半乳糖模型组比较,25、50、100μg/mL的芦荟多糖预保护处理能不同程度地提高HepG2细胞存活率;芦荟多糖能显著增强细胞中抗氧化酶的活性,降低细胞MDA的生成量(P<0.05),且作用效果与芦荟多糖浓度成正比;细胞中Keap1基因表达显著降低,Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA表达显著提高(P<0.05)。结论:芦荟多糖可以减轻HepG2细胞的氧化应激损伤,激活Nrf2表达并抑制其泛素化降解,提高下游NQO1、HO-1的转录水平,增强细胞抗氧化酶系活性并调控细胞氧化还原系统,以达到减轻细胞氧化损伤程度、提高细胞抗氧化应激损伤的效果。

芦荟多糖对自身免疫性甲状腺炎小鼠辅助型T细胞亚群的影响

目的探究芦荟多糖对自身免疫性甲状腺炎(autoimmune thyroiditis,AT)小鼠辅助型T细胞亚群的影响。方法将50只健康无特定病原体的BALB/C雌性小鼠。随机分为芦荟多糖低、中、高剂量组、AT组、对照组,每组各10只。其中对照组小鼠均为健康小鼠,AT组及芦荟多糖低、中、高剂量组均为AT小鼠(使用猪甲状腺球蛋白免疫联合高碘水法建立小鼠AT模型),且芦荟多糖低、中、高剂量组采取药物治疗。比较5组小鼠的甲状腺功能指标[促甲状腺激素(thyroid‑stimulating hormone,TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(free tetraiodothyronine,FT4)]。分别比较小鼠外周血和脾脏组织的CD3^(+)CD8^(+)IL‑4^(+)(白细胞介素‑4,interleukin‑4)辅助T淋巴细胞和CD3^(+)CD8^(+)IFN‑γ^(+)(干扰素,interferon)辅助T淋巴细胞水平。结果在芦荟多糖治疗4周后,芦荟多糖低、中、高剂量组及AT组小鼠,TSH水平较对照组高,而FT3、FT4水平较对照组低(P<0.05)。治疗4周后,与芦荟多糖低、中、高剂量组比较,AT组TSH水平降低,而FT3、FT4水平升高(P<0.05)。治疗4周后,与对照组比较,AT组、芦荟多糖低、中、高剂量组小鼠外周血及脾脏组织的CD3^(+)CD8^(+)IL‑4^(+)辅助T淋巴细胞和CD3^(+)CD8^(+)IFN‑γ^(+)辅助T淋巴细胞水平升高(P<0.05)。治疗4周后,与AT组比较,芦荟多糖低、中、高剂量组小鼠外周血及脾脏组织的CD3^(+)CD8^(+)IL‑4^(+)辅助T淋巴细胞和CD3^(+)CD8^(+)IFN‑γ^(+)辅助T淋巴细胞水平降低(P<0.05)。结论芦荟多糖可有效改善AT小鼠的甲状腺功能,同时还可降低辅助型T细胞亚群的表达。

基于TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路探讨芦荟多糖对小鼠自身免疫性甲状腺炎的保护作用

目的基于TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路观察芦荟多糖对小鼠自身免疫性甲状腺炎的保护作用。方法选用2月龄雌性小鼠30只,随机分为正常组、模型组和芦荟多糖组,每组10只。通过皮下多点注射猪甲状腺球蛋白(PTg)+高碘水法建立小鼠自身免疫性甲状腺炎模型,其中芦荟多糖组灌胃给药300 mg/(kg·d),其余两组灌胃给予等量生理盐水。药物干预4周后分别HE染色观察各组小鼠甲状腺组织病理形态学变化;ELISA法检测各组小鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT_(3))、游离四碘甲状腺原氨酸(free thyroxine,FT_(4))、促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素10(interleukin 10,IL-10)、白介素17(interleukin 17,IL-17)和甲状腺信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT_(3))、维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoic acid-related orphan receptorγt,RORγt)、叉头状转录因子P3(forkhead box P3,FOXP3)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)、IL-10和IL-17水平;免疫荧光法检测FOXP3和IL-17A水平;Western blot法检测TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路关键蛋白表达水平。结果与模型组比较,芦荟多糖明显改善甲状腺组织病理学变化,降低血清TSH、TGAb、TPOAb、TNF-α、IL-1β和IL-17的水平(P<0.05),升高血清FT3、FT4和IL-10的水平(P<0.01),下调甲状腺组织STAT3、RORγt和IL-17水平(P<0.01),上调甲状腺FOXP3、TGF-β和IL-10水平(P<0.01)。结论芦荟多糖可能通过TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路对小鼠自身免疫性甲状腺炎具有较好的保护作用。

响应面法优化复合酶提取芦荟多糖工艺及其抗氧化活性分析

研究复合酶提取芦荟多糖的工艺,并测定其抗氧化性。在单因素试验的基础上,利用响应面法对复合酶提取芦荟多糖的条件进行了优化,通过测定芦荟多糖的总抗氧化能力、DPPH自由基和羟自由基清除能力研究其抗氧化性。结果显示,当料液比1:30(g/mL)、果胶酶与纤维素酶配比1:3、pH 4.5时,优化最佳提取条件为加酶量0.3%、酶解温度48℃、酶解时间40 min,此条件下芦荟多糖的提取率为5.65%,和超声波辅助法相比提取率提高了4.2%。芦荟多糖具有较好的抗氧化性,随着质量浓度的增加,其总抗氧化能力、DPPH自由基和羟自由基清除能力逐渐增强,在25 mg/mL时其DPPH自由基和羟自由基清除率分别达到75%和90%。复合酶法是一种新的、有效的芦荟多糖提取方法;芦荟多糖具有较好的抗氧化性。

芦荟多糖对动物实验性胃溃疡的影响

目的研究芦荟多糖对动物实验性胃溃疡的影响。方法应用大鼠幽门结扎型胃溃疡模型、大鼠醋酸烧灼型胃溃疡模型、小鼠利血平致胃溃疡模型,观察芦荟多糖ig给药对实验性胃溃疡的预防与治疗作用及对大鼠胃液、胃酸、胃黏液、胃蛋白酶分泌及活性的影响。结果芦荟多糖对实验性胃溃疡具有明显的预防及治疗作用,并能抑制胃液分泌、胃酸分泌及减少胃蛋白酶、胃黏液的分泌,但对胃蛋白酶活性无明显影响。结论芦荟多糖对动物实验性胃溃疡具有良好的预防及治疗作用,并能抑制溃疡致病因子胃酸及胃蛋白酶的分泌。

芦荟多糖对小鼠放射损伤的防护作用研究

目的 研究芦荟多糖 (AP)对受γ射线照射小鼠的防护作用。方法 (1)给药组小鼠分别于 6 0 Co 7.5 Gy全身照射前 35～ 4 5 min ip AP12 .5 ,2 5 ,5 0和 10 0 m g/ kg,观察生存防护效力和 30 d存活率 ;(2 )给药组小鼠分别于 6 0 Co 7.5 Gy全身照射前 30 ,6 0和 90 min ip AP 2 5或 5 0 m g/ kg观察上述指标 ;(3)给药组小鼠于 6 0 Co 4 .0 Gy全身照射前 35 m in ip AP5 0 m g/ kg,于照射前及照射后第 4天和第 10天分别检测白细胞数 (WBC)、红细胞数(RBC)和血小板数 (PL T)。结果 (1)不同剂量 AP均可显著提高生存防护效力 (1.6 0～ 3.4 6 )和 30 d存活率(最高提高达 76 % ) ,且在 12 .5～ 5 0 mg/ kg剂量范围内呈良好的量效关系 ;(2 )照射前 30 ,6 0和 90 min给药均能显著提高小鼠的 30 d存活率和生存防护效力 ;(3) 5 0 m g/ kg AP能显著提高照射后第 4天和第 10天小鼠的WBC、RBC和 PL T。结论

芦荟多糖的抑瘤作用及其机理研究

目的:研究芦荟多糖(AP)的抗瘤作用及其机制。方法:采用移植性S_(180)肿瘤小鼠(实体瘤)和H_(22)肝癌小鼠(腹水瘤),单独ip或iv AP,或与环磷酰胺(CTX)、阿霉素(ADM)、氟脲嘧啶(FU)联合用药。连续给药10天后,S_(180)肿瘤小鼠剥取瘤块,称重,减毒试验则于处死前采血,化验血象,计算脾指数和胸腺指数;H_(22)肝癌小鼠停药后观察生存时间,或于停药后24小时取血,放射免疫分析法测IL-2和TNF含量。结果:AP 25mg/kg·d、50mg/kg·d两个剂量单独给药时,能显著降低S_(180)肉瘤移植小鼠瘤块重量,显著延长H_(22)肝癌移植小鼠的生存时间;与三种抗肿瘤药物合用时,均有不同程度的增效作用,且可减轻化疗药物的副作用;可显著提高荷瘤鼠血清中IL-2、TNF含量。结论:AP对移植性S_(180)肿瘤小鼠和H_(22)肝癌小鼠具有抗肿瘤作用及化疗增效和减毒的双重作用,其机理可能是诱生IL-2、TNF及提高机体免疫力。

芦荟多糖抗突变作用的试验研究

目的 研究芦荟多糖的抗突变作用。方法 采用小鼠骨髓细胞微核试验、人外周血淋巴细胞染色体畸变试验及小鼠精子畸形试验 ,观察芦荟多糖在体内和体外的抗突变作用。结果 芦荟多糖高、中、低三个剂量组的微核率 (分别为 17.6‰、2 1.8‰、31.4‰ )和精子畸形率 (分别为 30 .42‰、32 .15‰、41.33‰ )均显著低于阳性对照组 (环磷酰胺组 ,P<0 .0 0 5 )。体外淋巴细胞染色体的畸变率在高、中、低三个剂量组分别为 2 2 .5 %、14.8%、10 .2 5 %,与阳性对照组 (丝裂霉素组 )相比差异有显著性 (P<0 .0 1) ,但在低剂量组其作用最为明显 ,抑制率达到78.5 %。结论 芦荟多糖可有效抑制环磷酰胺、丝裂霉素所诱导的突变性 ,具有一定的抗突变作用。

芦荟多糖对S_(180)小鼠红细胞膜功能的影响

目的 研究芦荟多糖对S180 荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响。方法 采用荧光分光光度法、SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳以及唾液酸试剂盒分别测定S180 小鼠红细胞膜脂流动性、膜交联蛋白、带 3蛋白以及膜唾液酸 (SA)含量。结果 两种芦荟多糖各剂量组均能不同程度地提高S180 荷瘤小鼠降低的红细胞膜脂流动性、带 3蛋白和SA的含量 ,降低红细胞膜交联蛋白的含量 ,且中剂量均非常显著 (P <0 0 1)。结论 芦荟多糖对S180 荷瘤小鼠红细胞膜功能具有促进作用 ,这可能是芦荟多糖抗肿瘤作用的主要机制之一。

芦荟多糖的纯化工艺与体外抗肿瘤活性

目的:研究芦荟多糖的提取、纯化工艺及体外抗肿瘤活性,为芦荟的产业化开发提供实验依据。方法:采用水提醇沉,三氯乙酸法除蛋白,DEAE-52离子交换色谱分离。用Sephacryl S-400凝胶柱层析纯化并确定芦荟多糖的相对分子量,HPLC法检测纯度,GC法鉴别单糖组成及分子摩尔比。以MTT法观察其体外抗肿瘤活性等。结果:从中华芦荟(Aloe vera L.var. chinesis(Haw.)Berger.)凝胶冻干粉中提取分离得到纯多糖AVP,经HPLC检测为单一对称峰,相对分子量为86000,由甘露糖和葡萄糖组成,摩尔比为10.3∶1.0。AVP对人肝癌细胞(SMMC-7721)、人胃癌细胞(BGC-823)及人肺癌细胞(A549)的增殖均有抑制作用。结论:该法分离的芦荟多糖AVP纯度好,收率高达3.6%,可用于进一步的研究和开发,提高芦荟的资源利用率。

巴巴多斯芦荟多糖对内毒素化大鼠和正常高龄大鼠血清及肝组织过氧化脂质的影响

目的 研究巴巴多斯芦荟多糖 (AP)对内毒素化大鼠和正常高龄大鼠血清及肝组织高过氧化脂质 (LPO)水平的影响。方法 各试验组动物连续 30d灌胃 ,给予不同剂量AP ,于试验开始的第 2 0天起连续 10d腹腔注射K0 3肺炎杆菌内毒素 (LPS 5 0 μg·kg-1)诱发大鼠高过氧化脂质产生 ;对照组均采用生理盐水。测定各试验组动物血清及肝组织中LPO的体内代谢产物丙二醛 (MDA)水平 ,以血清及肝组织MDA水平为指标 ,评价口服AP预防脂质过氧化作用。结果 口服AP 10 μg·kg-1和 5 0 μg·kg-1均能显著降低内毒素化少龄大鼠和正常高龄大鼠血清及肝组织LPO的水平。结论 AP具有一定的抗脂质过氧化作用。

RP-HPLC用于芦荟多糖的单糖组成研究

采用水提醇沉法提取芦荟多糖,用三氟乙酸(TFA)水解,通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生水解后的单糖,衍生物用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析,紫外检测,研究了三种常见芦荟多糖的单糖组成及摩尔比。结果表明:利用RP-HPLC研究芦荟多糖的单糖组成简便易行,并且芦荟多糖因品种不同存在单糖组成差异。从而建立了研究芦荟多糖的新方法。

3种芦荟多糖抗肿瘤作用的比较分析

对3种芦荟多糖体内抗肿瘤药效及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响进行了比较研究.结果表明:3种芦荟多糖对S180实体瘤均有一定的抑制作用,其中在100mg kg剂量下效果最佳,其抑瘤率分别为50 58%(PAVL)、43 51%(PAAM)和40 13%(PAC);除PAAM低剂量组外,其他各组均可显著延长H22小鼠的生存时间(P<0 05或P<0 01),其中PAVL在100mg kg时生存期达(21 45±3 47)d,明显优于AP对照组(P<0 05);此外,5-Fu组胸腺指数和脾指数较生理盐水组有所降低,而各给药组(个别低剂量组除外)的胸腺指数和脾指数明显提高,与生理盐水组比较有显著性差异(P<0 05或P<0 01),与5-Fu组比较有极显著差异(P<0 01).结论:3种芦荟多糖均具有一定的抗肿瘤和免疫调节作用,但在同等剂量下,PAVL各组对S180小鼠瘤重、胸腺指数和脾指数及其对H22小鼠的生命延长率等均优于PAAM和PAC.

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系提取分离芦荟多糖及含量的测定

目的探讨了硫酸铵对三种不同相对分子质量聚乙二醇双水相体系的分相能力和双水相体系对芦荟多糖的提取分离。方法以相对分子质量为6000的聚乙二醇/硫酸铵双水相体系从芦荟凝胶汁中提取分离得到芦荟多糖,以甘露糖为标准,采用浓硫酸-苯酚法对芦荟多糖的含量进行测定,并用红外(IR),紫外(UV)等手段对多糖的结构进行初步分析。结果确定以聚乙二醇6000的分相能力最好,聚乙二醇/硫酸铵双水相体系提取得到的芦荟多糖含量高于传统的醇沉法所得的芦荟多糖,醇沉法提取分离芦荟多糖的含量为68.39%,聚乙二醇/硫酸铵双水相体系为75.63%,而且聚乙二醇/硫酸铵双水相体系提取法大大的减少了有机溶剂的用量。结论PEG6000/硫酸铵双水相体系是一种很好的分离提取芦荟多糖的方法。

芦荟多糖中游离蛋白去除的分光光度法

紫外可见分光光度法研究了 Sevag法去除芦荟多糖中游离蛋白的条件。探讨两相比、振摇时间对去除蛋白的影响研究表明 ,两相比 4∶ 1、振摇时间 5 min为最佳条件 ,且对多糖含量几乎没有影响。Sevag法可快速。

离子色谱-脉冲安培法测定芦荟多糖中7种单糖的含量

采用水提醇沉法提取芦荟鲜叶中的多糖,经三氟乙酸水解,利用Dionex CarboPac PA10高效阴离子色谱柱分离,氢氧化钠梯度淋洗,积分脉冲安培检测,建立了芦荟多糖中岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和木糖7种常见单糖的测定方法。结果表明:7种单糖在线性范围内的相关系数(R^2)均高于0.997,检出限为0.007～0.024 mg/L,加标回收率为97.5%～102.5%,相对标准偏差(RSD)为0.1%～4.8%。该法简单、快速、灵敏、准确,可用于芦荟多糖中单糖含量的测定和多糖组成的研究。

中华芦荟多糖对非瘤细胞辐射后细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的 研究中华芦荟多糖 (AP)对X射线照射后人非瘤细胞株CLiver和 2 93细胞凋亡及细胞凋亡蛋白 p5 3,bax ,Bcl 2 ,Bad ,survivin表达的影响。方法 流式细胞仪检测细胞凋亡 ,Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 X射线照射后 72h ,CLiver细胞可见典型的DNA梯形条带 ,照射前加入AP 2 5或 5 0mg·L-1均能使DNA片段减少 ;AP预处理使CLiver细胞在照后 6h和72h凋亡率分别由 5 0 %和 4 3 0 %降至 2 2 %和 10 9% ,使2 93细胞照后 6h凋亡率由 8 6 %降至 4 0 % ;AP预处理可使CLiver细胞p5 3、Bad、Bax蛋白表达量下调 ,Bcl 2和sur vivin蛋白表达则上调。

库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成的影响

目的研究库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮（NO）生成的影响。方法用Griess法测定巨噬细胞一氧化氮的生成量。结果库拉索芦荟多糖在25-400μg／mL浓度范围可显著促进正常巨噬细胞的NO生成，在50～400μg／mL浓度范围可抑制LPS激活的巨噬细胞的NO生成。结论库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮的生成具有双向调节作用。

库拉索芦荟中芦荟多糖提取方法的比较

对库拉索芦荟中芦荟多糖的3种常用提取方法的提取条件分别进行研究,得到热水浸提法、微波辅助法和超声波辅助法的最佳提取条件,并分别在最佳提取条件下比较了3种方法对芦荟多糖提取率的影响。结果表明,超声波辅助法最有利于库拉索芦荟中芦荟多糖的提取,超声波辅助法的最佳提取条件为超声波功率800 W,超声波时间9 min,料液比为1∶30(g/mL),芦荟多糖的提取率为5.42%。超声波辅助法芦荟多糖的提取率分别比热水浸提法和微波辅助法提高了4.43%和3.83%。

芦荟多糖联合茶多酚对小鼠酒精性肝损伤的预防作用

目的:研究芦荟多糖(AG)联合茶多酚(TP)对酒精性肝损伤的预防作用。方法:以芦荟凝胶粉为原料,提取芦荟多糖;以C57BL/6小鼠为动物模型,4周42%vol酒精加1次50%vol酒精灌胃,造成酒精性肝损伤,检测小鼠肝脏指数、血清生化指标、肝脏生化指标和病理变化,比较AG、TP和AG&TP对酒精性肝损伤的预防作用。结果:模型组与空白组相比,肝脏指数、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性极显著升高;还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著性降低(P<0.01),而丙二醛(MDA)极显著增加(P<0.01);肿瘤坏死因子(TNF-α)以及白介素-6(IL-6)水平也极显著增高(P<0.01),HE染色结果显示肝细胞明显的炎性浸润和空泡变性。AG&TP组与AG和TP组相比,AG&TP可以更加显著(P<0.05)地改善酒精引起的氧化损伤、炎症反应和肝形态学变化。结论:芦荟多糖联合茶多酚能够有效缓解酒精性肝损伤,且效果优于单一成分。