芩麻方中各味药材对麻黄提取效率的影响研究

目的建立提取液中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的测定方法,考察芩麻方中各味药材对麻黄提取效率的影响,优选麻黄的水煎提取工艺条件。方法采用高效液相色谱法,XB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(含0.1%的三乙胺)(10∶90),检测波长207 nm。以盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱提取率为考察指标,考察芩麻方中各味药材对麻黄提取效率的影响,采用正交实验设计优选麻黄的提取工艺。结果盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱在2.48～159μg/mL和2.56～164μg/mL质量浓度范围内,线性关系良好。平均加样回收率为103.0%和97.2%。芩麻方中其他药材对麻黄有效成分(盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱)提取率具有一定影响,其中甘草影响最大。正交实验优选的麻黄提取工艺为煎煮3次,每次煎煮1.5 h,每次加水量为药材的10倍量。结论芩麻方提取时,各药味间存在相互作用,如考虑盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的提取率,君药麻黄应与对甘草等药味分别提取,以提高制剂的临床疗效。优选的麻黄水提工艺,提取率较高,工艺稳定可行。

芩麻方对慢性阻塞性肺疾病大鼠炎性细胞相关因子的影响

目的观察芩麻方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠内源性抗炎系统的影响,探讨其作用机制。方法采用改良烟熏联合脂多糖方法制作COPD大鼠模型。将70只SPF级大鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组(氨茶碱组)、中药对照组(六君子汤组)和芩麻方低、中、高剂量组,每组10只,各给药组给予相应药物灌胃。光镜下观察大鼠肺组织病理切片;收集大鼠肺泡灌洗液(BALF)和静脉血,对相关指标进行检测;ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10含量。结果与正常组比较,模型组大鼠BALF和血白细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、血红蛋白和血小板压积显著增加(P<0.05);与模型组比较,芩麻方中、高剂量组和六君子汤组大鼠BALF白细胞、中性粒细胞、巨噬细胞显著减少(P<0.05),芩麻方中、高剂量组和氨茶碱组大鼠血白细胞、血红蛋白和血小板压积显著减少(P<0.05),血清IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.05),IL-10含量显著升高(P<0.05)。结论芩麻方通过调节炎症反应相关细胞因子从而抑制炎症反应。

芩麻方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重塑作用影响的实验研究

目的建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型,探究COPD发病过程中蛋白酶与蛋白酶抑制剂失衡导致气道重塑的机制,探讨芩麻方治疗COPD的效果和可能的作用机制。方法将70只SPF级大鼠随机分为正常组,模型组,芩麻方低、中、高剂量组,六君子汤组及氨茶碱组,每组10只。除正常组外,采用气管内注入二硫酰氯溶液以及脂多糖和胃蛋白酶的混合物,联合烟熏造模方法制备COPD大鼠模型。无创呼吸功能测定仪测定大鼠呼吸功能。光镜下观察大鼠肺组织和支气管形态。ELISA法检测血清中转化生长因子β_1(TGF-β_1)的含量。免疫组化法检测支气管肺组织中的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的变化。结果与模型组比较,芩麻方能显著降低呼吸频率(P<0.05),加大呼吸流量(P<0.05)。芩麻方中、高剂量组气管壁厚度和平滑肌厚度显著降低(P<0.05);芩麻方低、中、高剂量组血清TGF-β_1含量显著降低(P<0.05)。芩麻方中、高剂量组MMP-9和TIMP-1的含量显著降低(P<0.05)。结论芩麻方能显著改善大鼠呼吸功能,下调肺组织中MMP-9以及TGF-β_1的表达,从而减轻其对肺泡、气管结构的破坏,逆转气道重塑的发生。

芩麻方通过调控髓源抑制细胞抑制非小细胞肺癌的机制研究

目的研究芩麻方对肺癌原位模型小鼠的抑瘤功效及可能作用机制。方法通过给小鼠肺内注射非小细胞癌Lewis肺癌细胞-荧光素酶标记(LLC-luc)建立肺癌原位小鼠模型。将所有造模小鼠随机分为空白对照组,顺铂组(2 mg/kg腹腔注射,每周2次),芩麻方高、中、低剂量组(2.0、1.0、0.5 g/kg,每日1次),连续给药4周。观察小鼠的外观表现(精神、毛发、活动等)并统计生存期。MTT法检测芩麻方对LLC-luc细胞增殖的抑制作用。流式细胞术检测小鼠脾脏和肿瘤中髓源抑制细胞(MDSCs)和T细胞数量变化,以及CD8+T细胞CD107α脱颗粒状况。RT-PCR检测小鼠脾脏中精氨酸酶(Arg1)、一氧化氮合酶(iNOS)、信号转导和转录活化因子3(STAT3)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)基因表达。Western blot法检测小鼠脾脏中Arg1、STAT3和p-STAT3蛋白表达。HE染色和ELISA检测不同剂量的芩麻方的肝肾毒性。结果中剂量芩麻方可延长小鼠生存期(P<0.05);不同质量浓度的芩麻方干预对LLC-luc肺癌细胞增殖并无直接抑制作用;中剂量芩麻方可降低小鼠脾脏、肿瘤中MDSCs的数量(P<0.01),增加T细胞的数量,且以CD8+T细胞为主(P<0.01),同时增强CD8+T细胞CD107α脱颗粒作用(P<0.01);中剂量芩麻方干预后,与MDSCs活化相关的Arg1、STAT3 mRNA表达水平降低,Arg1、STAT3和p-STAT3蛋白表达下调(P<0.01);芩麻方干预对小鼠肝肾组织切片及生化指标无显著影响。结论芩麻方可能通过下调STAT3信号通路抑制MDSCs增殖和活化从而延长肺癌荷瘤小鼠生存期,且具有用药安全性。该研究有利于芩麻方临床应用的拓展,同时也丰富了肺癌痰污染理论的科学内涵。