芪丑汤对肾间质纤维化大鼠EMT抵抗作用研究

研究芪丑汤对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞转分化的抵抗作用,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制.采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导大鼠肾间质纤维化动物模型,以依那普利为阳性对照药,将大鼠随机分为假手术组,模型组,依那普利组,芪丑汤高剂量组,中剂量组,低剂量组.术后第12天处死大鼠,收集血清测定肌酐(Scr),尿素氮水平(BUN),总胆固醇(CHO),甘油三酯(TG);测定红细胞(RBC),血红蛋白(Hb);采用免疫组化半定量分析法检测各组大鼠肾间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅲ型胶原(ColⅢ)的表达.肾组织采用HE,VG染色评定肾小管间质损伤及胶原沉积程度.模型组α-SMA,ColⅢ表达,BUN、Scr,CHO,TG,RBC,Hb及肾小管间质损伤指数,胶原沉积程度高于假手术组(P<0.01),芪丑汤与依那普利组比较α-SMA,ColⅢ,BUN,Scr,CHO,TG,RBC,Hb的表达均明显降低(P<0.05),肾小管间质损伤指数及胶原纤维沉积减轻.芪丑汤通过下调α-SMA,ColⅢ,BUN,Scr,CHO,TG的表达,升高RBC,Hb,降低肾小管间质损伤指数及胶原沉积,阻止肾小管上皮细胞向间充质细胞的转分化作用,从而减缓肾间质纤维化进程.

芪丑汤拆方对ERS大鼠RIF分子伴侣作用的影响

研究芪丑汤拆方对肾间质纤维化大鼠肾组织内质网应激分子伴侣作用的机理.通过单侧输尿管梗阻建立大鼠肾间质纤维化的动物模型.将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组、芪丑汤全方组、温补脾肾组、泄浊化瘀组.分别于造模后第7天、第14天处死大鼠,收集大鼠血清测定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);摘取左侧肾脏,称肾脏重量比较分析,观察肾脏水肿程度;采用HE染色评定肾小管损伤指数,及肾间质纤维化程度;采用Western Blot免疫印迹法检测各实验组内质网分子伴侣GRP78、GRP94蛋白表达水平.结果表明,术后第7、14天,各治疗组与模型组比较,Scr、BUN的水平均明显降低(P<0.01,P<0.05);第7天芪丑汤全方组与依那普利组比较Scr水平有差异(P<0.05);第14天芪丑汤全方组与依那普利组比较,降低Scr、BUN作用明显(P<0.05);术后第7、14天,除14天的温补脾肾组外各治疗组与模型组相比,均能减小肾重(P<0.01,P<0.05);芪丑汤全方组与依那普利组比较能减轻肾重(P<0.05);术后第7天芪丑汤全方组与模型组相比,能显著减轻肾小管损伤(P<0.05);14天芪丑汤全方组与依那普利组比较,肾小管损伤作用有差异(P<0.05);术后第14天,芪丑汤全方组和泄浊化瘀组与模型组比较GRP78、GRP94的蛋白表达有显著差异(P<0.01),与依那普利组比较,芪丑汤全方组能显著抑制GRP78、GRP94的表达(P<0.01).芪丑汤全方组能够保护单侧输尿管梗阻大鼠的肾功能;减轻肾脏肾盂积水;降低肾小管损伤指数;减少GRP78、GRP94的蛋白表达从而干扰内质网应激过程介导的细胞凋亡通路,阻碍细胞凋亡沉积引起的肾间质纤维化.各治疗组14天的作用效果优于7天,泄浊化瘀组优于温补脾肾组.

芪丑汤对肾大部切除大鼠白细胞黏附分子CD11b,CD44调控机制的研究

目的:探讨芪丑汤对肾大部切除大鼠白细胞黏附分子CD11b,CD44的调控机制。方法:以5/6肾大部切除为模型,将大鼠随机分成假手术组,肾大部切除组,包醛氧淀粉组,肾衰宁组,芪丑汤高、中、低剂量组。假手术组和肾大部分切除组每日给予等量生理盐水灌胃。包醛氧淀粉0.9 g.kg-1;肾衰宁组0.37 g.kg-1;芪丑汤高、中、低剂量组分别为53.1,26.6,13.3 g.kg-1给药。采用流式细胞仪检测,用微量全血直接单标记荧光染色法观察各组大鼠白细胞黏附分子CD11b,CD44水平;用双抗体夹心ELISA法观察大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α);同时观察尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、左肾重、左肾重/体重的变化。结果:模型对照组大鼠CD11b,CD44,TNF-α表达增强,左肾重、左肾重/体重、BUN,Scr明显升高。芪丑汤治疗后,肾大部切除大鼠CD11b,CD44,TNF-α表达下降;BUN,Scr,左肾重、左肾重/体重明显降低。结论:芪丑汤对肾大部切除大鼠白细胞黏附分子CD11b,CD44,TNF-α水平有调控作用,能阻止白细胞浸润、炎症反应,抑制残余肾代偿性肥大,对肾大部切除大鼠的肾脏具有保护作用,且以芪丑汤中、低剂量组效果为好。

HPLC法测定芪丑汤中大黄素的含量

目的:建立中药复方芪丑汤中大黄素的含量测定方法。方法:采用 HPLC 法,色谱柱为 DIKMA ODS C_(18)(4.6mm×200ram,5μm),流动相甲醇-0.1%磷酸溶液(90:10),检测波长:440nm。结果:大黄素在0.22～1.1μg之间与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999;大黄素的平均回收率为98.3%,RSD=1.76%(n=6)。结论:该方法分离效果好,操作简单、准确,可作为芪丑汤的质量评价。