基于超高效液相色谱法(UPLC)测定芪丹利心丸中丹酚酸B的含量

目的:验证超高效液相色谱法(UPLC),测定芪丹利心丸中丹酚酸B的含量的可靠性与可行性,并与高效液相色谱法(HPLC)的测定结果进行比较。方法:UPLC:色谱柱:Acquity UPLC HSS T3 1.8μm,2.1×100mm Column;流动相:乙腈-0.05%磷酸水溶液;流速:0.4 mL/min;梯度洗脱;检测波长:286nm;柱温:35℃;样品室:10℃。HPLC:色谱柱:SunFire C18 (4.6×150mm,5μm);流动相:乙腈:0.05%磷酸水溶液(40:60);流速:1.0 mL/min;检测波长:286 nm;柱温:35℃。结果:在所建立的UPLC色谱条件下,芪丹利心丸中丹酚酸B的含量在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(R=1.0000),精密度、重复性、稳定性及加样回收率结果均符合含量测定的要求;采用UPLC和HPLC测定芪丹利心丸中丹酚酸B的含量,其结果基本一致,但UPLC法分析时间更短,分析效果更佳,溶剂消耗更少,灵敏度更高。结论:测定芪丹利心丸中丹酚酸B的含量,采用UPLC定量分析方法较HPLC法更加快速、简便,可以用于芪丹利心丸中丹酚酸B的含量测定。

芪丹利心丸对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

[目的]观察芪丹利心丸对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。[方法]通过结扎大鼠左冠状动脉(冠脉)前降支的方法诱导形成慢性心力衰竭模型,经过芪丹利心丸药物[1.1、2.2、4.4 g/(kg·d)]4周干预后,利用超声心动仪和左心室压力-容积环检测评价心功能。采用Masson染色观察各组心脏病理学变化,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组胶原蛋白(Collagen I和Ⅲ)的mRNA水平,采用蛋白质免疫印迹实验(Western Blot)检测各组转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7的蛋白表达水平。[结果]模型组心功能显著下降[左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室内压上升或下降最大速率(±dp/dt max),P<0.05],心室重构明显[室间隔厚度(IVST)、左室收缩末期内径(LVESD),P<0.05];与模型组比较,芪丹利心丸能够明显改善慢性心力衰竭大鼠心功能,延缓心室重构进程,其中芪丹利心丸中剂量组和芪丹利心丸高剂量组效果较为明显(P<0.05),并且抑制胶原蛋白CollagenI和Ⅲ的mRNA表达(P<0.05),减少心肌纤维细胞形成,下调心肌纤维化相关蛋白TGF-β1、Smad3蛋白表达(P<0.05),提高抗纤维化蛋白Smad7水平(P<0.05)。[结论]益气活血利水方芪丹利心丸能改善心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心功能,延缓心室重构和心肌纤维化水平,其机制可能与调控TGF-β1/Smads的信号通路有关。

芪丹利心丸减轻心肌梗死大鼠心肌凋亡的机制研究

目的探讨芪丹利心丸对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法采用左冠状动脉结扎法建立心肌梗死大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、芪丹利心丸组和卡托普利组,假手术组只穿线不结扎。术后给予相应药物或去离子水灌胃,治疗4周后取材。采用苏木精伊红(HE)染色观察病理形态,蛋白质印迹法(Western Blot)检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad 2、Smad 3和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-9、Caspase-3的表达,并用原位末端标记测定法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数。结果与假手术组比较,模型组心肌细胞排列紊乱,局部存在明显断裂,TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2及Bcl-2/Bax降低,Bax、Caspase-9及Caspase-3升高(P<0.05或P<0.01),心肌细胞凋亡指数增加(P<0.05)。与模型组比较,芪丹利心丸组和卡托普利组心肌细胞排列相对整齐,TGF-β1、Smad 2、Smad 3表达降低(P<0.05),Bcl-2及Bcl-2/Bax升高,Bax、Caspase-9及Caspase-3表达降低,心肌细胞凋亡指数也降低(P<0.05或P<0.01)。结论芪丹利心丸能够减轻心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与调节TGF-β1/Smads信号通路,改善Bcl-2、Bax及Caspase相关蛋白表达有关。

芪丹利心丸对心肌梗死大鼠左心室心肌组织miR-133a/TGF-β1/CTGF信号通路的影响

目的探讨芪丹利心丸防治心肌梗死后心肌纤维化的可能作用机制。方法采用左冠状动脉结扎术建立心肌梗死大鼠模型,随机分为模型组、卡托普利组和芪丹利心丸组,另设假手术组只穿线不结扎,每组10只。术后第2天,芪丹利心丸组给予芪丹利心丸2.43 g/(kg·d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利片2.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予去离子水10 ml/(kg·d)灌胃。4周后检测各组心脏血流动力学指标[包括心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dt max)、左心室内压最大下降速率(-dp/dt max)],称取左心室重量(LVM)并计算左心室质量指数(LVMI),HE染色进行病理学观察,Masson染色计算胶原容积分数(CVF),检测左心室心肌组织miR-133a、转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及TGF-β1、CTGF蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组LVSP、+dp/dt max,-dp/dt max下降,LVEDP升高,LVMI、CVF增大,miR-133a下调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达增多(P<0.01)。与模型组比较,芪丹利心丸组LVSP、+dp/dt max,-dp/dt max上升,LVEDP降低,LVMI、CVF减小,miR-133a上调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达减少(P<0.05或P<0.01)。HE染色显示,模型组见梗死边缘区残存的心肌纤维混乱、部分断裂,肌间隙增宽明显,而卡托普利组和芪丹利心丸组心肌梗死边缘区心肌纤维走形相对规整,多数胞膜基本完整。结论芪丹利心丸可防治心肌梗死大鼠心肌纤维化,其机制可能与miR-133a/TGF-β1/CTGF信号通路有关。