芪参健骨颗粒的薄层鉴别研究

[目的]建立芪参健骨颗粒中黄芪、丹参、当归、延胡索的薄层色谱(TLC)方法。[方法]采用TLC法,考察供试品前处理工艺、TLC展开条件,对黄芪、丹参、当归、延胡索等药味进行定性鉴别。[结果]黄芪、丹参、当归、延胡索等药味薄层鉴别斑点清晰、阴性对照无干扰、专属性强。[结论]该方法简便可行,重现性好,可用于芪参健骨颗粒的质量控制。

芪参健骨颗粒的制剂工艺研究

目的:优选芪参健骨颗粒的制剂(成型)工艺。方法:以吸湿率、成型率、溶化性、休止角和制粒难易程度为评价指标,单因素试验考察辅料的种类及用量、混合辅料的配比、润湿剂浓度及用量的影响;采用正交试验法进一步优选制剂工艺条件。结果:芪参健骨颗粒最佳制粒工艺条件为:浸膏粉与辅料(糊精∶乳糖=2∶1)按4∶1的比例混合均匀,加1%甜菊素,以90%乙醇为润湿剂,润湿剂用量为辅料与浸膏总量的30%。结论:优选的制剂工艺制备的成品颗粒流动性好,吸湿率、成型率、溶化性、休止角均符合要求,为芪参健骨颗粒制粒工艺条件的确定提供了科学的实验依据。

HPLC测定芪参健骨颗粒丹酚酸B的含量

目的:建立芪参健骨颗粒中丹酚酸B的含量测定方法。方法:HPLC-UVD法,色谱柱:ZorbaxE-clipseSB-C18(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-甲酸-水(27∶8∶2∶63);流速1.0ml·min-1;检测波长:286nm;柱温25℃。结果:丹酚酸B在0.1296～2.591μg范围内线性关系良好,回归方程为Y=6.276×102X-1.878×10(r=0.9996)。加样回收率在97.79%～101.3%之间,平均加样回收率为99.17%,RSD为1.2%。结论:该方法简便快速、结果准确可靠、重复性好,可以较好地控制芪参健骨颗粒的质量。

HPLC-ELSD法测定芪参健骨颗粒中黄芪甲苷的含量

目的:建立芪参健骨颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)。色谱柱:Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6×150mm,5μm);流动相:乙腈∶水=32∶68;流速:1.0mL.min-1;柱温:25℃;漂移管温度:65℃;气体流速:1.8L.min-1。结果:黄芪甲苷在1.001～10.01μg范围内线性关系良好,回归方程为Y=1.634X+1.926(r=0.9995),平均加样回收率为98.58%,RSD=1.5%。结论:该方法简便快速、结果准确可靠、方法重复性好,可用于控制芪参健骨颗粒的质量。

芪参健骨颗粒的急性毒性研究

目的：明确芪参健骨颗粒的急性毒性，对其进行安全性评价。方法：SPF级ICR小鼠，雌雄各半，以不同的剂量灌胃给予小鼠芪参健骨中试流浸膏药液，观察小鼠的毒性反应，采用Bliss法计算半数致死量值（LD50值）。以240g生药／kg剂量灌胃给予大鼠芪参健骨中试流浸膏药液，观察其毒性反应情况，测定最大耐受量（MTD）。结果：以芪参健骨颗粒生药量计，芪参健骨颗粒对雌性小鼠的LD50为299．50g/kg，95％可信限为239．02—340．76g／kg；对雄性小鼠的LD50为387．49g／kg，95％可信限为331．73～480．27g／kg。对大鼠的最大耐受剂量〉240g／生药kg。结论：芪参健骨颗粒在拟订临床用药剂量的50倍以上是安全的。

芪参健骨颗粒中丹酚酸B的含量测定方法分析

目的构建测定芪参健骨颗粒中丹酚酸B含量的方法。方法选择HPLC法,色谱柱为5μm,4.5mm×150mm的SB-C18柱,1mol/L的水∶甲酸∶乙腈∶甲醇的流动相,比例为62∶2∶7∶26。0.9mL/min的流速,243mm的检测波长,25℃的柱温。结果在0.1295～2.590μg/mL的范围内,丹酚酸B含量的线性关系呈现良好,r=0.9996,回收率平均值为99.5%,RSD=1.2%。结论测定丹酚酸B含量,采用高效液相色谱法,较为简单、快捷,测定结果可靠。

芪参健骨颗粒抗炎镇痛作用的研究

目的:观察芪参健骨颗粒的抗炎镇痛作用。方法:将小鼠分为模型对照组,芪参健骨颗粒低、中、高剂量给药组和阳性对照双氯芬酸钠组,ig给药剂量分别为22.5,45,90,0.009 g.kg-1,观察药物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响。将大鼠分为模型对照组,芪参健骨颗粒低、中、高剂量给药组和阳性对照双氯芬酸钠组,ig给药剂量分别为15,30,60,0.006 g.kg-1,观察药物对蛋清所致足跖肿胀影响。以此考察芪参健骨颗粒的抗炎作用;采用小鼠热板法和小鼠醋酸扭体实验(分组、给药剂量同耳廓肿胀实验),考察芪参健骨颗粒的镇痛作用。结果:芪参健骨颗粒3个剂量组和双氯芬酸钠组ig给药能有效防治二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀(抑制率分别为13%,12%,16%,28%)和10%蛋清所致的大鼠足跖肿胀(中剂量效果最佳);能有效抑制小鼠热板和乙酸所致的疼痛(抑制率分别为18%,39%,93%,73%;12%,25%,48%,79%),并呈现一定的剂量相关性。结论:芪参健骨颗粒对急性炎症反应、热刺激和乙酸致痛有明显的抑制作用。

芪参健骨颗粒对股骨头坏死大鼠脂代谢的影响

目的:考察芪参健骨颗粒对激素性股骨头坏死大鼠脂代谢的影响。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为6组,分别为正常组、模型组、芪参健骨颗粒低、中、高剂量给药组(15,30,60 g·kg-1)、阳性对照丹郁骨康丸组(3 g·kg-1),每组10只,除正常组外其余各组均用尾静脉注射脂多糖(20μg·kg-1)连续2 d后,肌肉注射甲基强的松龙20 mg·kg-1连续3 d复制股骨头坏死模型,每隔10 d称体重1次,预防性灌胃给药8周后取血清测定各组大鼠的胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)。取股骨标本,HE染色,光镜下观察骨组织病理改变。结果:与正常组比较,模型组大鼠体重增长缓慢,芪参健骨颗粒高、中、低剂量给药组能不同程度的抑制体重增长缓慢现象(P<0.01);与正常组比较,模型组大鼠TG,TC,LDL-C胆固醇含量增高(P<0.01和P<0.05),HDL-C胆固醇含量降低(P<0.05),给药组能明显抑制股骨头坏死出现脂代谢紊乱。结论:芪参健骨颗粒能明显改善激素性股骨头坏死模型的脂肪代谢紊乱,从而防治激素性股骨头坏死。

芪参健骨颗粒对激素性股骨头坏死大鼠血液流变和小鼠微循环的影响

目的考察芪参健骨颗粒对股骨头坏死模型大鼠血液流变学及小鼠微循环的影响。方法血流变试验:SD大鼠分为正常组、模型组、低、中、高剂量给药组、阳性对照组,采用全自动血流变快测仪测量各组大鼠的血液流变值。微循环实验:ICR小鼠分为空白组,低、中、高剂量给药组,采用多普勒微循环仪考察各组小鼠微循环。结果芪参健骨颗粒能调节激素性股骨头坏死大鼠血流变,低、中剂量药物具有较好的调节血液流变学的作用;各剂量给药组均能促进小鼠耳部微循环。结论芪参健骨颗粒能明显改善激素性股骨头坏死模型的血流变和促进正常小鼠微循环,从而防治激素性股骨头坏死。

芪参健骨颗粒对激素性股骨头坏死大鼠骨组织的影响

目的:明确芪参健骨颗粒对激素合并内毒素所致的股骨头坏死模型大鼠骨组织的影响,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、低、中、高剂量给药组、阳性对照组6组,除正常组外其余各组均用激素加内毒素诱导建立股骨头坏死模型,造模与给药同时进行,低、中、高剂量组分别给予芪参健骨流浸膏15、30、60g·kg-1,阳性对照组给予丹郁骨康丸3g·kg-1,正常组、模型组给予等量生理盐水,给药8周后,腹主静脉取血测血钙血磷含量;取两侧股骨,左侧用于制作组织病理切片,右侧进行骨密度测定,三点弯曲试验。结果:芪参健骨颗粒低、中、高剂量组及阳性对照组骨密度、最大载荷量、单位面积最大载荷量、弹性模量及血钙、血磷含量均显著高于模型组;模型组骨密度、最大载荷量、单位面积载荷量、弹性模量、血钙血磷含量显著低于正常组。结论:芪参健骨颗粒具有防治股骨头坏死的作用,可能通过提高骨密度、骨强度及血钙血磷含量发挥作用。

芪参健骨颗粒的提取工艺研究

目的优选芪参健骨颗粒的最佳提取工艺。方法采用单因素试验和L9(34)正交试验法,考察药材粒度、浸泡时间、溶媒用量、提取时间和提取次数等因素的影响,以黄芪甲苷、丹酚酸B的转移率为指标,采用多指标综合评分法(权重系数为黄芪甲苷∶丹酚酸B=0.6∶0.4)确定最佳提取工艺。结果芪参健骨颗粒的最佳提取工艺为药材饮片浸泡1 h,以12倍量水提取3次,每次0.5 h。结论优选的提取工艺方法可行、工艺稳定、重复性好。

芪参健骨颗粒的纯化工艺

目的:优选芪参健骨颗粒的纯化工艺。方法:采用单因素试验和L9(34)正交试验法,考察乙醇浓度、醇沉时间、药液密度等因素的影响,以黄芪甲苷、丹酚酸B的转移率为评价指标,多指标综合评分法(黄芪甲苷与丹酚酸B权重系数为0.6∶0.4)确定最佳纯化工艺。结果:芪参健骨颗粒的最佳纯化工艺为提取液减压浓缩至药液相对密度1.05～1.10,加95%乙醇使含醇量为50%,醇沉24 h。结论:优选的纯化工艺方法简便可行、工艺稳定、重复性好。