基于PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路探讨芪黄疽愈方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其作用机制

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ/肝X受体(LXR)α/三磷酸腺甘结合盒转运体(ABC)A1信号通路探讨芪黄疽愈方影响对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成及其作用机制。方法 选取25只C57BL/6小鼠作为空白组给予普通饲料喂饲配合生理盐水灌胃,68只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只)给予高脂饲料喂饲配合对应药物灌胃,12 w后通过主动脉苏木素-伊红(HE)染色证实造模成功,通过小鼠状态了解小鼠一般状况;主动脉HE染色、油红O染色观察动脉硬化及脂质沉积情况;肝脏HE染色、油红O染色观察肝脏病理变化、红染脂滴情况,并通过Western印迹、聚合酶链反应(PCR)检测PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达情况。结果 空白组皮毛水润光泽,精神状态良好,活跃,饮食饮水正常;模型组精神萎靡,皮毛晦暗,倦怠懒动,饮食差,饮水正常;与模型组相比,中药组及对照组给药后各症状均有不同程度改善。各组主动脉HE、油红O染色显示,空白组主动脉切片未见AS斑块,主动脉大体标本未见明显红染脂质;与空白组相比,模型组主动脉切片可见斑块,大体标本可见明显红染脂质;与模型组相比,中药组及对照组动脉切片中AS斑块面积较小,大体标本中红染脂质面积较小。小鼠肝脏HE、油红O染色显示,空白组肝细胞结构正常,细胞核位于细胞中央,细胞沿中央静脉为中心向四周放射排列,未见脂肪变性;油红O未见红染脂质;与空白组比较,模型组肝细胞排列紊乱,胞内可见形态不同、大小不等、数量不一的脂滴空泡,油红O切片可见大量红染脂质。与模型组比较,对照组、中药组肝脏病变程度减轻,肝细胞结构大部分清晰可见,脂滴数量减少,油红O红染脂质明显减少。Western印迹检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白的表达;与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组均显著升高(P<0.05)。PCR检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA的表达,与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组显著升高(P<0.05)。结论 芪黄疽愈方能够影响小鼠动脉硬化,升高肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达,调节肝脏脂质代谢,促进胆固醇逆转运,延缓AS进展。

芪黄疽愈方对ASO大鼠血液流变学和血脂指标及miR-133a、TNF-α表达的影响

目的探讨芪黄疽愈方改善肢体动脉硬化闭塞症(ASO)大鼠血液流变学和血脂指标及miR-133a、TNF-α表达的影响。方法雄性SD大鼠96只饲养1 w,随机选择18只作为空白组,剩余78只采用高脂饮食喂饲联合隐动脉内膜损伤的方法建立大鼠ASO模型,造模成功后随机分为模型组18只,西药组、芪黄疽愈方(中药高、中、低浓度组)各15只,分别给予生理盐水(1 ml/100 g大鼠)、西洛他唑片灌胃治疗(18 mg/kg,1次/d)、芪黄疽愈方相应浓度中药灌胃(1.0、0.5、0.1 ml/100 g体质量),观察一般情况并检测血脂、血流变、miR-133a、炎症细胞因子指标,并进行病理分析。结果空白组毛色光泽,饮食、饮水量正常;与中药组比较,模型组精神萎靡,饮食、饮水量相对减少。中药组随着用药剂量的增加,大鼠恢复正常越显著。空白组内皮细胞层完整,平滑肌层以平滑肌细胞和弹力纤维为主;模型组纤维母细胞大量代替内皮细胞,内膜增厚、部分管腔闭塞,空泡细胞、脂质沉积。中药各浓度组纤维母细胞大量代替内皮细胞,内膜增厚、部分管腔闭塞,空泡细胞、脂质沉积随着中药浓度增加而减少。西药组纤维母细胞大量代替内皮细胞,内膜增厚、部分管腔闭塞,有少量空泡细胞、脂质沉积较少。治疗后,与空白组比较,模型组血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、红细胞聚集指数、低切指数、高切指数显著升高,HDL显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,高浓度组血清TC、TG、红细胞聚集指数、低切指数、高切指数显著下降(P<0.05,P<0.01)。治疗后模型组TNF-α含量、miR-133a、TNF-αmRNA及蛋白表达水平明显高于空白组(P<0.05,P<0.01),中药高浓度组以上指标显著低于模型组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-133a与血脂指标(TC、TG、LDL-C),血流变学指标(红细胞聚集指数、低切指数、高切指数及动脉脂肪沉积量)呈正相关(r=0.633、0.732、0.573、0.749、0.764、0.832、0.583;P=0.016、0.002、0.025、0.011、0.003、0.001、0.020)。结论芪黄疽愈方在大鼠ASO模型中具有调节脂质代谢与降低血液黏稠度的作用,从而抑制炎症细胞因子TNF-α表达,也能抑制miR-133a mRNA及蛋白表达,从而起到保护动脉内皮、干预ASO发展进程的作用。

芪黄疽愈方对大鼠肢体动脉硬化闭塞症的实验研究

目的建立动物模型,观察芪黄疽愈方对大鼠肢体动脉硬化闭塞症(arteriosclerosis occlusive disease,ASO)的治疗作用。方法 60只Wistar大鼠采用高脂饮食喂饲联合隐动脉内膜损伤的方法制作大鼠ASO模型,以西洛他唑为对照,观察芪黄疽愈方各浓度组对大鼠血脂、血流变指标的不同影响。结果中药高浓度组、西药组大鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇,全血黏度(高切、低切)、红细胞聚集指数及红细胞刚性指数均显著低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.01);中药高浓度组、西药组差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪黄疽愈方可改善脂质代谢紊乱,降低血脂水平,改善血流变,达到治疗肢体动脉硬化闭塞症的目的。

“芪黄疽愈方”治疗糖尿病肢体动脉闭塞症80例临床研究

目的:观察自拟芪黄疽愈方治疗糖尿病肢体动脉闭塞症的临床疗效及安全性。方法:选取160例患者,随机分为治疗组与对照组各80例。对照组给予前列地尔注射液联合西药西洛他唑治疗,治疗组给予前列地尔注射液联合中药芪黄疽愈方治疗。以3个月为1个疗程,治疗1个疗程停药后,再随访3个疗程后进行疗效观察。观察2组治疗前后肢体循环改善度、血脂、血流变、血尿便常规、肝功能、心电图、肝胰脾彩超等指标,评价其综合疗效。结果:第1疗程末,2组有效率差异无统计学意义,治疗组疼痛症状评分明显高于对照组(P<0.05),跛行指数和ABI、PPG峰值均较治疗前明显增加(P<0.05),TC、高切指数、低切指数均较治疗前降低(P<0.05);两组间比较,跛行指数和ABI差异有统计学意义(P<0.05),PPG峰值、血脂、血流变各指标差异无统计学意义(P>0.05)。第四疗程末肢体循环各项指标、跛行指数、ABI、PPG峰值、血脂、血流变均较第1疗程后明显改善(P<0.05),且治疗组明显高于对照组(P<0.05),均具有显著性差异。2组治疗前后均未出现不良反应。终点事件发生率治疗组低于对照组。结论:芪黄疽愈方治疗糖尿病肢体动脉闭塞症疗效确切,可有效改善患者肢体循环,且具有良好的安全性。

芪黄疽愈方对大鼠肢体动脉硬化闭塞症血流变的影响

目的:研究芪黄疽愈方对大鼠肢体动脉闭塞症血流变的影响。方法:将50只Wistar大鼠采用高脂饮食喂饲联合隐动脉内膜损伤的方法制作大鼠ASO模型,造模成功后随机分为模型组、中药组(芪黄疽愈方高、低、中浓度组)、西药组,另取10只Wistar大鼠为空白组。空白组给予普通饮食喂养,模型组给予高脂饲料喂养并以生理盐水灌胃,中药组给予高脂饲料喂养并以相应浓度中药灌胃,西药组给予高脂饲料喂养,前列地尔肌注联合西洛他唑口服,12周后腹主动脉取血,测量血流变学各指标。结果:与正常组相比,模型组大鼠全血黏度、高、低切指数、红细胞聚集指数明显升高;与模型组比较,西药组、中药高浓度组大鼠血流变各项指标下降明显;与西药组比较,中药高浓度组血流变各指标差异不明显。结论:芪黄疽愈方能有效防止动脉硬化闭塞症的发生和发展,对动脉硬化闭塞症的治疗起着积极的作用。

芪黄疽愈方调节ASO大鼠炎症细胞因子

目的 观察芪黄疽愈方对大鼠肢体动脉硬化闭塞症(ASO)血清炎症因子内皮素(ET)-1、一氧化氮(NO)、白细胞介素(IL)-1β 及动脉内皮肿瘤坏死因子(TNF)-α、核因子(NF)-κB蛋白表达的影响.方法 50只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、疾病模型组、芪黄疽愈方高、中、低浓度组,共5组,每组10只,高脂饮食喂饲联合隐动脉内膜损伤的方法建立大鼠ASO模型,造模1 w后,予以芪黄疽愈方高、中、低剂量进行干预12 w,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中ET-1、NO、IL-1β 含量;Westen印迹法检测动脉内皮NF-κB、TNF-α 的蛋白表达水平变化.结果 与疾病模型组比较,芪黄疽愈方各剂量组血清中ET-1、IL-1含量显著降低,NO含量显著升高,动脉内皮NF-κB、TNF-α的蛋白表达水平显著下降(P<0.01,P<0.05).结论 芪黄疽愈方可通过抑制炎症反应,保护血管内皮,干预ASO发展的进程.

芪黄疽愈方对糖尿病肢体动脉闭塞症踝肱指数及跛行指数的影响

目的 :观察芪黄疽愈方对糖尿病肢体动脉闭塞症(diabetic limb arterial obliteration,DLAO)患者踝肱指数、跛行指数及跛行距离的影响。方法:将160例DLAO患者按随机数字表法分为治疗组和对照组各80例。在使用常规降糖药物和前列地尔注射液的基础上,治疗组应用芪黄疽愈方治疗,对照组应用西药西洛他唑治疗。观察两组治疗前后踝肱指数、跛行指数、跛行距离及不良反应情况。结果:治疗后两组踝肱指数、跛行指数、跛行距离较治疗前均显著提高,差异有统计学意义(P<0.05),且治疗组提高更明显,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组均无明显不良反应。结论:西洛他唑和芪黄疽愈方均可有效改善患者肢体血液循环,芪黄疽愈方较西洛他唑疗效更佳,安全性良好。

芪黄疽愈方对ASOLE大鼠肝脏脂质代谢相关因子表达的影响

目的:观察芪黄疽愈方对下肢动脉硬化闭塞症(arteriosclerosis occlusive disease of the lower extremities,ASOLE)大鼠肝脏脂质代谢相关因子B类Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor class B typeⅠ,SR-BⅠ)、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)-α及单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)表达的影响。方法:高脂饮食联合隐动脉内膜损伤法制作大鼠ASOLE模型,Western印迹检测肝脏SR-BⅠ,ELISA检测肝脏PPAR-α、MCP-1。结果:与空白组比较,模型组SR-BⅠ表达明显降低,芪黄疽愈方处理后表达明显升高;模型组PPAR-α较空白组显著性降低,芪黄疽愈方处理升高PPAR-α水平,其中高、中浓度组与模型组有显著性差异;与空白组比较,模型组MCP-1显著性升高,芪黄疽愈方处理降低MCP-1水平,其中高浓度组较模型组显著性下降。结论:芪黄疽愈方能够升高SR-BⅠ、PPAR-α,降低MCP-1水平,可能与其调节脂质代谢从而抑制炎症反应具有相关性。

前列地尔注射液、西洛他唑片联合芪黄疽愈方辅助治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床研究

目的:探讨前列地尔注射液、西洛他唑片联合芪黄疽愈方辅助治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床价值。方法:选取动脉硬化闭塞症(ASO)患者160例,根据治疗方案将其分为观察组和对照组,两组患者均给予前列地尔及西洛他唑治疗。在此基础上观察组患者口服芪黄疽愈方汤剂,比较治疗前、治疗后3个月患者踝臂指数(ABI)、患肢血液循环灌注情况及药物治疗有效率。结果:两组患者治疗有效率差异无统计学意义;治疗后观察组患者皮肤温度、色泽、疼痛高于对照组;治疗后观察组患者ABI高于对照组;差异有统计学意义(P<0.05)。结论:前列地尔注射液、西洛他唑片联合芪黄疽愈方辅助治疗可有效改善下肢动脉硬化闭塞症患肢血液循环,提高临床疗效。

芪黄疽愈方调节ApoE^(-/-)小鼠巨噬细胞相关因子干预动脉粥样硬化形成的机制研究

目的:探讨芪黄疽愈方调控巨噬细胞相关因子影响ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的作用机制。方法:68只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只),另设C57BL/6小鼠25只为空白组。高脂饲料喂养构造动脉粥样硬化ApoE^(-/-)小鼠模型,中药组按0.2 mL/20 g体质量予芪黄疽愈方颗粒灌胃,对照组按0.2 mL/20 g体质量予阿托伐他汀钙片悬混液灌胃,空白组、模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,连续给药12周。观察各组小鼠一般状态、体质量;主动脉HE染色、Masson染色、油红O染色,观察血管病理形态、斑块面积;血清ELISA检测巨噬细胞相关因子白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-13、干扰素-γ(IFN-γ)、脂多糖(LPS)、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-6、IL-10、IL-12表达情况;免疫荧光观察巨噬细胞表面标志物iNOS、CD206表达情况。结果:模型组、中药组、对照组小鼠精神萎靡,毛色暗淡,前期增长迅速,后逐渐减缓,其中模型组体质量显著高于其他各组(P<0.01)。HE染色、Masson染色、油红O染色病理图片显示:模型组较空白组斑块面积显著增大,胶原纤维含量明显减少,主动脉红染脂质显著增加(P<0.01),中药组、对照组较模型组斑块面积降低,胶原纤维含量明显增多,主动脉红染脂质显著减少(P<0.01)。ELISA检测结果示:模型组小鼠血清IL-1β、IFN-γ、LPS、IL-6、IL-12显著高于空白组(P<0.05),IL-4、IL-13、TGF-β、IL-10显著低于空白组(P<0.05);与模型组比较,中药组小鼠血清IL-1β、IFN-γ、LPS、IL-6、IL-12显著降低(P<0.05),IL-4、IL-13、TGF-β、IL-10的表达水平显著提高(P<0.05)。免疫荧光染色示:M1型巨噬细胞标志物iNOS在模型组阳性表达较空白组高(P<0.01),中药组表达较模型组低(P<0.05),M2型巨噬细胞标志物CD206在模型组阳性表达较中药组低(P<0.01)。结论:芪黄疽愈方可减少M1型巨噬细胞,抑制M1型巨噬细胞相关因子IL-1β、IFN-γ、LPS、IL-6、IL-12的表达;增加M2型巨噬细胞,促进M2型巨噬细胞相关因子IL-4、IL-13、TGF-β、IL-10的生成,这可能是其干预动脉粥样硬化发生发展的机制。

芪黄疽愈方联合前列地尔注射液治疗下肢动脉硬化闭塞症随机对照研究

目的观察芪黄疽愈方联合前列地尔注射液治疗下肢动脉硬化闭塞症(ASOLE)的临床疗效。方法采用随机对照方法,将80例ASOLE患者按随机数字表分为试验组和对照组,每组各40例。两组均采用常规治疗和前列地尔注射液2周,试验组口服芪黄疽愈方(每日1剂,分早、晚2次服用),对照组口服西洛他唑片(100 mg/次,2次/日),两组均连续治疗3个月。分别于治疗前、治疗后、治疗结束后6个月观察患者皮肤温度、色泽、疼痛、踝肱指数(ABI)评价疗效。结果治疗后,试验组与对照组愈显率分别为67.5%(27/40)、65.0%(26/40),两组差异无统计学意义(χ^2=0.056,P=0.813);试验组与对照组有效率分别为95.0%(38/40)、92.5%(37/40),两组差异无统计学意义(χ^2=0.213,P=0.644)。两组治疗后、治疗结束后6个月,疼痛评分、ABI均较治疗前改善(P<0.05),且治疗结束后6个月优于治疗后(P<0.05)。治疗后,对照组皮肤温度、疼痛评分优于试验组(P<0.05);治疗结束后6个月,试验组皮肤温度、色泽、疼痛评分和ABI均优于对照组(P<0.05)。结论芪黄疽愈方治疗ASOLE临床疗效确切,对于皮肤温度、疼痛、色泽、ABI的远期改善效果优于西洛他唑。

芪黄疽愈方对下肢动脉硬化闭塞症大鼠VEGF蛋白表达及相关信号通路的影响

目的:探讨芪黄疽愈方对下肢动脉硬化闭塞症(ASOLE)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及相关信号通路的影响。方法:高脂饮食联合隐动脉内膜损伤法制作大鼠ASOLE模型。芪黄疽愈方处理12周。ELISA检测血清VEGF。Western Blot检测肌肉组织VEGF、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、p-ERK、p38、p-p38。结果:模型组、芪黄疽愈方处理组大鼠血清VEGF显著低于空白组(P<0.01);与模型组比较,各剂量芪黄疽愈方处理显著增加了ASOLE大鼠血清VEGF蛋白水平(P<0.01),其中芪黄疽愈方高、中浓度组显著高于低浓度组(P<0.01)。模型组、芪黄疽愈方各剂量组大鼠肌肉组织VEGF、ERK、p-ERK、p38、p-p38蛋白水平显著低于空白组(P<0.05);与模型组比较,芪黄疽愈方处理均有效升高了病变肌肉组织VEGF、ERK、p-ERK、p38、p-p38蛋白水平(P<0.05),与药物浓度呈相关性。结论:芪黄疽愈方可促进VEGF分泌,激活ERK、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路,这可能参与了其治疗ASOLE的机制。