基于HPLC法及UPLC-MS法测定芫花饮片炮制前后7种成分的含量变化

目的:建立HPLC法及UPLC-MS法测定芫花中银椴苷、木犀草素、芹菜素、绿原酸、羟基芫花素、芫花素及芫花酯甲7种化学成分含量的方法,分析芫花炮制前后化学成分的变化。方法:采用HPLC法,测定银椴苷、木犀草素、芹菜素、绿原酸、羟基芫花素和芫花素6种成分的含量,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸(B)梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),进样量10μL。同时采用UPLC-MS方法测定芫花酯甲的含量,色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3 C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸(B)梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温35℃,进样量1μL。结果:7种成分的含量由高到低依次为芫花素>绿原酸>银椴苷>芹菜素>羟基芫花素>木犀草素>芫花酯甲。芫花炮制后7种成分的含量均发生一定程度的变化,其中绿原酸成分在炮制后含量有升高有降低,变化不明显;对于银椴苷和芹菜素成分,炮制后含量降低;对于木犀草素、羟基芫花素和芫花素3个成分,炮制后含量升高;对于芫花酯甲成分,炮制后含量降低。结论:该方法简便、灵敏、高效,为考察芫花饮片炮制前后的质量变化提供了技术支持。

基于网络药理学和分子对接探讨中药芫花治疗原发性痛经的作用机制

通过网络药理学和分子对接技术预测芫花治疗原发性痛经的功效物质基础及其潜在的作用机制。基于TCMSP数据库预测获得芫花的活性成分和作用靶点,同时借助DisGeNET等数据库获得与原发性痛经相关的靶点,基于获得的芫花与原发性痛经的交集靶点,使用STRING数据库构建交集靶点蛋白互作网络,并采用Cytoscape3.7.2构建芫花–活性成分–靶点–原发性痛经网络。采用DAVID数据库进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,利用Autodock tools将核心靶点与对应的活性成分进行分子对接。结果表明,中药芫花治疗原发性痛经的核心活性成分为芫花素、柚皮素、7-羟基-6-甲氧基-3,7’-双香豆素、龙胆山酮酚、羟基芫花素、山奈酚、木犀草素、谷甾醇、羟光刺苞菊内酯;关键靶点包括ESR1、PTGS1、PTGS2、GSTM1、CYP1A1、OPRM1、NTRK2和NR1H2;涉及的生物学过程主要与老化、一氧化氮生物合成过程的正向调节、细胞质和ATP酶结合等有关;KEGG通路主要富集在癌症的发病途径、化学致癌作用–受体激活、化学致癌作用-DNA加合物等。此外,分子对接显示核心活性成分芫花素与关键靶点蛋白之间的对接能量值均小于–7.0kcal·mol–1,具有强烈的结合活性,能形成稳定的结构构象。运用网络药理学和分子对接方法从“中药–成分–靶点–疾病”的思路初步探究芫花治疗原发性痛经的活性物质基础,为深入研究该类成分治疗痛经的作用机制奠定基础。

醋芫花标准汤剂HPLC特征图谱研究

目的:建立醋芫花标准汤剂高效液相色谱法(HPLC)特征图谱,在全面表征其成分特征的同时,能够区别于芫花标准汤剂。方法:采用Kromasil Cl8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为35℃,进样量为20µL,检测波长为238 nm。将得到的21批芫花标准汤剂和21批醋芫花标准汤剂特征图谱经“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004A版)进行峰匹配,分别明确共有峰个数,并生成对照特征图谱。通过对比,明确芫花标准汤剂与醋芫花标准汤剂特征图谱的区别点,指认共有特征峰,并对比指认的特征峰峰面积的变化情况。结果:通过对比生成的芫花标准汤剂和醋芫花标准汤剂对照特征图谱,发现其中tR在27.0 min的特征峰是关键区别点,推测该成分可能为醋芫花挥发油中新生成的烯类化合物。指认7个特征峰成分,分别为芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芫花素-5-O-茜草苷、木犀草素、椴树苷、芹菜素、羟基芫花素和芫花素,其含量在炮制前后并没有明显的变化。结论:该方法简单可行,能够较好地区分芫花标准汤剂与醋芫花标准汤剂,从源头加强样品质量控制的同时,可为醋芫花标准汤剂及其配方颗粒质量控制提供参考。

芫花叶片和茎段离体再生体系的构建

【目的】芫花(Daphne genkwa Sieb.et Zucc.)是野生名优乡土花木和传统药用植物,具有很高的生态、观赏和药用价值。研究和解决芫花的快速繁殖技术,是对其进行资源保护和开发利用的首要条件。【方法】以芫花健壮植株的叶片和茎段为外植体,研究不同消毒方法对芫花外植体的消毒效果,以及不同激素配比对其愈伤组织的诱导、不定芽增殖和生根的影响,从而构建其高效的离体组织再生体系。【结果】分别用75%乙醇溶液消毒25~35 s,2%NaClO、0.1%HgCl_(2)溶液处理芫花外植体15 min,芫花茎段外植体的污染率为52.7%,芫花叶片外植体的污染率为49.0%。MS+0.8 mg/L 6-BA+0.35 mg/L NAA为芫花茎段外植体最佳初代诱导培养基,愈伤组织诱导率达79.7%,不定芽诱导率达96.4%;MS+0.8 mg/L IBA+0.85 mg/L NAA为芫花叶片外植体最佳初代诱导培养基,愈伤组织诱导率达99.8%,不定芽诱导率达94.5%。MS+0.35 mg/L 6-BA+0.35 mg/L IBA为芫花茎段和叶片最佳继代增殖培养基,增殖系数最高达7.36,平均芽高最高为2.47 cm;MS+0.6 mg/L IBA+1.0 mg/L NAA+0.08 g/L抗坏血酸为芫花茎段外植体最佳生根培养基,平均生根3.67条,根长2.16 cm;MS+0.6 mg/L IBA+0.6 mg/L NAA+0.07 g/L抗坏血酸为芫花叶片外植体最佳生根培养基,平均生根1.33条,根长1.95 cm。【结论】建立了以芫花叶片和茎段为外植体的离体组织再生体系,其愈伤组织诱导率、不定芽诱导率、增殖系数和生根率均较高,有效的解决了芫花的苗木高效繁殖技术难题。

芫花素等黄酮类化合物对阿尔兹海默症的保护作用及其机制研究

阿尔兹海默症是一种与年龄相关的退行性疾病,以Aβ沉积形成斑块、Tau蛋白过度磷酸化形成神经纤维缠结为主要病理表现。黄酮类化合物是一种自然界广泛存在的次级代谢产物,具有神经保护作用。该研究以冈田酸(OA)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y建立Tau蛋白过度磷酸化的AD体外细胞模型,基于该细胞模型对青藏高原特色植物中的黄酮类化合物进行体外抗AD活性的研究。利用Western blot检测Ser^(396)位点的磷酸化水平,评价黄酮类化合物对该模型的保护作用。并利用上述AD模型研究筛选得到的黄酮类化合物对线粒体功能(活性氧和膜电势)以及相关蛋白表达水平的影响。研究结果表明,筛选得到的有效化合物芫花素(T8)可通过降低Tau蛋白过度磷酸化、改善线粒体功能障碍和降低细胞内ROS等方面起到神经保护作用,对进一步开发预防或治疗AD药物研究提供实验依据。

芫花不同药用部位芫花素和芫花酯甲含量比较

目的比较芫花根、叶、花蕾中芫花素和芫花酯甲含量差异,为该植物资源的可持续发展提供试验数据。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),芫花素流动相为甲醇-水-冰醋酸(65∶35∶0.5),流速0.8 mL/min,柱温为40℃,检测波长338 nm;芫花酯甲流动相为甲醇-水(82∶18),柱温为40℃,流速1.0 mL/min,检测波长233 nm。结果芫花素在3个部位中的含量从高到低依次为:花蕾(0.30%)、叶(0.038%),根中未检测到该成分;芫花酯甲在3个部位中的含量从高到低依次为:叶(0.028%)、根(0.025%)、花蕾(0.0039%)。结论以叶代根、花蕾提取芫花酯甲,可以拓宽药源,实现植物资源的可持续发展。

芫花叶的黄酮类化学成分分析

目的:分离与鉴定芫花叶黄酮类化合物。方法:将芫花叶乙酸乙酯萃取物利用硅胶柱和Toyopearl HW-40(C)柱层析法分离黄酮类化学成分,利用化学反应及HNMR谱鉴定其结构。结果与结论:从芫花叶的乙酸乙酯萃取物中分得两种黄酮类化合物Ⅰ和Ⅱ,分别鉴定为羟基芫花素、芫花叶苷,将Ⅱ用稀盐酸水解去一个葡萄糖之后,得其苷元Ⅱa羟基芫花素。

RP-HPLC法同时测定芫花中芹菜素、羟基芫花素、芫花素的含量

目的对芫花中芹菜素(Ⅰ)、3′-羟基芫花素(Ⅱ)和芫花素(Ⅲ)3种黄酮苷元进行含量测定。方法采用反相高效液相色谱法,使用大连依利特HypersilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%醋酸水溶液(60∶40),流速1.0mL·min^-1,检测波长340nm,柱温25℃。结果化合物Ⅰ～Ⅲ的线性范围(n=6)依次为0.1~5.0μg(r=0.9999),0.1~1.0μg(r=0.9999),0.1~5.0μg(r=0.9999)。化合物Ⅰ～Ⅲ平均回收率(n=6)分别为99.6%、102.8%,100.2%;RSD分别为1.8%、1.5%,1.1%。结论本方法可准确地同时测定芫花中3个黄酮苷元的含量,方法精密度高、简便、快速。

芫花药材中芫花酯甲和芫花酯乙UPLC-MS含量测定方法

目的:对芫花药材中含量较低的毒效成分芫花酯甲和芫花酯乙建立相关含量测定方法,为芫花的临床使用安全性及进一步研究提供参考。方法:采用UPLC-MS,选择离子扫描法建立相关检测方法。结果:建立了芫花药材中芫花酯甲和芫花酯乙含量测定方法,得到芫花酯甲的线性回归方程为Y=10.48X+1 234,r=0.998,芫花酯乙的线性回归方程为Y=10.92X+1 997,r=0.995。结论:所建立的芫花药材UPLC-MS含量测定方法灵敏性高,操作简便,耐用性好,测定结果可靠,能较好地测定芫花药材中微量二萜类成分。

芫花花蕾中一个新的瑞香烷二萜类化合物

为了研究中药芫花(Daphne genkwa)的干燥花蕾化学成分及其抑制皮肤病原真菌活性,采用正相硅胶及半制备HPLC等多种色谱技术对芫花花蕾95%乙醇提取物进行分离纯化得到2个瑞香烷型二萜类化合物,并通过MS、NMR和ECD等波谱技术和文献数据比对鉴定化合物结构,分别为daphgenin A(1)和yuanhuakine B(2),其中化合物1为新的瑞香烷型二萜类化合物。同时,结合MIC法测定该化合物对皮肤真菌犬小孢子菌、红色毛癣菌、须癣毛癣菌和马拉色菌的抑制活性,结果表明化合物1和2对皮肤病原真菌有一定的抑制活性,化合物1对红色毛癣菌和须癣毛癣菌的抑制活性与阳性对照组相当(MIC值4.0μg/mL),化合物2对红色毛癣菌显示显著的抑制活性,其MIC值为2.0μg/mL。

芫花根中菖蒲烷型倍半萜4-epi-15-hydroxyacorenone抗炎机制研究

目的:对从芫花根中分离的菖蒲烷型倍半萜4-epi-15-hydroxyacorenone进行抗炎活性研究,探讨其抗炎分子机制,为芫花药用资源的合理开发利用提供理论依据。方法:采用RAW 264.7巨噬细胞建立炎症模型,分为空白组、模型组、给药组。通过Griess法检测4-epi-15-hydroxyacorenone对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞释放炎症介质一氧化氮(NO)的抑制活性,运用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞毒性,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测化合物对炎症介质前列腺素E2(PGE2)、炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的抑制作用,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测化合物对炎症蛋白iNOS和COX-2高表达的影响,对核转录因子κB(NF-κB)信号通路中IκB-α蛋白的降解以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路中ERK、JNK、p38蛋白磷酸化的抑制作用。结果:与空白组相比,模型组经LPS刺激后炎症因子、炎症介质的释放,炎症蛋白的表达均显著增加(P<0.01),与模型组相比,给药组菖蒲烷型倍半萜4-epi-15-hydroxyacorenone可阻断ERK、JNK蛋白磷酸化(P<0.01),抑制iNOS和COX-2的高表达并且呈良好的剂量依赖关系(P<0.01),显著降低炎症因子TNF-α、IL-6以及炎症介质NO、PGE2的释放(P<0.01),但对NF-κB信号通路的激活无任何影响。结论:4-epi-15-hydroxyacorenone主要通过调控MAPKs信号通路的激活,下调LPS诱导的炎症蛋白的高表达,抑制RAW 264.7巨噬细胞中炎症介质以及炎症因子的释放发挥抗炎作用。

芫花素分析检测的研究进展

芫花素是研究活跃的黄酮类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、降低血脂和胆固醇、护肝等良好的生理活性。介绍了芫花素的结构特点和物化性质,综述了近年来芫花素在医药工业中分析检测的研究进展,以期为芫花素的检测技术及相关中药质量控制提供参考,并展望了其发展前景。

芫花炮制前后羟基芫花素、芫花素的含量测定

应用双波长薄层扫描法对芫花炮制前后羟基芫花素和芫花素的含量进行了测定对比,结果表明:醋炙芫花中羟基芫花素、芫花素的含量均高于生芫花,不同的醋制品种中其含量亦有差别。

不同炮制方法对芫花中4种黄酮苷元含量的影响

目的:采用高效液相色谱法分析芫花不同炮制品中4种黄酮苷元成分的含量,研究不同炮制方法对4种成分的影响。方法:采用Hanbon Hedera C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相甲醇-0.4%醋酸水溶液(70∶30),流速1.0mL.min-1,柱温30℃,检测波长338nm。结果:在线性范围内,木犀草素、芹菜素、3'-羟基芫花素、芫花素4种化合物分离度良好。在相应浓度范围内,4种化合物线性关系良好,r均在0.999 8以上;精密度RSD≤1.64%;平均加样回收率为99.69%～101.70%。结论:该方法快速、准确,适用于芫花不同炮制品中4种化学成分的定量分析。在7种炮制方法中,醋制法(药典)较其他6种方法能明显提高木犀草素、芹菜素、3'-羟基芫花素、芫花素的含量,同时能提高总黄酮苷元含量。

芫花药材质量标准研究

目的:对17批芫花药材样品进行定性定量试验研究,提高芫花药材质量标准。方法:采用薄层色谱法鉴别芫花药材中芫花素成分;以高效液相色谱法测定其含量并制定限度要求,色谱柱为 Kromasil C_(18)(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(65:35:0.5),流速为0.8 mL·min^(-1),柱温为40℃,检测波长为338 nm。结果:芫花药材中芫花素的薄层色谱鉴别特征明显,专属性强;芫花药材中芫花素的含量测定线性范围为0.086～0.432 μg(r=0.9998),平均回收率(n=5)为100.4%(RSD=2.4%),测得芫花药材中芫花素含量不低于0.2%。结论:本方法简单准确地对芫化药材的有效成分芜花素进行定性定量测定,为提高芫花药材的质控方法提供了实验数据,对于保证其质量和临床疗效具有重要的意义。

HPLC法分析炮制对芫花中芫花素的影响

用HPLC法分析了芫花各种炮制品中芫花素的含量变化。结果表明:芫花经不同方法炮制后芫花素的含量均有所降低,以醋炙降低最少。并对各大区芫花饮片的芫花素含量进行了定量分析,为制订芫花饮片的质量标准提供了实验依据。

HPLC法测定芫花中芫花素的含量

采用Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ５ＲＰ－１８柱，甲醇－水－冰乙酸（６５：３５：５）为流动相，３３２ｎｍ检测，建立了ＨＰＬＣ测定芫花中芫花素含量的方法，加样回收率为９５．４６％，ＲＳＤ为１．１５％，测得芫花中芫花素的含量为０．１５５５％。

芫花粗提物对鳞翅目幼虫消化酶和解毒酶的影响

卫矛尺蠖和菜粉蝶幼虫取食涂有芫花乙醇粗提物的叶子后 ,1～ 2 d内即可使消化酶及谷胱甘肽酶活力指数显著上升 ,此后回落到对照或显著低于对照水平 .电镜观察表明 ,2 4h后 ,中肠细胞粗糙内质网上的蛋白体数量增加 ,着色加深 ,显示这些部位的功能更趋活跃 ;48h后 ,细胞内线粒体内嵴开始模糊 ,体积肿大 ;72 h后 ,部分线粒体成为空壳 .

HPLC法测定芫花中芫花酯甲的含量

采用Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ５ＲＰ１８柱，以甲醇－水（８２：１８）为流动相，检测波长为２３２ｎｍ，进样量在７．６×１Ｏ￣－３～０．７６μｇ间线性良好，加样回收率为９９．５６％，ＲＳＤ为３．６１％（ｎ＝９）。测得其含量为０．００８４８％。