芬戈莫德(FTY720)通过激活Nrf2/HO-1通路促进大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复

目的研究芬戈莫德(FTY720/fingolimod)对脑缺血再灌注损伤的治疗作用并探索其保护机制。方法60只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤(MCAO/R)模型组及FTY720组。MCAO/R组和FTY720组用Longa缝合法建立MCAO/R模型。采用改良神经功能损伤评分法评估大鼠神经功能;HE染色观察大脑皮层(额颞叶)神经细胞形态;实时定量PCR及Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化还原酶1(NQO-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA及蛋白水平;化学试剂盒检测超氧化物岐化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果与MCAO/R组相比,FTY720组大鼠神经损伤评分降低,细胞破坏减轻,Nrf2、HO-1及NQO-1上调,TNF-α、IL-6及IL-1β下调,SOD活性提高,MDA含量减少。结论FTY720促进MCAO/R后大鼠神经功能恢复,可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

芬戈莫德对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织中基质金属蛋白酶表达的影响

目的:探讨芬戈莫德(FTY720)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法 :按随机数表法将Wistar大鼠随机分成6组(正常对照组、EAE模型对照组、FTY720高剂量组、FTY720中剂量组、FTY720低剂量组、阳性对照组),每组10只。除正常对照组外,其余各组采用豚鼠全脊髓匀浆诱导造模,造模第15天,除正常对照组及EAE模型对照组外,其余4组分别给予高(6.17 mg/mL)、中(3.09 mg/mL)、低(1.54 mg/mL)剂量FTY720及环孢菌素(3.70 mg/mL),每天观察大鼠神态及形体变化,记录大鼠体质量及神经功能评分情况。给药2周后处死大鼠,取脑和脊髓进行HE组织染色观察病理改变,并采用免疫组化方法检测MMPs蛋白的表达。结果:(1)EAE模型对照组神经功能评分(3.50±0.71)分,FTY720各剂量给药组神经功能评分均明显低于EAE模型对照组(P<0.01),FTY720高剂量组神经功能评分(0.61±0.48)分,与阳性对照组神经功能评分(0.68±0.48)分比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)HE组织染色:EAE模型对照组免疫后大鼠的脑组织和脊髓组织均有多个部位的血管炎,炎性细胞聚集在血管周围形成"袖套"样改变,白质改变较为显著。在FTY720各剂量给药组大鼠血管炎范围、数量及程度已明显减轻,其中FTY720高剂量组及阳性对照组的脑和脊髓形态较接近正常对照组;(3)MMPs检测发现正常对照组中MMP-2、MMP-9表达呈阴性,EAE模型对照组呈阳性,FTY720各剂量给药组中,胞浆褐色明显减少,其中FTY720高、中剂量组较接近正常对照组。结论:FTY720能够抑制EAE大鼠发病过程中MMPs蛋白的表达,起到改善EAE大鼠神经功能的作用。

芬戈莫德对创伤性脑损伤小鼠学习和记忆能力的影响

目的：探讨芬戈莫德（FTY-720）对创伤性脑损伤（TBI）小鼠学习和记忆能力的影响作用。方法将48只C57BL/6小鼠随机均分为假损伤组、TBI模型组、FTY-720治疗组（TBI＋FTY组）。采用控制性皮层损伤法制备小鼠TBI模型，治疗组予以腹腔注射FTY-720。Western-blotting检测海马区活化型半胱天冬酶-3（cleaved caspase-3）和 B 细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）的表达水平。Morris 水迷宫试验评估小鼠学习与记忆能力。结果与假损伤组比较，TBI 组海马区cleaved cas？pase-3的表达增加，Bcl-2的表达下降，小鼠的逃避潜伏期时间延长，平台象限的停留时间和穿越次数减少（P＜0.05）。与TBI组比较，TBI＋FTY组的cleaved caspase-3的表达减少，Bcl-2的表达显著增加，小鼠的逃避潜伏期时间缩短，平台象限的停留时间和穿越次数显著增加（P＜0.05）。结论 TBI可引起海马区细胞凋亡增加和学习记忆能力减退，FTY-720可有效地减少细胞凋亡程度和改善TBI后认知功能障碍。

FTY720对EAE小鼠脑组织NO含量和iNOS表达影响的研究

目的探讨芬戈莫德(fingolimod,FTY720)对试验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑组织中一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达的影响。方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机平均分为3组,EAE组运用MOG35-55构建EAE小鼠模型;CFA组由生理盐水代替MOG35-55构建模型;FTY720干预组在EAE基础上给予FTY720腹腔注射,CFA组、EAE组给予生理盐水腹腔注射。HE染色和LBF染色观察炎症情况和脱髓鞘情况,ELLISA检测小鼠脑组织中的NO含量,RT-PCR检测的诱导型一氧化氮合酶(i NOS)mRNA表达。结果 FTY720组EAE小鼠较EAE组临床症状减轻,炎症程度和脱髓鞘程度减轻(P<0.05)。FTY720组小鼠脑组织NO含量较EAE组降低(P<0.05),i NOS mRNA表达量降低(P<0.05)。结论 FTY720能抑制EAE小鼠脑组织中i NOS mRNA表达,从而减少NO含量。

芬戈莫德类似物FTY720-C2在大鼠体内的药代动力学研究

目的研究芬戈莫德类似物(FTY720-C2)在大鼠体内的药代动力学并分析其在体内的代谢规律。方法以雄性C57BL/6大鼠为研究对象,8只大鼠一次性口服1 mg·kg^(-1)的FTY720-C2(口服组),在口服后1,8,24和48 h经眼眶后静脉取血0.5 m L并同期快速取脑冷藏待测,再取8只大鼠一次性静脉注射1 mg·kg^(-1)的FTY720-C2(注射组),在静脉注射后5 min,8,24和48 h经眼眶后静脉取血0.5 m L并同期快速取脑冷藏待测。测定2组血浆和脑FTY720-C2浓度,用DAS2.0药代动力学软件计算药代动力学参数。结果 2组大鼠血浆和脑均可检测出FTY720-C2。注射后5 min和8,24,48 h,注射组的血药浓度分别为(1390.35±24.19),(8.26±0.16),(2.33±0.19),(0.00±0.00)ng·m L^(-1),同期脑药浓度分别为(975.81±16.44),(126.87±3.06),(44.32±2.04),(8.38±0.25)ng·g^(-1);口服后1,8,24,48 h,口服组的血药浓度分别为(96.31±3.89),(12.66±0.92),(3.46±0.26),(0.00±0.00)ng·m L^(-1),同期脑药浓度分别为(793.24±6.46),(134.20±2.00),(62.85±1.36),(21.52±0.94)ng·g^(-1)。注射组在给药后5 min和口服组在口服后1 h,2组均达到最高血浆和脑FTY720-C2浓度,其后逐渐下降。2组的FTY720-C2脑血比均随时间的延长而增加。口服FTY720-C2在血液和脑组织中的绝对生物利用度分别为6.93%,81.29%。结论 FTY720-C2吸收分布快,可通过血脑屏障。口服FTY720-C2在脑组织中的绝对生物利用度较高。

可用于肾移植的某些新型免疫抑制剂研究进展

重点介绍了6种具有新型靶点的小分子和生物免疫抑制剂的研究进展。芬戈莫德(fingoli-mod,FTY-720)为鞘氨醇-1-磷酸受体调节剂。FK-778为二氢乳清酸脱氢酶靶向抑制剂。FTY-720与FK-778因临床效果不理想和存在较大不良反应,已终止用于治疗肾移植排斥反应的进一步研究。belatacept为T细胞共刺激途径阻断剂,预防慢性排斥反应的效果优于环孢素A。CP-690550和AEB-071分别为蛋白酪氨酸激酶JAK3抑制剂和蛋白激酶C选择性抑制剂,均不具有钙调磷酸酶抑制剂类药物的不良反应。依法利珠单抗(efalizumab)为抗CD1 la人源化单克隆抗体,治疗肾移植免疫排斥反应具有明显的效果。