载芬维A铵脂质体抑制A375黑素瘤细胞裸鼠皮下移植瘤的初步研究

目的探讨载芬维A铵脂质体(4-HPR-L)对裸鼠皮下人恶性黑素瘤的抑制作用。方法采用薄膜-超声分散法制备4-HPR-L。通过皮下接种黑素瘤A375细胞至BALB/c裸鼠右侧腋窝建立黑素瘤荷瘤裸鼠模型。取10只荷瘤裸鼠模型,随机等分为两组,分别给予尾静脉注射同浓度细胞膜近红外荧光探针(DiR)溶液和DiR脂质体(DiR-L),应用小动物活体成像仪观察给药后6、12、24 h药物在体内分布情况。取30只荷瘤裸鼠,随机等分为3组,即对照组、4-HPR组和4-HPR-L组,分别经尾静脉每次注射5%(质量分数)葡萄糖溶液0.2 ml、25 mg/kg 4-HPR和4-HPR-L溶液,于接种A375细胞后第8、10、12、14、16、18、20、22天给药,动态监测给药后各组裸鼠的体重和肿瘤体积,观察生存情况。于末次给药后第2天处死裸鼠,取心、肝、脾、肺、肾及肿瘤组织,HE染色和免疫组化染色观察黑素瘤体内转移情况,并用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测肿瘤细胞凋亡情况。计量资料采用单因素方差分析和独立样本t检验进行分析。结果小动物活体成像仪显示,DiR-L能较长时间滞留于肿瘤组织,给药24 h后在肿瘤部位仍可观察到较强荧光;定量分析显示,肿瘤组织中DiR-L荧光强度(22.85±1.66)显著高于DiR(8.45±0.97,t=12.957,P<0.01)。与对照组和4-HPR组相比,4-HPR-L组末次给药后第2天离体瘤重明显降低(F=27.055,t值分别为4.768、6.640,均P<0.05)。HE染色显示,4-HPR-L组2只裸鼠发生肝脏转移,而对照组、4-HPR组全部裸鼠发生肝脏转移。荷瘤鼠的生存期观察显示,4-HPR-L组裸鼠于接种后76 d内全部死亡,对照组和4-HPR组分别于接种后56 d和59 d内全部死亡。对照组凋亡指数为(12.14±1.33)‰,4-HPR组为(67.17±15.18)‰,4-HPR-L组为(152.73±11.27)‰,3组间差异有统计学意义(F=167.588,P<0.05),4-HPR-L组与对照组和4-HPR组相比,t值分别为18.162、11.075,均P<0.05。结论4-HPR-L能够有效抑制裸鼠皮下黑素瘤体积增长和黑素瘤细胞转移,并延长裸鼠生存期。

载芬维A铵脂质体体外对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨载芬维A铵脂质体(4-HPR-L)对A375及B16F10黑素瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响.方法 采用薄膜-超声分散法制备载4-HPR-L.体外分别培养A375及B16F10黑素瘤细胞,分为3组,空白对照组仅加入细胞和新鲜培养基,4-HPR组和4-HPR-L组分别加入同浓度4-HPR和4-HPR-L.细胞增殖抑制实验(CCK-8法)检测各组细胞增殖情况;Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;通过激光共聚焦显微镜观察4-HPR-L入胞情况.采用SPSS22.0软件进行统计分析,多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验.结果 4-HPR与4-HPR-L对A375和B16F10的增殖抑制作用均表现出浓度依赖,0.1、1、15、30、50、70 mg/L 4-HPR和4-HPR-L处理A375和B16F10细胞48 h后,4-HPR组A375细胞存活率分别为(94.3±1.4)%、(91.7±2.5)%、(84.4±2.5%)、(78.8±2.1)%、(59.0±1.1)%、(42.8±2.0)%,4-HPR-L组分另别为(86.0±0.2)%、(76.5±0.6)%、(60.9±1.5)%、(49.0±0.5)%、(32.9±0.2)%、(18.9±0.5)%,同浓度两组间比较,t值分别为8.019、8.298、11.455、19.978、33.672、16.314,均P<0.01;4-HPR组B16F10细胞存活率分别是(95.4±1.9)%、(90.5±2.6)%、(77.0±0.8%)、(64.4±3.5)%、(59.1±2.9)%、(49.9±1.9)%,4-HPR-L组分另别是(88.4±2.0)%、(80.9±3.4)%、(60.9±2.2)%、(51.5±2.9)%、(41.1±1.2)%、(33.5±2.4)%,同浓度两组间比较,均P<0.05.相同浓度下,4-HPR同浓度组A375和B16F10细胞存活率均高于4-HPR-L组.Hoechst33258染色显示,对照组、4-HPR组细胞无明显变化,而4-HPR-L组细胞体积变小,细胞质浓缩,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体.流式细胞仪检测显示,4-HPR-L组A375和B16F10细胞凋亡率均显著高于4-HPR组,均P<0.01.细胞划痕实验显示,4-HPR-L较4-HPR能更好地抑制细胞移行,显著降低划痕的愈合程度.激光共聚焦显微镜观察显示,C6脂质体入胞迅速.结论 4-HPR-L能更好地进入A375细胞、B16F10细胞,且能有效抑制A375、B16F10细胞的增殖和迁移,并诱导其凋亡.

RGD多肽修饰的芬维A钱脂质体对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的探讨芬维A铵(4-HPR)对B16F10和A375黑素瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并观察脂质体及以RGD多肽修饰的脂质体对药物摄取及作用的影响。方法采用薄膜-水化法制备4-HPR脂质体(4-HPRL),并以RGD多肽对4-HPRL进行修饰,制备RGD-4-HPRL,对其浓度、粒径、电位、载药量及包封率进行检测:体外培养B16F10和A375细胞,分为对照组、4-HPR组、4-HPRL组和RGD-4-HPRL组,给4-HPR组分别加入含相同浓度4-HPR的4-HPR原料药、4-HPRL及RGD-4-HPRL,对照组加入等量培养液。作用不同时间后.通过CCK8细胞计数试剂盒检测细胞活性.膜联蛋白V/碘化丙锭染色检测细胞凋亡,细胞划痕实验检测药物对细胞迁移的影响:以香豆素6(C6)代替4-HPR制备C6脂质体(C6L)和RGD-C6L,流式细胞仪检测细胞对药物的摄取情况:采用SPSS22.0软件进行统计学分析.多组间数据比较采用单因素方差分析.两两组间显著性差异比较采用/检验=结果制备的4-HPRL和RGD-4-HPRL溶液可明显提高4-HPR的水溶性,并具有较高的载药量和包封率。粒径分布均匀,平均在100 nm以下。CCK8实验表明,4-HPR可明显抑制B16F10和A375细胞增殖,且相同浓度下4-HPRL对细胞增殖的抑制率高于4-HPR(P < 0.01), RGD-4-HPRL又高于4-HPRL(P < 0.01或P < 0.05)和4-HPR(P < 0.01);细胞凋亡实验表明4-HPR浓度分别为10 mg/L或20 mg/L时可明显诱导B16F10和A375细胞凋亡:4-HPRL组两种细胞凋亡率高于4-HPR组(均P<0.01),RGD-4-HPRL组高于4-HPRL组(均P<0.01)和4-HPR组(均P<0.01).细胞划痕实验显示,4-HPR可抑制两种细胞划痕愈合和细胞迁移,4-HPRL和RGD-4-HPRL抑制能力明显优于4-HPR原料药。摄取实验显示.B16F10细胞C6荧光强度在对照组为2.15 ± 0.28, C6组为&56 ± 0.36, C6L组为20.48 ± 0.13,RGD-C6L组为22.55 ± 0.07,各组间差异有统计学意义(F = 67 194.186,P< 0.01),其中,C6L组与RGD-C6L组荧光强度明显高于C6组(均P<0.01),且RGD-C6L组髙于C6L组(P<0.01)。结论4-HPR可抑制黑素瘤A375和B16F10细胞的增殖、迁移并诱导其凋亡,脂质体和RGD靶向脂质体可明显增强4-HPR对黑素瘤细胞的作用.

羟苯基维胺脂对顺铂抗卵巢癌活性影响的研究

目的:探讨羟苯基维胺脂(4-HPR)联合顺铂(DDP)对卵巢癌SKOV3细胞形态学、增殖、凋亡和细胞周期的影响,及其与血管内皮生长因子(VEGF)、尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)表达变化的关系。方法:观察不同浓度4-HPR对SKOV3细胞形态学变化;MTT法检测4-HPR、DDP及联合对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测4-HPR、DDP对SKOV3细胞凋亡和细胞周期的影响;RT-PCR法检测4-HPR、DDP对SKOV3细胞VEGF、u-PAmRNA表达的影响。结果:1μmol/L的DDP对SKOV3细胞增殖抑制作用较弱,≥5μmol/LDDP可明显抑制SKOV3细胞增殖,P<0.05。1μmol/L的4-HPR对SKOV3细胞生长抑制作用不明显,≥2.5μmol/L时,4-HPR对SKOV3细胞生长抑制作用明显增强,P<0.05。5μmol/L的DDP联合4-HPR(1、5和10μmol/L)能显著抑制SKOV3细胞的增殖,两者联合对SKOV3细胞的抑制作用较DDP单独用药明显增强,P<0.05。不同浓度4-HPR和DDP作用SKOV3细胞48h均可诱导细胞凋亡并将细胞阻滞于G2～M期和S期,在两者联合时上述作用更加明显,P<0.05。不同浓度4-HPR和DDP作用SKOV3细胞48h均可抑制细胞VEGF、u-PAmRNA的表达,P<0.01。结论:4-HPR联合DDP能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期,其机制可能与抑制VEGF、u-PA表达有关。

4-HPR通过内质网应激途径诱导宫颈癌细胞凋亡

目的探索芬维A胺（4-HPR）对宫颈癌细胞的抗肿瘤作用及其机制。方法应用MTT法检测4-HPR对宫颈癌细胞的生长抑制作用。Annexin V—FITC和碘化丙锭（PI）双染检测细胞凋亡。用对氧化敏感的荧光染料DCFH—DA检测细胞内活性氧。Western blot检测Bcl-2和CHOP蛋白表达。结果4-HPR以浓度依赖方式抑制宫颈癌HeLa细胞的生长，其IC50约为5μM。4-HPR以浓度依赖方式诱导HeLa细胞凋亡，同时伴随Bcl-2蛋白表达下调。4-HPR短暂处理能升高细胞内活性氧水平。4-HPR还激活内质网应激凋亡途径，表现以活性氧依赖方式升高CHOP蛋白表达。结论4-HPR对宫颈癌具有抗肿瘤作用，其机制为诱导产生细胞内活性氧和内质网应激通路的激活。