花旗松素调节MCP-1/CCR2轴对急性淋巴细胞白血病细胞恶性进展的影响

目的:研究花旗松素(Taxifolin)对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞恶性进展的影响及单核细胞趋化蛋白-1(CCL2)/CC趋化因子受体2(CCR2)轴发挥的作用。方法:体外培养ALL-T淋巴细胞CCRF-CEM;CCK-8法检测不同浓度Taxifolin对CCRF-CEM细胞活力影响,筛选本实验用Taxifolin浓度;将CCRF-CEM细胞分为control组、Taxifolin-L组、Taxifolin-M组、Taxifolin-H组、Taxifolin+rCCL2组;EDU法检测各组CCRF-CEM细胞增殖;流式细胞术检测各组CCRF-CEM细胞凋亡;Transwell检测各组CCRF-CEM细胞侵袭能力;平板克隆形成实验检测各组CCRF-CEM细胞集落形成能力;RT-PCR检测各组CCRF-CEM细胞CCL2、CCR2基因表达水平;Western blot检测各组CCRF-CEM细胞CCL2、CCR2、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果:选择25、50、100μmol/L三个Taxifolin浓度进行后续实验;与control组相比,Taxifolin-L、M、H组CCRF-CEM细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高,CCRF-CEM细胞EDU阳性细胞率、侵袭细胞数量、细胞克隆集落数、CCL2、CCR2基因表达水平、CCL2、CCR2、Bcl-2蛋白表达水平均显著性降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);与Taxifolin-H组相比,Taxifolin+rCCL2组CCRF-CEM细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著性降低,CCRF-CEM细胞EDU阳性细胞率、侵袭细胞数量、细胞克隆集落数、CCL2、CCR2基因表达水平、CCL2、CCR2、Bcl-2蛋白表达水平均显著性升高(P<0.05)。结论:Taxifolin可能通过抑制CCL2/CCR2轴,从而抑制CCRF-CEM细胞恶性进展。

落叶松中花旗松素的提取、抑菌作用及其与白屈菜红碱联用协同抑菌作用机理

本研究以落叶松为原料,采用超声辅助乙醇热浸提法提取花旗松素。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别作为典型供试菌,通过观察细菌形态结构,测定细菌生长量、细胞膜泄漏、抗氧化酶系活性等变化情况,分析花旗松素抑菌效果。最终获得纯度达90%、提取率0.35%的花旗松素,且花旗松素对两种菌株的最小抑菌浓度均为1.2 mg/mL,抑菌率分别为81.12%、83.95%。通过电镜扫描后发现菌体表面被破坏伴有内容物泄漏。在Escherichia coli中,培养至24 h的1/2 MIC、1 MIC和2 MIC实验组OD_(260)测试值是同期对照组的1.18、1.52、1.88倍,检测到胞外β-半乳糖苷酶的相对活性分别为79.15%和70.1%。Bliss独立模型计算生长速率为0.0142,表明花旗松素和白屈菜红碱药物联用后对金黄色葡萄球菌表现为协同抑制作用。药物联用条件下,低浓度对细菌细胞膜破坏明显增强,抑菌效果更加显著,培养上清液中β-半乳糖苷酶活达87.01%,较2 MIC单独作用S.aureus酶活性高16.91%,24 h CAT、SOD和POD酶活较单独使用1 MIC浓度花旗松素对S.aureus作用要更高,分别是其1.28、1.25、1.11倍。研究将为花旗松素作为食品保鲜、防腐剂等产品的开发应用奠定理论基础。

花旗松素的提取、检测及功能研究进展

花旗松素是一种二氢黄酮类化合物,常见于松科植物和水果蔬菜中。其常见提取方法有乙醇加热提取法、超声波辅助提取法以及闪式提取法。检测花旗松素最常用的方法为高效液相色谱法。体外和动物试验结果证实花旗松素具有抗氧化、抗癌、抗炎、保护肝脏等多种生物活性。本文对花旗松素提取、检测方法以及其抗氧化、抗炎、抗癌作用机制进行了综述,以期为其工业化生产和应用提供参考。

花旗松素对人卵巢癌的作用机制

目的基于网络药理学和体外细胞实验探究花旗松素治疗卵巢癌的作用机制。方法查询文献及数据库检索收集花旗松素的作用靶点,采用SuperPred数据库预测靶点,下载疾病基因,找到药物与疾病靶点的交集,进行蛋白质-蛋白质相互作用分析,获取核心靶点,进行富集分析及分子对接;体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,设立空白对照组、花旗松素处理组(10、30μg/ml),比较各组细胞抑制率及磷酸化丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶(p-AKT)、丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶(AKT)表达。结果花旗松素作用于卵巢癌有79个潜在靶点和12个核心靶点。富集分析结果提示,靶点蛋白在癌细胞内异常表达,通过调节代谢等生物过程,影响酶类及蛋白质结合等功能。KEGG主要富集在PI3K/AKT通路,分子对接提示花旗松素与各靶点具有良好的结合活性。体外实验证实,花旗松素可抑制卵巢癌细胞的活性;Western blot结果显示,花旗松素可降低p-AKT/AKT蛋白的表达,从而发挥抗肿瘤作用。结论花旗松素可通过PI3K/AKT通路抑制卵巢癌细胞的增殖。

花旗松素对转化生长因子β1诱导肝星状细胞的激活作用及基因表达谱分析

目的探索花旗松素对肝星状细胞的激活作用,通过转录组测序表征基因表达谱,分析潜在的作用机制。方法在10μg/L转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导下,体外培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,分别给予62.5μmol/L、125μmol/L和250μmol/L花旗松素处理,在24 h、48 h分别加入CCK8试剂,450 nm波长测定吸光度,计算不同浓度和时间下的细胞增殖率。在24 h通过AnnexinV/7AAD染色,流式细胞检测细胞凋亡。通过荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原α1链(Collagen1A1)及Ⅲ型胶原α1链(Collagen3A1)基因mRNA相对表达量。通过Western blot检测α-SMA、Collagen1A1蛋白表达量。通过转录组测序,表征细胞基因表达谱并对差异基因进行基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)功能注释及功能富集分析。结果花旗松素可显著抑制肝星状细胞增殖,处理24 h,125μmol/L组和250μmol/L组细胞增殖率分别为(66.7±8.6)%和(45.6±3.0)%。处理48 h,125μmol/L组和250μmol/L组的细胞增殖率分别为(60.5±2.9)%和(43.9±1.9)%,均显著低于模型组(P均<0.05)。花旗松素可促进细胞凋亡,处理24 h,花旗松素62.5μmol/L组、125μmol/L组、250μmol/L组细胞凋亡率分别为(8.537±0.445)%、(8.85±0.169)%及(14.453±0.577)%,均显著高于模型组(P均<0.05)。处理24 h,花旗松素125μmol/L组、250μmol/L组可抑制α-SMA、Collagen1A1、Collagen3A1基因和α-SMA、Collagen1A1蛋白表达(P均<0.05)。差异基因表达表现为促肝纤维化发生相关基因下调,如氧化型低密度脂蛋白受体1(oxidized low-density lipoprotein receptor 1,Olr1)、人从状蛋白(Plexin A4,Plxna4)、反应蛋白1(Spondin 1,Spon1)、聚集蛋白(Agrn)等,以及细胞抗氧化及死亡相关的基因上调,如血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,Hmox1)等。结论花旗松素对肝星状细胞具有抑制增殖、促进凋亡、抑制激活的作用,推测其可能通过调控多项基因表达,主要调控因子之间相互作用信号通路、卟啉与叶绿素代谢信号通路、Hedgehog信号通路和PPARγ信号通路发挥作用。

花旗松素调控内质网应激PERK-ATF4通路减轻高血压大鼠心肌肥厚的机制研究

目的探讨花旗松素(TAX)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌肥厚的影响及分子机制。方法24只SHR分为SHR对照组(SHR组)、TAX组(20 mg/kg)、TAX+PERK激活剂CCT020312(CCT)组(20 mg/kg TAX+2 mg/kg CCT),每组8只;另选8只正常血压Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为正常对照组(WKY组),给予相应的药物持续干预8周。实验过程中观察大鼠血压变化,并于干预结束后超声心动图检测大鼠舒张期室间隔厚度(IVSd)、收缩期室间隔厚度(IVSs)、左心室射血分数(LVEF)判断心肌肥厚程度和心脏功能,计算心脏指数、左心室指数,苏木精-伊红(HE)染色、小麦胚芽凝集素(WGA)染色和Masson染色评估心肌组织病理学变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测心肌组织中心房钠尿肽(ANP)、B型利钠肽(BNP)、I型胶原蛋白α1链(COL1A1)和Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1)mRNA表达,Western blot检测心肌组织蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-转录激活因子4(ATF4)通路相关蛋白表达。结果干预结束后,与WKY组相比,SHR组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、IVSd、IVSs、心脏指数、左心室指数、心肌细胞横截面积、胶原容积分数(CVF)、心肌组织ANP、BNP、COL1A1和COL3A1 mRNA表达、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、ATF4、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白水平和p-PERK/PERK比值升高(均P<0.05),LVEF降低(P<0.05);与SHR组相比,TAX组SBP、DBP、IVSd、IVSs、心脏指数、左心室指数、心肌细胞横截面积、CVF、心肌组织ANP、BNP、COL1A1和COL3A1 mRNA表达、GRP78、ATF4、CHOP蛋白水平和p-PERK/PERK比值降低(均P<0.05),LVEF升高(P<0.05);CCT020312可部分逆转TAX对心脏功能和心肌肥厚的保护作用。结论TAX可通过抑制内质网应激(ERS),改善高血压心肌肥厚,其作用机制可能与抑制PERK-ATF4通路有关。

花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机理研究

目的观察和探索花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其作用机理。方法结晶紫染色法检测花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测与肿瘤细胞凋亡相关基因的表达。结果花旗松素能够抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,呈剂量依赖关系;花旗松素不能诱导Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达,但能使P53和P21的mRNA表达量增加。结论花旗松素具有良好的体外抑制人宫颈癌Hela细胞增殖作用;花旗松素诱导Hela细胞死亡与细胞凋亡相关,其分子机制可能与升高P53和P21mRNA表达有关,而与Bcl-2和Bax的蛋白转录无关。

长白落叶松中花旗松素的结构鉴定与含量测定

目的:从长白落叶松中分离花旗松素并对其进行结构鉴定;采用高效液相色谱法测定临江地区长白落叶松根上部横切面及11个林场长白落叶松中花旗松素的含量。方法:色谱柱:15C18-AR Waters(6mm 250mm,5μm);检测波长:288nm;流动相:甲醇-水(40:60,V/V);流速:1mL/min;柱温:30℃;进样量:20μL。结果:与研究报道比较,紫外、红外、质谱和核磁共振碳谱所得数据一致,证明所得提取物为花旗松素;在0.05～1.0mg/mL范围内质量浓度与峰面积呈现良好线性关系,r=0.9998,平均回收率为99.3%,相对标准偏差(RSD)为2.6%(n=9);长白落叶松中花旗松素含量沿横切面由内至外呈递减分布,同时受生长条件影响较大。结论:本法操作简便、准确、专属性强、重复性好,可用作长白落叶松中花旗松素的含量测定。

花旗松素、槲皮素对LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制作用

目的:探讨花旗松素和槲皮素对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的免疫抑制作用。方法:昆明种正常孕鼠90只,随机分为对照组(A组);实验组均于孕6天尾静脉注射LPS 0.2 ml诱导流产小鼠,并分为LPS处理组(B组),低浓度花旗松素及LPS双处理组(C1组)、高浓度花旗松素及LPS双处理组(C2组)、低浓度槲皮素及LPS双处理组(D1组),高浓度槲皮素及LPS双处理组(D2组),每组15只。用酶组织化学、免疫组化和ELISA方法检测孕9天子宫角组织非特异性酯酶阳性(α-NAE+)巨噬细胞,CD14+巨噬细胞和TNF-α含量。结果:B组小鼠流产率为100%,胚胎吸收率为100%(P<0.01);灌胃花旗松素和槲皮素可以显著抑制流产模型小鼠的流产率和胚胎吸收率(P<0.01)。B组孕鼠子宫内膜和肌层α-NAE+,CD14+巨噬细胞数量和阳性面积与A组相比均显著增多(P<0.01);各双处理组与B组相比,子宫内膜和肌层α-NAE+巨噬细胞和CD14+巨噬细胞数目和阳性面积显著减少(P<0.01)。B组孕鼠子宫TNF-α含量与A组相比显著增加(P<0.05),而双处理组接近正常水平。结论:通过抑制子宫巨噬细胞的数量、分布、活性和TNF-α分泌量,可能是花旗松素和槲皮素对抗LPS诱导小鼠流产的机理之一。

水红花子花旗松素乙醇回流法提取工艺优化

研究水红花子花旗松素乙醇回流法提取工艺。在单因素试验的基础上,以乙醇浓度、提取时间、料液比为自变量,以花旗松素提取量为响应值,利用响应面法优化水红花子中花旗松素的提取条件。结果表明:花旗松素的最佳工艺条件为乙醇体积分数63%、提取时间3.4h、料液比1∶19(m∶V)、提取温度95℃、提取2次,该条件下,花旗松素提取量为7.2mg/g。

花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用

目的探讨从红蓼成熟果实中分离出来的花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对人体肿瘤细胞的增殖抑制作用。方法用结晶紫染色法检测花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对人胃癌MGC细胞、人肝癌HepG-2细胞和人盲肠癌Hce-8693细胞的增殖抑制作用。结果花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在1～500μg/mL质量浓度范围内对MGC细胞、HepG-2细胞和Hce-8693细胞均有一定的生长抑制作用,随着剂量的增大和作用时间的延长,呈较好的剂量-时间-效应关系;同等条件下,花旗松素比3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的抑制作用强。结论花旗松素与3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷均有体外抗肿瘤活性,能抑制MGC细胞、HepG-2细胞和Hce-8693细胞的增殖。

落叶松中花旗松素对酪氨酸酶的抑制作用

以L-多巴为底物，熊果苷和2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）为阳性对照，研究了长白落叶松花旗松素对酪氨酸酶的抑制作用，并与兴安落叶松花旗松素进行了对比。结果表明，质量浓度在0．001～0．01g·L^-1时，长白落叶松花旗松素对酪氨酸酶的抑制作用高于兴安落叶松花旗松素。长白落叶松花旗松素，低质量浓度时，纯度越高，对酪氨酸酶的抑制作用越强；高质量浓度时，纯度越高，抑制作用越弱。长白落叶松花旗松素对酪氨酸酶表现为竞争性抑制，抑制常数K=0．017。

中国野生刺葡萄(Vitis davidii Foex)及其单品种葡萄酒中花旗松素含量分析

利用高效液相色谱-串联质谱联用技术对原产中国的野生刺葡萄果实的果皮、果肉、种子及单品种葡萄酒中的花旗松素含量(以鲜质量计算)进行测定与分析。结果表明:刺葡萄果实果皮中花旗松素含量最高,其含量在刺葡萄黑、白果实中分别为(2.44±0.18)、(2.03±0.14)mg/kg,在种子中分别为(1.66±0.13)、(1.38±0.12) mg/kg,果肉中含量最低,分别为(0.36±0.02)、(0.25±0.02)mg/kg。刺葡萄黑、白果实中各个部位花旗松素含量均无明显差异,但对照品种黑色果实果皮中的花旗松素含量显著高于白色果实,这说明花旗松素含量的高低与葡萄果皮颜色并无直接关系。在单品种酒中,白葡萄酒由于酿造工艺不同,果皮和种子中的花旗松素无法进入酒中,花旗松素含量仅为红葡萄酒的20%;葡萄酒中的花旗松素含量略低于果实是因为提取果实中花旗松素的溶剂是甲醇,而葡萄酒中只是水和乙醇的自然浸渍。

花旗松素对人宫颈癌Hela细胞形态及DNA片段的影响

目的:探讨花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的影响及其机理。方法:通过倒置显微镜观察花旗松素对人宫颈癌HeLa细胞形态的影响;通过花旗松素诱导肿瘤细胞DNA特征梯度实验,观察其对DNA片段的影响。结果:大部分细胞逐渐形成凋亡小体,且花旗松素能诱导Hela细胞产生200 bp的DNA片段,表明花旗松素诱导Hela细胞死亡与细胞凋亡有关。结论:花旗松素诱导HeLa细胞死亡与细胞凋亡相关。

分光光度法测水红花子中花旗松素含量

目的:检测水红花子中花旗松素的含量。方法:采用紫外分光光度法,在常温下(25℃)290nm处,对水红花子乙醇提取物进行吸光度测定。结果:此方法线性范围:0.002～0.01 g/L,花旗松素浓度与吸光度线性关系:y=0.0724x+0.007,r^2=0.9986;平均回收率为99.37%,RSD=0.897%。结论:紫外分光光度法测定水红花子中花旗松素含量操作简便、快速和准确度高,具有一定实用价值。

Box-Behnken设计-效应面法优化水红花子中总黄酮和花旗松素的提取工艺

目的优化水红花子中总黄酮和花旗松素的提取工艺。方法采用Box-Behnken设计,以水红花子总黄酮、花旗松素提取率为指标,并对2种指标进行归一化处理,优化水红花子最佳提取工艺。结果最优工艺条件为:乙醇体积分数为66%,提取时间为93 min,乙醇量为20倍,提取1次;提取实际值与预测值偏差为2.44%、-2.11%。结论方法简便合理,稳定,可预测性较优。

HPLC法测定芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量

目的：建立高效液相色谱法测定芪红水煎剂中2种主要有效成分花旗松素和槲皮素的含量。方法：采用Waters Sunfire C（18）（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以甲醇-0.5%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1 m L/min,检测波长290 nm（花旗松素）、365 nm（槲皮素）。结果：花旗松素和槲皮素线性范围分别为0.075 5~0.120 8μg（r=0.999 4）和0.030 8~0.092 4μg（r=0.999 9）;平均加样回收率（n=6）分别为102.74%（RSD=1.71%）和102.45%（RSD=1.52%）。结论：本法简便、准确,重复性好,可用于芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量测定。亦可作为芪红水煎液质量控制方法之一。