花生四烯酸5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性与急性冠状动脉综合征的易感性

目的探讨花生四烯酸5脂氧合酶激活蛋白(ALOX5AP)基因SG1 3S114T/A多态性与急性冠状动脉综合征(ACS)的易感性。方法选择住院的胸痛患者714例,将确诊为ACS的患者377例作为ACS组,非ACS患者337例作为对照组,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法检测ALOX5AP基因SG13S114T/A多态性,并进行logistic回归分析。结果 ACS组患者AA、AT和TT基因型频率分别为1 3.79%、50.93%和35.28%,对照组患者分别为12.76%、38.58%和48.66%,2组AT和TT基因型频率差异有统计学意义(P=0.041,0.020);ACS组男性AT基因型频率高于对照组(P=0.040),女性TT基因型频率低于对照组(P=0.013)。SG13S114T/A位点AT和TT基因型以及T等位基因是所有ACS(P=0.004、0.001和0.013)和男性ACS(P=0.014、0.005和0.020)发病的危险因素。结论 ALOX5AP基因SG1 3S114T/A多态性AT和TT基因型以及T等位基因可能与老年人,特别是老年男性ACS的易感性相关。

5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性与缺血性卒中分子遗传学的研究进展

缺血性卒中是一个复杂性状的多基因遗传病，遗传流行病学研究结果提示遗传变异决定了其遗传易感性。近年来缺血性卒中遗传学的研究取得了长足的进展，通过连锁分析和关联分析陆续报告了一些与缺血性卒中相关的新的易感基因。5-脂氧合酶激活蛋白（5-lipoxygenase activating protein，ALOXSAP）基因是2004年鉴定出来的第一个与缺血性卒中密切相关的基因。本文就ALOXSAP基因多态性与缺血性卒中相关性的研究进展作一综述。

5-脂氧合酶及Ki-67在星形细胞瘤中的表达及其相关性研究

目的:研究5-脂氧合酶(5-LOX)和Ki-67在星形细胞瘤中的表达及相关性。方法:免疫组织化学法检测60例星形细胞瘤(低度恶性33例,高度恶性27例)中5-LOX和Ki-67的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测5-LOX和Ki-67的mRNA水平,另取14例行脑外伤内减压术的脑组织作为对照。结果:对照组中5-LOX和Ki-67不表达或低表达,星形细胞瘤中5-LOX阳性表达率66.7%(40/60),Ki-67阳性表达率71.7%(43/60);高度恶性组5-LOX和Ki-67的阳性表达率高于低度恶性组(P<0.01);5-LOX和Ki-67表达呈正相关(γ=0.875,P<0.01)。星形细胞瘤5-LOX和Ki-67的mRNA含量高于正常脑组织(P<0.01),高度恶性组5-LOX和Ki-67的mRNA含量高于低度恶性组(P<0.01),5-LOX和Ki-67在星形细胞瘤中的mRNA水平呈正相关(γ=0.781,P<0.01)。结论:5-LOX和Ki-67的表达与星形细胞瘤恶性程度有关,二者在星形细胞瘤发生发展过程中有协同作用。

5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性增加阿司匹林抵抗易感性

目的探讨5-脂氧合酶激活蛋白（ALOX5AP）基因单核苷酸多态性与中国汉族人群阿司匹林抵抗（AR）的相关性。方法纳入450例持续服用阿司匹林（100mg,≥7d）的缺血性心脑血管病中的高危患者,血栓弹力图检测花生四烯酸途径的血小板聚集率,依据诊断标准分为AR组110例,阿司匹林敏感（AS）组340例。聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术分析SG13S32、SG13S89和SG13S114单核苷酸多态性。应用Haploview软件构建单倍型,并进行分析。结果 AR组与AS组SG13S114T/A突变A等位基因频率分布（40.5%vs 31.3%,P=0.01）和AA/TA基因型及TT基因型比较,差异有统计学意义（35.5%vs 46.2%,P=0.03）。而2组SG13S89、SG13S32基因型和等位基因分布频率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。logistic回归分析显示,携带SG13S114AA/TA基因型的人群发生AR的风险是携带TT基因型的3.241倍（95%CI：1.552~6.767,P=0.002）。单倍型分析显示,TG是1种危险单倍型,携带TG单倍型的人群AR发生风险是不携带TG单倍型人群的1.490倍（95%CI：1.088~2.040,P=0.014）,AG是1种保护单倍型,可以减少AR发生的风险（OR=0.691,95%CI：0.502~0.952,P=0.029）。结论 ALOX5AP rs10507391与汉族人群AR相关;危险单倍型TG可增加AR发生风险。

AA861对人胃癌细胞凋亡及5-脂氧合酶mRNA表达的影响

目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)选择性抑制剂AA861对胃癌AGS细胞株凋亡及其5-LOX mRNA表达的影响。方法体外培养人胃癌AGS细胞,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(25,50,100μmol/L)组AA861不同作用时间(24,48,72 h)后AGS细胞的存活率。TUNEL染色法计数细胞凋亡指数。透射电子显微镜技术检测细胞的凋亡形态。RT-PCR检测AGS细胞5-LOX mRNA表达及AA861对其5-LOX mRNA表达的影响。结果AA861以时间剂量依赖的方式抑制AGS细胞的生长,与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05,25μmol/L作用24 h除外),不同药物浓度作用后72 h细胞存活率最高为59.9%(25μmol/L组),最低为36.2%(100μmol/L组);TUNEL染色法显示50,100μmol/L作用48 h后细胞凋亡率为(24.6±3.3)%和(51.2±1.8)%,均高于对照组(P<0.01);透射电镜观察到典型的细胞凋亡形态。AGS细胞存在5-LOX mRNA的表达,AA861作用前后细胞5-LOX mRNA表达无改变。结论AA861能抑制AGS细胞株的生长,亦能诱导其凋亡,但不影响其5-LOX mR-NA的表达。

5-脂氧合酶代谢通路与肿瘤

花生四烯酸（AA）可通过环氧化酶（COX）途径代谢,亦可通过5-脂氧合酶（5-LOX）途径生成多种有生物活性的物质。5-LOX代谢通路中的蛋白在肿瘤中高表达,其表达水平与肿瘤的分期、转移、预后以及肿瘤对传统放化疗的敏感性相关,该代谢通路可通过影响细胞的增殖和凋亡、血管生成以及细胞的侵袭和迁移等机制参与肿瘤的发生发展：抑制该通路可以抑制肿瘤生长。现就5-LOX通路与肿瘤的关系及其在肿瘤诊治中的研究进展，综述如下。

5-脂氧合酶与细胞增殖及凋亡

5-脂氧合酶是5-脂氧合酶代谢通路中催化花生四烯酸转化为白三烯和氢氧化物的关键酶,在恶性肿瘤和多种病变细胞中高表达。它可以通过分裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶以及磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B等信号转导途径促进肿瘤细胞增殖,抑制肿瘤细胞凋亡。除此之外,5-脂氧合酶还可通过多种方式调控呼吸系统、消化系统以及循环系统等病变细胞的增殖与凋亡。

5-脂氧合酶在肾细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)中的表达情况及意义。方法:应用免疫组织化学方法检测80例RCC组织和12例正常肾脏组织中5-LOX的表达及RCC中微血管密度(microvascular density,MVD),并分析其表达情况与RCC的临床病理学指标的关系。结果:5-LOX在RCC组织的阳性表达率(72.5%)高于正常肾组织(33.3%),差异有显著性(P<0.05),RCC组织中5-LOX表达与肿瘤大小、Fuhrman分级、临床分期及是否伴淋巴结转移密切相关,而与患者年龄、性别、肿瘤组织类型无关。RCC组织中5-LOX阳性表达组的MVD明显高于5-LOX阴性表达组(P<0.01)。结论:RCC组织中存在5-LOX的过表达,5-LOX可促进肿瘤血管形成,从而进一步促进肿瘤的生长,抑制5-LOX表达有可能成为治疗RCC癌的一个新的途径。

人支气管上皮细胞5-脂氧合酶介导4-氨基联苯的活化及DNA损伤

目的探讨人支气管上皮(HBE)细胞内5-脂氧合酶(5-LOX)对4-氨基联苯(4-ABP)的氧化活化及所致DNA损伤,为LOX作为前致癌物氧化活化的代谢途径提供依据。方法①体外酶系统实验:4-ABP在含有大豆脂氧合酶(SLO)的体外酶体系中反应,用分光光度法检测体系中反应产物生成。②细胞实验:4-ABP 100～800μmol.L-1染毒HBE细胞,MTT法检测HBE细胞存活率;Western印迹法检测5-LOX蛋白表达;单细胞凝胶电泳检测DNA损伤。同时,检测特异性5-LOX抑制剂AA861对5-LOX蛋白表达和多种酶抑制剂对细胞存活率和DNA损伤的影响。结果在过氧化氢参与下,SLO可以协同氧化4-ABP,LOX抑制剂去甲二氢愈创木酸可抑制该协同氧化作用。4-ABP可以使HBE细胞内5-LOX蛋白表达增加,AA861对5-LOX蛋白表达没有影响;4-ABP 400μmol.L-1可以使HBE细胞产生明显的DNA损伤,彗星细胞的阳性率达47.7%(P<0.01),AA861和萘普生可以抑制该浓度4-ABP所致的DNA损伤,最大保护率分别为58.1%和21.7%。结论 4-ABP上调HBE的5-LOX蛋白表达。5-LOX可能通过介导4-ABP协同氧化,导致DNA损伤,这可能是4-ABP致癌的机制之一。

5-脂氧合酶的活性调节及抑制剂研究进展

5-脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-LO）是催化花生四烯酸（AA）生成具有生物活性的白三烯（leukotrienes,LTs）的关键酶[1]。近年来研究发现,5-LO的调节在哮喘、炎症、过敏性鼻炎、组织缺血再灌注损伤、心血管疾病及部分恶性肿瘤等疾病的发生、发展过程中均有非常重要的意义[2]。因此,关于5-LO酶活性的调节和抑制剂的研发已成为一个热门课题,

5-脂氧酶/绿荧光蛋白转染评价PC12细胞损伤后5-脂氧酶核膜移位

目的:通过绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)/5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)稳定转染PC12细胞,以可视化方法观察5-LOX在不同损伤后的变化。方法:将带有5-LOX基因的pEGFP-C2质粒及pEGFP-C2质粒(对照),稳定转染至PC12细胞;在缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)、H2O2和NMDA处理后,荧光显微镜下观察GFP/5-LOX在细胞内的定位;同时,以免疫细胞化学方法观察野生型5-LOX分布及其变化。结果:转染GFP/5-LOX的细胞内,GFP/5-LOX主要均匀表达于细胞核内;仅转染GFP的细胞GFP表达于胞核和胞浆。OGD和H2O2处理后,分别有50.6%和57.7%细胞的GFP/5-LOX移位到核膜;NMDA处理或仅转染GFP的细胞,未见核膜移位现象。野生型5-LOX分布在细胞核和细胞浆内,3种损伤处理均诱导核膜移位。结论:稳定转染GFP/5-LOX的PC12细胞,GFP/5-LOX主要分布在细胞核;不同损伤处理诱导的5-LOX核膜移位,有不同的特点。

5-脂氧酶/半胱氨酰白三烯途径不参与大鼠C6胶质瘤细胞缺氧缺糖损伤

目的：观察缺氧缺糖（OGD）是否损伤大鼠C6胶质瘤细胞,以及5-脂氧酶（5-LOX）/半胱氨酰白三烯（CysLT）途经是否参与OGD损伤。方法：在OGD处理并恢复不同时间后,观察C6细胞活性变化,以及5-LOX抑制剂和CysLT受体拮抗剂的影响;以免疫细胞化学法观察5-LOX蛋白的细胞内分布;以RT-PCR法检测CysLT1和CysLT2受体mRNA表达;并观察白三烯D4（LTD4）对C6细胞的作用。结果：OGD4-8h并恢复24-72h后,可诱导C6细胞损伤;5-LOX抑制剂和CysLT受体拮抗剂对OGD损伤无明显作用。OGD未诱导5-LOX的核膜移位。C6细胞高表达CysLT2受体,但CysLT1受体表达很微弱,OGD不影响它们的表达。此外,LTD4对C6细胞没有明显作用。结论：OGD可诱导C6细胞损伤,但5-LOX/CysLT途径不参与OGD诱导的损伤。

糖尿病兔心房5脂氧合酶及12脂氧合酶蛋白变化研究

目的观察糖尿病兔心房炎症和心房纤维化改变及5脂氧合酶(ALOX5)、12脂氧合酶(ALOX12)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在心房组织中表达变化。方法选择健康雄性日本大耳白兔13只,随机选取8只白兔建立1型糖尿病兔模型,其中5只建模成功作为糖尿病组,另外5只白兔作为对照组。检查超声心动图、病理指标,并提取左心房组织蛋白进行Western blot检测。结果与对照组比较,糖尿病组室间隔厚度明显增加,LVEF明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病组左心房组织胶原容积分数较对照组明显增加[(7.97±1.01)%vs(3.11±0.99)%,P<0.01]。糖尿病组左心房组织ALOX5、ALOX12表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组MCP-1表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ALOX5、ALOX12表达可能与糖尿病兔心房炎症及纤维化相关。

局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子-κB的表达

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)后杏仁核和海马环氧酶-2(COX-2)、5-脂氧酶(5-LO)和核因子-κB(NF-κB)的表达情况,探讨其损伤机制。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞2h/再灌注24h模型。免疫组织化学法检测杏仁核和海马COX-2、5-LO和NF-κB蛋白表达,计数COX-2、5-LO和NF-κB阳性细胞数,Motic Images Advanced3.0图像分析系统作半定量分析。结果CIRI后大鼠杏仁核和海马COX-2、5-LO和NF-κB阳性细胞计数明显增高(P<0.001),平均灰度值显著下降,表达增强(P<0.001)。结论CIRI后大鼠杏仁核和海马区域的COX-2、5-LO和NF-κB表达增强,继而引发后续反应,介导神经损伤。

结肠癌组织中5-LOX和COX-2的表达

目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)、环氧合酶-2(COX-2)在结肠癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组化技术检测99例结肠癌组织、14例结肠腺瘤和35例正常结肠黏膜中5-LOX、COX-2的表达情况。结果5-LOX在结肠癌及结肠腺瘤中的表达均显著高于正常结肠黏膜组织(P<0·05);COX-2在结肠癌中的表达分别显著高于结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织(P<0·05);5-LOX和COX-2表达与结肠癌的Duke′s分期、浸润深度和转移显著相关(P<0·05),与患者的性别、年龄、肿瘤的部位、肿瘤的大小和分化程度无关。结论5-LOX和COX-2在结肠癌组织中均高度表达,且二者表达与结肠癌的分期、浸润深度和转移显著相关。

脂氧素A4、白三烯C4和5-脂氧合酶在重度子痫前期孕妇外周血中的表达及意义

目的探讨脂氧素A4、白三烯C4和5-脂氧合酶在不同类型重度子痫前期孕妇外周血中的表达及其意义。方法收集2010年12月至2011年6月在本院产前检查并分娩的单胎妊娠孕妇共45例，其中正常妊娠组20例，早发型重度子痫前期组10例，晚发型重度子痫前期组15例。酶联免疫吸附试验测定血浆中脂氧素A。和白三烯C4的水平，实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应技术检测外周血白细胞中5-脂氧合酶mRNA的表达水平，采用方差分析及LSD-t检验比较组间脂氧素A4、白三烯C4和5-脂氧合酶mRNA的差异，脂氧素A4、白三烯C4和5-脂氧合酶mRNA表达水平间的相关性采用直线相关分析。结果早发型和晚发型重度子痫前期组孕妇血浆脂氧素A。水平分别为（355．3±116．o）pg／ml和（389．7±117．5）pg／ml，均较正常妊娠组[（555．0±139．8）pg／m1]明显降低（t=-4．03和-3．77，P均〈0．05）。白三烯C4水平在早发型、晚发型重度子痫前期组和正常妊娠组分别为（591．3±185．5）pg／ml、（510．3±197．1）pg／ml和（496．9±158．8）pg／ml，3组间差异无统计学意义（F=0．889，P〉0．05）。白细胞中5-脂氧合酶mRNA表达水平在早发型、晚发型重度子痫前期组和正常妊娠组分别为4．8±2．0、4．4±1.2和4．2±1．9，3组间差异无统计学意义（F=0．311，P〉0．05）。各组脂氧素A4、白三烯C4水平及5-脂氧合酶mRNA表达水平间均无相关性（P均〉0．05）。结论脂氧素A4早且明显降低可能参与早发型重度子痫前期的发生。

胰腺癌组织中5-LOX的表达及临床意义

目的 :探讨胰腺癌组织中 5 -脂质加氧酶 (5 lipoxygenase ,5 LOX )的表达及临床意义。方法 :应用免疫组化技术检测了 46例胰腺癌组织、9例胰腺良性肿瘤、10例慢性胰腺炎、8例正常胰腺组织中 5 LOX的表达情况。结果 :5 LOX在胰腺癌、胰腺良性肿瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中的阳性率分别是 73 9%、2 /9、3 /10和 0 ,其在胰腺癌中的表达显著高于其他组织。 5 LOX与肿瘤的发生部位、分化程度、组织学类型之间差异无统计学意义 ;与TNM分期有关 ,Ⅲ～Ⅳ期表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期 ,χ2 =4 5 7,P <0 0 5。结论 :5 LOX与胰腺癌的发展、转移有关系 ,5 LOX抑制剂在胰腺癌的化学预防和治疗方面有广泛的前景。

5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性与脑梗死易患性的临床研究

目的探讨5-脂氧合酶激活蛋白基因（ALOXSAP）多态性在脑梗死患者中的表达与易患性的关系。方法分别选取脑梗死患者和体检健康人群各290例，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR．RFLP）分析法，检测ALOXSAP基因的单倍体型HapA（SG13S114T、SG13S89G、SG13S32A、SG13S25G）、HapB（SG13S377A、SG13S114A、SG13S41A和SG13S35G）以及相关核苷酸位点的多态性。结果脑梗死患者与正常人群之间ALOXSAP的单核苷酸多态性（SNP）-SG13S114、SNP．SG13S32基因型及单倍体型HapA携带率比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；其中SNP—SG13S1MAT与SNP—SG13S32AA均可独立增加脑梗死的患病风险（OR〉1．0，P〈0．05）。结论本地区脑梗死发病率受ALOXSAP的SNP—SG13S11g、SNP-SG13S32基因型及单倍体型HapA的影响。

共转染沉默5-LOX/COX-2基因对胃癌细胞SGC-7901生长的影响

目的观察沉默环氧合酶2(COX-2)基因和5-脂氧合酶(5-LOX)基因对胃癌细胞SGC-7901生长的影响。方法分别构建5-LOX/COX-2基因的靶向短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,共同转染胃癌细胞SGC-7901。将细胞分为空白对照组、空质粒组、单独转染组(P-sh5-LOX或P-shCOX-2)及共同转染组(P-sh5-LOX+P-shCOX-2)。分别采用RT-PCR及Western blotting检测COX-2/5-LOX的mRNA及蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与空白对照组及空质粒组比较,5-LOX和COX-2基因单独转染组及共同转染组的mRNA和蛋白表达量均受到显著抑制(P<0.05)。P-sh5-LOX组(27.38%±0.64%)、P-shCOX-2组(29.05%±0.61%)及共同转染组(50.23%±1.73%)细胞增殖抑制率均显著高于空质粒组(3.78%±0.39%,P<0.05),共同转染组细胞增殖抑制率显著高于单独转染组(P<0.05)。P-sh5-LOX组、P-shCOX-2组及共同转染组的细胞凋亡率(分别为15.31%±1.53%、16.69%±1.28%、27.27%±1.18%)均显著高于空质粒组(0.99%±0.46%,P<0.05),且共同转染组显著高于单独转染组(P<0.05)。结论同时沉默胃癌细胞SGC-7901的5-LOX及COX-2基因,可显著抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡,其效果优于单独沉默其中一个基因。

5-脂氧合酶在子宫内膜异位症中的表达及与血管生成的关系

目的探讨5-脂氧合酶（5-LOX）在子宫内膜异位症（EMs）组织中的表达情况，分析5-LOX与EMs血管生成的关系。方法采用免疫组织SABC法检测32例EMs患者在位内膜和异位内膜组织中5-LOX、VEGF的表达和MVD值，并与25例正常子宫内膜进行比较。结果5-LOX、VEGF的表达及MVD值在异位内膜组高于在位内膜组和对照组（P〈0．05），三者在在位内膜组高于对照组（P〈0．05）。在异位内膜组中，5-LOX、VEGF的表达和MVD值在Ⅲ/Ⅳ期均高于Ⅰ/Ⅱ期（P〈0．05）；5-LOX、VEGF的表达及MVD值与病情严重程度呈正相关（P〈0．05）。在异位内膜组和在位内膜组中，5-LOX与VEGF的表达、MVD值均呈正相关（P〈0．05）。结论5-LOX在EMs组织中的高表达可能与EMs的发病有关，并可通过上调VEGF的表达促进EMs的新生血管的形成。