重组花生过敏原Ara h2的生物合成

为获得重组花生过敏原Ara h2。通过RT-PCR合成cDNA,并以此为模板进行PCR扩增目的基因Ara h2,扩增产物经纯化后克隆至pMD19-TSimple载体中,构建重组质粒pMD19-T-Ara h2。上述重组质粒经酶切纯化后定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-Ara h2,并转化表达宿主菌BL21-codonPlus(DE3)-RIPL中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果表明,该表达蛋白大小约为46kD,与理论值相符。通过Glutathione Sepharose 4B凝胶亲和层析方法纯化融合蛋白GST-Ara h2,获得融合蛋白纯度约为90%。Western blotting分析表明,经纯化的融合蛋白能与抗Ara h2兔血清发生特异性反应,说明该蛋白具有良好的免疫原性。

花生过敏原蛋白Ara h2的分离纯化研究

食物过敏是食品安全领域内比较突出的问题,花生因其高致敏性被列为八大致敏原之首。在花生致敏原中,Ara h2是主要致敏原。以Ara h2为研究对象,通过对花生脱脂,设置不同浸提液、pH、料液比、浸提时间的蛋白质浸提条件,透析分离纯化目标蛋白质,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳对优化结果进行鉴定,正交试验确定最佳浸提工艺。结果表明:最佳浸提工艺参数为浸提时间90min、浸提pH值7.4、浸提料液比1∶8、浸提液Tris-HCl缓冲液。在此优化条件下目标蛋白质含量可达1.58mg·mL^(-1),浸提率可达47.8%。