黄花蒿花粉变应原舌下滴剂治疗蒿属花粉过敏的有效性及安全性评价

目的评价黄花蒿花粉变应原舌下滴剂治疗蒿属花粉致敏季节性变应性鼻炎(SAR)的有效性及安全性,为SAR患者变应原特异性免疫治疗(AIT)提供临床依据。方法选取确诊为蒿属花粉AR患者148例,纳入随机、安慰剂、双盲平行对照研究。所有患者经皮肤点刺试验(SPT)证实均适合接受SLIT,其中舌下免疫治疗(SLIT)组(n=74)予以黄花蒿花粉变应原舌下滴剂含服治疗,按需辅以对症治疗(ST);安慰剂组(n=74)舌下含服安慰剂,按需辅以抗组胺药物及局部激素疗法。以鼻症状总积分(TNSS)、视觉模拟量表(VAS)评分、变应性鼻-结膜炎生活质量量表(RQLQ)评分及Th17/Treg免疫平衡状况作为有效性评价指标,以不良事件发生状况作为安全性评价指标。结果治疗9个月后,同安慰剂组比较,SLIT组在TNSS、VAS及RQLQ的评分改善方面效果更优,差异均有统计学意义(P值均<0.05);SLIT组Th17细胞百分比和血清IL-17的表达均较安慰剂组降低,Treg细胞百分比和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达均较安慰剂组升高,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。2组在试验周期内共观察到39例次不良事件,绝大多数为轻度、一过性的不良反应,极少有中度不良反应,均未出现严重不良反应,无不良转归。结论黄花蒿花粉变应原舌下滴剂特异性免疫治疗蒿属花粉致敏AR患者,对控制疾病进展、改善生活质量有较好效果,且未增加不良反应。作用可能是通过调节Th17/Treg免疫平衡实现的。

中国武汉地区葎草花粉变应原蛋白质组分的双向电泳分析

应用蛋白质双向电泳的分析技术对武汉地区生长的主要过敏原———葎草(Humulus scandensLour.)花粉的蛋白质组分进行了分析。应用三氯乙酸法提取葎草花粉总蛋白质,通过等电聚焦和第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得了完整的葎草花粉全蛋白质图谱。应用专业分析软件(Im ageM aster 2D)对电泳图谱分析表明:通过等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳,有122个不同的蛋白质组分被检测出来,并进一步确定每个蛋白质相应的分子量、等电点和相对含量。研究中获得的高分辨率的双向电泳图谱是我国葎草花粉变应原蛋白质第一张完整的蛋白质图谱,将为今后葎草花粉中致敏蛋白质的检测、分离、基因克隆和变应原的标准化奠定基础。

纯化花粉变应原免疫治疗的疗效观察

目的:观察纯化花粉(黄蒿、葎草、藜草花粉)变应原特异性免疫治疗(SIT)的疗效.方法:采取凝胶过滤方法分别提纯上述花粉变应原.采取随机、对照方法将102例确诊为季节性黄蒿、葎草、藜草花粉过敏性哮喘患者分为观察组(A组)及对照组(B组),应用纯化花粉变应原(PPA)及粗花粉变应原(CPA)分别对两组患者进行季节前SIT,疗程3mo.临床疗效判断标准为显效、好转及无效.临床不良反应观察包括局部或全身皮疹、哮喘加重等.实验观察指标为两组SIT前后的皮肤试验(ID)风团直径、特异性IgE(sIgE)、A值均值.结果进行组内和组间比较.结果:A组SIT总有效率90%(47/52),B组78%(39/50),前者明显高于后者(P<0.05);A组仅3例轻度副反应,B组有13例(26%)出现副反应;A组及B组SIT后ID风团直径、sIgE,A值均值都较SIT前明显下降(P<0.01);A组SIT后上述指标下降程度较B组更明显(P<0.05).结论:PPA及CPA的SIT疗效均较满意,但用PPA进行SIT的安全性和疗效更好.

豚草花粉变应原致过敏性鼻炎豚鼠模型的建立

为了建立豚草花粉变应原致过敏性鼻炎的实验动物模型 ,将健康豚鼠 42只 ,随机分为致敏组 ( n=3 2 )和对照组 ( n=1 0 )。致敏组经腹腔、四肢皮下注射豚草花粉变应原免疫 4周后 ,鼻腔滴入豚草花粉变应原 ;对照组以生理盐水代替变应原。结果致敏组 2 8只出现鼻痒、喷嚏、流清涕等过敏性鼻炎的临床体征 (评分 >5分 ) ,鼻腔分泌物涂片见大量嗜酸性粒细胞 ,以及鼻粘膜水肿、粘膜嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润等组织学变化 ,而对照组无上述变化 ( P<0 .0 0 1 )。本实验建立的豚草花粉变应原致过敏性鼻炎的实验动物模型 ,为过敏性鼻炎 ,特别是豚草花粉变应原所致的过敏性鼻炎的诊断。

葎草花粉变应原核酸疫苗通过诱导Foxp3^+Treg细胞分化介导对哮喘模型小鼠的免疫保护作用

目的构建葎草花粉变应原核酸疫苗pcDNA3.1-Hum,并探讨其是否通过诱导Foxp3+Treg细胞分化介导对哮喘模型小鼠的免疫保护作用。方法双酶切pTripIEx2-Hum质粒以获取目的基因,定向插入pcDNA3.1(-)载体以构建pcDNA3.1-Hum核酸疫苗并测序鉴定,转染至COS-7细胞以证实其表达。采用表达的目的蛋白刺激CD4+CD25-T细胞,验证其能否诱导Foxp3+Treg细胞分化。使用pcDNA3.1-Hum免疫正常小鼠,检测特异性IgE、IgG2a水平以探讨其免疫原性、变应原性;免疫哮喘模型小鼠以验证其免疫保护作用。结果测序证实该构建成功并可在真核细胞内表达;证实表达的目的蛋白可诱导CD4+CD25-T细胞向Foxp3+Treg细胞分化。动物实验提示pcDNA3.1-Hum可诱导特异性IgG2a,不能诱导特异性IgE;可明显降低哮喘模型小鼠气道炎症反应、气道高反应性;升高脾脏Foxp3+Treg细胞百分比;降低IL-4、升高IFN-γ水平。结论成功构建了pcDNA3.1-Hum核酸疫苗,表达的目的蛋白可介导Foxp3+Treg细胞分化。动物实验证实该疫苗具有免疫原性及免疫保护作用,并提示其通过诱导Foxp3+Treg细胞分化介导Th1倾向的免疫保护作用。

荨麻疹等6种皮肤病与花粉变应原关系的分析(附1079例报告)

1 引言为了探讨慢性荨麻疹、湿疹、瘙痒症、过敏性皮炎、痒疹、银屑病与花粉变应原(简称PA)的关系,我科自1984年以来,用PA对6种皮肤病1079例患者进行了特异性检查,结果PA对6种皮肤病均有不同程度的抗原性,现将结果报道如下。

昆明地区致敏性花粉变应原浸液的制作与临床应用

花粉变应原是变应原中较为重要的一类,是对花粉症特异性诊治的主要制剂。由于花粉的数量、种类及播散具有明显的地区性,故我们在制作花粉变应原前,于1987～1989年连续三年对昆明地区常年飘散花粉进行了系统调查,从中筛选出24种空气中飘散时间长、微粒小、可能致敏的花粉,制作变应原浸液应用于临床。现就制作及应用报告如下:

花粉变应原的分离与鉴定

花粉变应原的分离与鉴定是研究花粉变应原性的基础,同时也是建立变应原标准定量方法以实现花粉变应原制剂标准化的前提。在花粉症的其他防治研究中,花粉变应原的分离与鉴定可为分子诊断方法的建立、低致敏性重组变应原疫苗、肽段疫苗及 DNA 疫苗的研究奠定良好的基础,也有利于特异性免疫治疗机制的阐明。因此,花粉变应原的分离和鉴定对花粉症及其防治研究具有重要意义。

野苋菜花粉变应原组分分析

目的 :分析野苋菜花粉变应原提取液的蛋白组分。方法 :应用SDS -PSGE及薄层扫描。结果 :发现其有四条蛋白条带 :6 4 .2KD、占 34.3% ;34.0KD、占 4 9.1% ;2 0 .6KD、占 6 .0 % ;13.0KD、占 10 .4 %。结论 :野苋菜花粉变应原提取液以 34.0KD、6 4 .2KD的蛋白为主。

木麻黄花粉变应原蛋白质组分的双向电泳分析

木麻黄(CasuarinaequisetifoliaLinn)为广东和华南沿海防护林及用材的优良树种。在最近的植物花粉过敏原调查中发现,木麻黄的花粉为中国东南沿海地区主要吸入性过敏原之一,开花季节会引起过敏人群产生哮喘、过敏性鼻炎等变态反应性疾病。目前,大约40%的过敏反应症状是由于接触特定的花粉后产生的,因此,当前有关花粉过敏原的研究都主要集中在花粉中特定致敏因子鉴定和分析上。为了解木麻黄花粉中的主要致敏因子,为今后花粉过敏反应的免疫治疗提供研究基础,本研究通过三氯乙酸(TCA)法提取木麻黄花粉总蛋白质,应用等电聚焦和第二向SDS-PAGE分析法获得完整的木麻黄花粉总蛋白图谱。结果表明:木麻黄花粉变应原中有85个不同的蛋白质组分,通过ImageMaster2D分析软件对获得的蛋白质图谱进行详细的全量蛋白质组分的量化分析,进一步确定木麻黄花粉蛋白质的等电点分布主要集中在4.5￣5.5之间,分子量分布集中在10￣30kD之间,各种蛋白质的相对含量差别很大,其中所有蛋白质种类等电点和各自所对应的分子量之间存在显著的相关性。相对国内外相关报道,本研究首次应用双向电泳技术获得木麻黄花粉高分辨率的蛋白质图谱,并通过相应软件获得详细的量化信息。本研究结果将为今后进一步确定木麻黄花粉变应原中的致敏蛋白并应用与相关临床研究奠定基础。

花粉变应原的脱色处理

用Sephadex G-25对几种花粉浸液进行层析,以去除色素等小分子杂质,并与常规透析法进行对比。前者脱色效果优于后者,操作时间缩短、蛋白质回收量均在85％以上,方法简便。经皮肤试验证明,其活性与未经处理的粗制液相比有所提高。

过敏性疾病患者常见花粉变应原相关性研究

通过对441例过敏性疾病患者蒿、豚、藜、苍耳四种花粉变应原血清特异性免疫球蛋白E(sIgE)水平进行相关性分析,初步探讨四种变应原之间是否存在交叉反应。结果显示sIgE 2级及以下者,所有变应原两两之间均呈正相关;3级及以上者,豚藜、豚苍耳和藜苍耳均呈显著相关,蒿豚低度相关,蒿藜和蒿苍耳均不相关。提示蒿藜及蒿苍耳的相关性可能是假阳性造成的,不存在交叉反应。蒿豚不同级别相关系数均较低,其交叉反应可能是发生在小分子蛋白间的。豚藜、豚苍耳和藜苍耳不同级别相关系数均较高,可能存在着主要或多种致敏蛋白分子间的交叉反应。

用杉花粉变应原开始脱敏疗法的临床试验

林原生物化学研究所使用天然杉花粉变应原和多糖体的支链淀粉(α-1,4-;α-1,6＇-葡聚糖)的复合体疫苗,已开始脱敏疗法的临床试验。 临床试验的详细情况不明。

首次克隆杉花粉变应原CryjⅡ基因

林原生物化学研究所在世界上首次克隆杉花粉的主要变应原CryjⅡ基因获得成功,并确定了全碱基序列。另外,93年3月美国Immulogic公司克隆的另一个主要变应原Cryj Ⅰ的克隆也获成功。使用杉花粉病患者的血清确认用大肠杆菌表达CryjⅠ、CryjⅡ基因会引起过敏反应。

葎草花粉变应原Humj1的重组表达、纯化及鉴定

通过载体构建、原核表达和纯化葎草花粉主要变应原Humj1,获得具有免疫活性的葎草变应原Humj1重组蛋白。经密码子优化,合成葎草Humj1基因,设计含有酶切位点的引物,将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,构建克隆载体,获得的目的片段与pET-28a表达载体连接,成功构建了pET-28a-Humj1原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21宿主菌中得到高效表达,并通过Ni-NTA亲和层析法纯化获得融合蛋白。对表达蛋白的生物信息学分析,测定其为亲水性蛋白,有较强的抗原性,主要以无规则卷曲结构为主。采用Western blotting免疫印迹法研究证明重组蛋白能与葎草花粉过敏患者血清结合,具有免疫活性,对将来研制葎草抗原的单克隆抗体以及脱敏疫苗的制备具有重要的临床意义。

南昌市某医院变应性鼻炎季节性花粉变应原初步分析

分析南昌市变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者季节性花粉变应原谱,为完善季节性AR的临床诊治、预防及流行病学研究提供依据。采用回顾性分析2020年9月至2021年8月就诊于南昌大学第一附属医院耳鼻喉科门诊AR患者(共1752人,其中男性1069人,女性683人,年龄范围2~84岁)的变应原皮肤点刺试验(skin prick test,SPT)结果,应用SPSS 22.0软件对比分析患者主要变应原阳性率及其在性别、年龄、不同就诊月份之间的差异,组间差异采用student t检验、Wilcox秩和检验或χ^(2)检验方法比较。结果显示,1752例SPT阳性结果患者中,单纯季节性AR、常年性合并季节性AR人数分别为102(5.82%)和281(16.04%);单纯季节性花粉变应原阳性在男、女性之间差异无统计学意义(χ^(2)=2.181,P>0.05),但男性常年性室内合并季节性花粉变应原阳性率高于女性(χ^(2)=7.901,P<0.05)。季节性花粉变应原阳性率前5位依次为柳树(6.62%,116/1752)、葎草(5.71%,100/1752)、油菜(5.54%,97/1752)、灰藜(4.62%,81/1752)和桦树(3.60%,63/1752)。常年性室内和季节性花粉变应原阳性率在不同年龄组中均呈现先增高后下降趋势,其中季节性花粉变应原阳性率最高的年龄段为31~40岁,与其他组比较差异均有统计学意义(χ^(2)=61.269,P<0.05)。季节性过敏原阳性率在时间上呈现两个高峰:3—5月份和9—11月份。单一花粉过敏者,春季花粉阳性率为60.27%(132/219),显著高于秋季花粉阳性率39.73%(87/219)(χ^(2)=9.247,P<0.05);多种花粉过敏者,春秋两季花粉组合阳性率为68.29%(112/164),显著高于单纯春季花粉阳性率18.9%(31/164)和单纯秋季花粉阳性率12.8%(21/164)(χ^(2)=14.731,P<0.05)。综上,南昌市地区的花粉过敏状况不容忽视,占AR总人数的20%以上。南昌市地区季节性AR发病呈现出2个高峰(3—5月份与9—11月份)。南昌市地区季节性AR以柳树、葎草、油菜、灰藜、桦树等为常见变应原。

青蒿花粉变应原Art a1基因的克隆、表达及特性鉴定

目的克隆、表达和鉴定青蒿花粉变应原Arta1。方法在成功构建青蒿花粉cDNA文库的基础上,用蒿属花粉过敏患者的阳性混合血清进行免疫学筛选,所获阳性克隆亚克隆入pET24a(+),经IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,并采用Westernblot和ELISA检测其IgE结合活性。结果选用阳性血清从青蒿花粉cDNA文库中筛选到1个阳性克隆,经序列测定,该基因与GenBank中已知基因无明显同源性,含有长度为609bp的开放阅读框,编码203个氨基酸,命名为Arta1;该重组变应原在大肠杆菌中高效表达为相对分子质量(Mr)为22.7×103蛋白,进一步在Ni2+亲和层析柱得到高度纯化;免疫学分析表明重组变应原有良好的IgE结合活性。结论本研究克隆和鉴定了一个青蒿花粉主要变应原Arta1(登录号为:CK700713),为花粉过敏性疾病的诊断和免疫治疗及进一步的实验研究奠定基础。

大籽蒿花粉变应原提取液双向电泳蛋白质组分分析

目的 探讨用双向电泳 (Twodimensionalelectrophoresis,2 DE)对大籽蒿花粉提取液蛋白质组分进行分析的可能性及其实用价值。方法 按常规方法提取大籽蒿花粉变应原 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳及双向电泳对大籽蒿花粉提取液变应原进行蛋白质组分分析。结果 单纯聚丙烯酰胺电泳结果可见有 4个较明显的条带 ,分子量分别为 6 2kD ,5 2kD ,4 3kD和 2 5kD。经双向电泳蛋白组分分析 ,发现大籽蒿花粉提取液有 85种蛋白组分。其中 ,第 139点的分子量为 31.4 9kD ,等电点为 5 .39;第14 3点的分子量为 31.86kD ,等电点为 6 .38。这两个点与文献所报道组分A2c的蛋白质分子量为31kD ,等电点分别为 5 .3和 6 .35一致。结论 双向电泳对大籽蒿花粉提取液蛋白质组分进行分析具有实用价值 。