花粉特异性核糖核酸酶基因诱导籼稻雄性不育及其遗传研究

以水稻愈伤组织和悬浮细胞系作为基因枪转化的外植体,把水稻花粉特异性基因PS1启动子与barnase构成的嵌合基因导入籼稻,获得籼稻五个品种Basmati 1、青油占、胜优2号,明恢63,新山占29的转基因植株.试验以两个质粒PS1- barnase和pILTAB227共转化的方法,以潮霉素B作为筛选因子,选择抗性愈伤及再生植株.获得的barnase转基因植株的育性比未转化的对照明显降低,表现为部分不育和完全不育.除barnase阳性转化株平均株高比对照有所降低外,营养器官发育正常,雌性可育.完全不育的植株花粉粒畸形,不能被I-KI溶液染色,但它们与正常植株杂交能够获得杂交种子.转基因植株的Sonthern杂交分析表明,bamase基因普遍为多拷贝整合.对转基因植株白交及与非转化株测交后代以点杂交分析bamase转基因的遗传行为,发现转基因的遗传符合1～3个插入位点的孟德尔遗传模式.

tritordeum花粉特异性表达的遗传分析

为明确转基因tritordeum中被外源uidA基因标记的启动子的调控特异性,对筛选到的一株标记材料进行了两代uidA基因的遗传表达分析,结果表明,后代材料基因组中都含有uidA基因,没有发生分离,且都只在花粉中检测到GUS活性,在其他组织没有检测到GUS活性.进一步RT-PCR分析显示uidA基因在根和叶中没有发生转录,说明该株材料为花粉特异性启动子被uidA基因标记的阳性纯合体,实验证明该特异性能稳定遗传.

小麦花粉特异性表达的cDNA的分离及表达特性

应用抑制差示杂交和5'／3’RACE PCR方法分离了小麦(Triticum aestivum L．)花粉特异性表达的全长cDNA(TaPSG719，GenBank：AY451238))，该基因全长1172bp，5’非编码区序列长达329bp，包含多个上游可译框架(uORF)；该基因编码188个氨基酸的蛋白质，大小约20kD，等电点为12．1。Northern杂交和RT—PCR分析表明该基因在成熟花粉特异表达，而在小孢子、叶片、根和未成熟的种子、幼茎和子房等组织几乎检测不到。进一步研究小麦花粉发育过程的表达水平表明，TaPSG719在单核和双核小孢子阶段不表达，在开花前5d(已完成有丝分裂)开始表达并迅速增强达到高峰，但随着花粉的成熟表达水平逐渐下降。表明TaPSG719是一个花粉中晚期特异性表达基因。经BLAST同源性分析表明，与目前已登录的基因没有显著的同源性。Southem杂交表明TaPSG719可能为一个多拷贝基因。为研究TaPSG719 cDNA 5’非编码区序列的uORF对可译框架的翻译的影响，构建不同缺失或突变的表达载体，采用麦胚体外翻译系统，结果显示含uORF的5’非编码区序列能显著抑制蛋白质的翻译水平，表明TaPSG719基因表达至少部分是在翻译水平上调控。

花粉特异性基因Lat52的结构、调控及其应用

对花粉特异性基因Lat52的结构及其调控序列进行了详细说明 ,并对其应用作了简单介绍 .

反向PCR法扩增花粉特异表达基因PSG076启动子

PSG076基因是从奥地利小麦品种‘Ferdinand’中分离的花粉特异性表达基因,功能未知。为获得可用于小麦基因工程的花粉特异性启动子,采用优化的反向PCR法分离PSG076启动子,获得了起始密码子上游约1.4 kb的启动子序列。生物信息学分析显示,该启动子除含有与花粉特异性表达相关的调控元件AGAAA和GTGA外,还含有花粉特异性表达相关的数量元件AGGTCA和AAATGA,推测其为活性较强的花粉特异性启动子。实验中对反向PCR方法的优化可提高扩增侧翼未知序列的效率,特别适用于启动子序列的扩增。

抗原特异性免疫治疗对过敏性鼻炎的疗效评价

目的 探讨抗原特异性免疫治疗 (SIT)对过敏性鼻炎的疗效及作用机制。方法 将豚草致敏的季节性过敏性鼻炎患者 132例随机分为治疗组(SIT组 ,n =6 8)、对照组 (症状性治疗组 ,ST组 ,n =6 4 ) ,另选 4 0例健康人为健康组。用豚草变应原进行季节前 6个月的抗原特异性免疫治疗 ,疗程为 3年。分别测定各组细胞因子IL 4、IL 5、IFN γ的含量 ,血清sIgE、TIgE、ECP、IgG水平和外周血嗜酸性粒细胞 (Eos)计数。比较SIT组和ST组治疗前、后上述各指标及肺功能、鼻炎症状评分和皮肤试验指数的变化。结果 与ST组比较 ,SIT组血清TIgE、ECP水平 ,血Eos计数 ,细胞因子IL 4、IL 5水平均明显下降 (P <0 0 1) ,而IgG和IFN γ含量明显上升 (P <0 0 1)。两组sIgE水平差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。SIT组临床控制 30 88% ,显效 4 1 18% ,好转 2 0 5 9% ,无效 7 35 % ;其中出现轻度不良反应的占 16 18%。ST组治疗前、后上述各种参数无明显改变 ,其中 2 5 % (16 / 6 4 )的过敏性鼻炎患者在第 3年发生哮喘。结论 SIT能明显改善过敏性鼻炎的临床症状和相关实验室指标 ,是治疗过敏性鼻炎的有效方法之一。

小麦TaPSG719基因启动子的分离及序列分析

TaPSG719基因是从小麦中分离的花粉特异性表达基因,其功能未知。克隆和分析该基因的启动子有助于研究该基因的功能,解析小麦花器官的发育调控机制。本研究根据已报道的TaPSG719基因cDNA序列为基础设计引物,经过两次反向PCR获得了该基因起始密码子上游1776bp的调控序列。应用PLACE和PlantCARE数据库系统对该序列进行分析研究,发现其具有启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box、两种花粉特异性调控元件AGAAA和GTGA及光反应和激素响应元件。

烟草NtMTPC4启动子的克隆与缺失分析

组织特异性启动子是基因工程研究及实际应用中的重要工具。为了研究烟草NtMTPC4启动子的表达特性,采用实时荧光定量PCR方法分析烟草金属耐受蛋白C4(MTPC4)基因NtMTPC4在烟草不同组织中的表达模式,并利用PCR技术克隆得到NtMTPC4的上游启动子NtMTPC4-P。根据调控元件的分布对NtMTPC4-P进行不同程度的缺失,获得了NtMTPC4-P1、NtMTPC4-P2和NtMTPC4-P3缺失体;构建全长NtMTPC4-P和不同缺失体的植物表达载体,并通过花序浸染法转化拟南芥,对获得的转基因拟南芥进行GUS组织化学染色分析。结果表明,NtMTPC4基因的表达具有组织特异性,其在花中的表达量最高。NtMTPC4-P全长2 287 bp,含有CAAT-box、TATA-box、GTGANTG10和POLLEN1LELAT52等顺式作用元件和调控元件。GUS组织化学染色结果表明,全长启动子NtMTPC4-P和不同缺失体都能特异性地驱动GUS基因在转基因拟南芥花粉中的表达。本研究结果为通过基因工程技术在花粉中特异表达目的基因提供了新的调控元件。

人工授粉对濒危植物长柄双花木结果率和结籽率的影响(英文)

花粉和资源有效性是影响有花植物生殖成功的关键因素。本研究探讨了人工授粉对濒危植物长柄双花木雌性生殖模式,尤其是对其结果率、结籽率以及果实和种子重量的影响。研究结果表明:异花授粉提高了长柄双花木的结果率和结籽率,且前期花的结果率、结籽率均显著高于后期花的;而自花授粉不但显著降低了其结果率和结籽率,同时在前期和后期花的结果率、结籽率之间均无显著差异。异花授粉显著提高了单株植物种子重量及单果种子重量,而自花授粉则显著降低了它们的重量。异花授粉后前期花的果实重量及单果种子重量均显著高于后期花的。同时,异花人工授粉后种子数量和单粒种子重量之间存在权衡,而自然授粉条件下则不存在这种权衡。

配子体自交不亲和雄性决定因子的鉴别及其功能研究进展(英文)

配子体自交不亲和由具有多基因的单一位点S位点控制,该位点包括紧密连锁的雌性(雌蕊)和雄性(花粉)S决定因子。本文综述了近年来金鱼草、矮牵牛、李亚科植物花粉特异性F-box基因的鉴别及雄性S决定因子的鉴定,论述了雄性决定因子在自交不亲和反应中的功能研究进展。当前对雄性决定因子的功能研究认为,在亲和反应中它非特异地与S-RNases作用,通过形成一个功能的SCF复合体仅使非自身S-RNase被泛素介导的26S蛋白酶体降解,花粉管得以继续生长至胚囊完成双受精;而自身S-RNase的活性被特异保留,作为细胞毒素降解花粉管RNA,从而抑制自身花粉管的生长。图3参43。

蒿草花粉所致气道过敏性疾病的研究进展

过敏性疾病的发病率逐年升高,已经成为影响世界各国所有年龄组人口的全球性公共卫生问题。花粉作为过敏性疾病的重要过敏原之一,致敏率在过去的30年里升高了1倍多。蒿草作为一种经济作物,在部分地区有着广泛种植,可用于医药、食物产业或作为畜牧饲料。随着蒿草花粉暴露量显著增加,蒿草花粉成为北方和西部地区的主要吸入性过敏原,其携带的颗粒物可达小气道,并可诱发气道长时间阻塞,且它还是空气中内毒素的主要载体,对人类健康的影响也要广泛得多。本文作者对蒿草花粉变应原的流行、分布及致敏特征对防治花粉过敏原所致气道过敏性疾病的研究进展进行综述。