番茄花药特异表达启动子LAT52的克隆与表达载体构建

采用半巢式PCR方法,从番茄基因组中扩增出了花药特异表达启动子LAT52。该序列与GenBank公布的同源序列相似度达98%,并鉴别到一个TAAAAAA简单重复序列。将LAT52启动子与GUS基因拼接,构建成了双元表达载体。

LAT52启动子在甘蓝花药中的表达模式

[目的]验证花药特异性启动子LAT52能否在甘蓝花药中发挥功能。[方法]从番茄中扩增得到LAT52核心序列608 bp,进行序列分析,连接LAT52启动子到双元表达载体p BI121,转化农杆菌GV3101,用农杆菌浸染法侵染甘蓝幼苗下胚轴,获得2株阳性植株,对转基因甘蓝植株的花蕾、花药及花粉进行GUS染色。[结果]LAT52核心序列608 bp具多个与花粉特异性表达相关的元件,浸染的LAT52启动子仅在花药及花粉中表达出蓝色,其他部位未染上蓝色。[结论]LAT52启动子仅在甘蓝花药及花粉中特异性表达。

番茄花药特异表达启动子LAT52的克隆与表达载体构建

采用半巢式PCR方法，从番茄基因组中扩增出了花药特异表达启动子LAT52。该序列与GenBank公布的同源序列相似度达98％，并鉴别到一个TAAAAAA简单重复序列。

Lat52介导的特异性表达载体的构建及其鉴定

利用含花粉特异性启动子Lat5 2的质粒pLat5 2 7、含细胞毒素A链基因的质粒pGA96 8以及表达质粒载体pGA987,进行酶切连接 ,构建了含有Lat5 2特异性启动子和细胞毒素A链基因的表达载体 .经酶切和PCR进行鉴定 ,证明所构建的重组载体即为实验所需的载体质粒 。