越橘VcANS基因的克隆及表达分析

【目的】从越橘果实中克隆花色素合成酶(ANS)基因cDNA,为研究越橘花色素苷合成的分子机制奠定基础。【方法】以越橘(Vacciniumspp.)品种"北陆"(V.corymbosum L.)为试材,并以Illumina测序文库(NCBI登录号:SRA046311)中差异表达的Unigene 38125片段为基础,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得花色素合成酶基因全长cDNA,利用DNAMAN和MEGA软件进行多序列比对和系统进化分析,探讨ANS基因在不同组织和器官中的相对表达量及其与对应花色素苷含量的关系。【结果】成功克隆了越橘花色素合成酶基因序列,命名为VcANS,GenBank登录号为JN654701。序列分析结果表明,VcANS全长1 424bp,包含93bp的5′非编码区、248bp的3′非编码区和1个长度为1 083bp编码360个氨基酸的开放阅读框,该基因编码的蛋白具有ANS家族普遍存在的2-酮戊二酸和Fe2+-依赖的氧化酶超家族的保守结构域。序列比对和系统进化分析表明,VcANS与杜鹃花科植物亲缘关系最近。在越橘果实发育的不同阶段,VcANS相对表达量的变化与花色素苷含量的变化趋势具有一致性。【结论】获得了越橘花色素合成酶基因全长,推测其对越橘花色素苷的形成起调控作用。

新疆红肉苹果发育期间花青素代谢的研究

以新疆红肉苹果为试材,研究其生长发育过程中果肉花青素合成代谢的变化。结果表明：新疆红肉苹果果肉中的花青素含量从5月18日~6月11日逐渐减少,从7月5日~7月29日缓慢增长;在成熟的果实中,果肉花青素的含量是0.36 mg·g-1FW,高于普通品种的苹果,说明新疆红肉苹果是潜在的、良好的花青素来源;在新疆红肉苹果中,可溶性糖含量与类胡萝卜素含量呈显著负相关（R=-0.75）,花青素含量与类胡萝卜素含量呈显著正相关（R=0.79）,花青素含量与苯丙氨酸解氨酶（PAL）、花色素合成酶（ANS）之间没有明显的相关性,显示可能存在一些消耗花青素的途径。

利用Gateway技术快速构建棉花GhANS基因植物表达载体

【目的】为了进一步探讨GhANS(花色素合成酶)基因的上调表达对彩色棉纤维色素合成的影响,构建了棉花GhANS基因的植物表达载体。【方法】利用Gateway技术的同源重组原理,将GhANS基因通过BP反应和LR反应分别重组到植物过表达载体pGWB17与干扰表达载体pANDA35HK中。【结果】经PCR和酶切鉴定,PCR扩增片段与酶切片段大小与预期结果相一致。【结论】基于Gateway技术的棉花GhANS基因的过表达载体和干扰表达载体已构建成功,为进一步研究该基因的功能及棉花的遗传转化奠定了基础。