橡胶树不同发育时期花药愈伤生长发育对低温的响应

橡胶树花药再生体系是我国最早建立的橡胶树体胚植株再生技术体系,其产生的再生植株为自根幼态无性系,兼具实生苗生长迅速、抗逆性强和芽接苗遗传同质的优点,同时因发育时期从老态恢复至幼态,产量提升20%以上。然而每年花蕾采集期约为60d,无法全年供应由花药壁细胞脱分化形成的愈伤组织,造成依托于该材料的研究无法持续进行。本研究以橡胶树品种热研73397雄蕊为材料,研究不同发育时期的花药愈伤(0、7、14、21、28、35、42 d)在15、20℃两个低温下保存15 d其愈伤诱导和体细胞胚发生发育的情况。结果表明:15℃和20℃两个温度对低温保存后愈伤诱导、体细胞胚发生各阶段除胚性愈伤数显著低于对照组外,其余无显著影响;发育时期对低温保存后愈伤诱导、体细胞胚发生各阶段均有显著影响(P<0.05),对子叶胚形成阶段影响最大,其中21d和35d花药愈伤组织经低温保存后其子叶胚数量分别显著高于和低于对照组子叶胚(P<0.05);15℃和20℃低温保存15 d后不同发育时期花药愈伤组织与对照组相比,可延长花药初代愈伤供应时间15~60 d,初代子叶胚供应时间27~95 d。最优方案为发育时期21 d的花药愈伤在15℃低温下保存15 d,可延长花药愈伤和初代子叶胚供应60 d和60~95 d,该处理虽降低了46.61%愈伤数,但促进了子叶胚形成,子叶胚数提高了27.18%。本研究实现了橡胶树花药愈伤的短期保存,有效解决了因花期短导致遗传转化受体来源不足的困难,全年3个花季可开展实验时间由60 d延长至240 d,有助于加快橡胶树花药愈伤遗传转化体系优化研究。

根癌农杆菌介导的橡胶树花药愈伤组织遗传转化体系的建立

为建立根癌农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系,以花药愈伤组织为受体,研究了农杆菌菌株、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等因素对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌菌株、共培养温度和共培养时间对转化效率具有显著影响,AS不影响转化效率。2.2万个花药愈伤组织经EHA105菌株侵染后,转入未添加AS的培养基,22℃共培养6d,通过50mgL-1卡那霉素抗性筛选、叶片GUS染色、uidA和NptII基因PCR特异扩增、PCR产物测序及NptII基因Southern检测,鉴定出11株转基因植株,并通过嫁接和次生体胚发生,获得来自8个转基因株系的681株转基因植株,移栽成活253株。

采用流式细胞仪鉴定紫花苜蓿花药愈伤组织的变异

本试验采用流式细胞仪,对3个基因型8个继代周期的苜蓿愈伤组织DNA含量进行测定。通过DPAC软件(data pool application of cytometre)分析出细胞DNA含量变异百分率和处于S期细胞的百分率,并采用SPSS 10.0软件分析出愈伤组织继代时间与DNA含量变异率之间的关系。结果表明,本试验所采用的3个基因型8个继代周期24个紫花苜蓿愈伤组织样本DNA含量均发生了变化,且全都出现了DNA加倍的现象。在24个样本中,DNA含量变异率最大的是自选系大叶0510的愈伤组织继代15周时的样本,变异率达到了19.45%。通过SPSS10.0软件分析,表明紫花苜蓿愈伤组织DNA含量变异细胞百分率与继代时间存在相关性,随着继代时间的延长,染色体变异率有增加的趋势,但这种趋势不是无限增大的。继代0～12周是愈伤组织DNA含量变异的集中发生期,以后随着继代次数的增加,DNA含量变异率趋向于稳定。

消毒方法对草莓花药愈伤组织形成的影响

花药培养是培育脱毒草莓的重要途径，而表面消毒又是花药培养的重要环节，为了选择合适的表面消毒方法，我们进行了该项试验。１材料和方法供试草莓品种为“日本一号”，于河南省农科院植保所温室中种植。１９９８年１０月至１９９９年１月采集直径为０．４～０．６ｃｍ的...

百日草根尖和花药愈伤组织染色体制片技术

以种子萌发根尖和花药愈伤组织为材料,研究了取样时间、预处理方法对百日草染色体制片的影响。结果表明:根尖上午8:00～9:00,花药愈伤继代3～5d上午9:00～10:00为最佳取样预处理时间;采用三种药剂预处理活体根尖,以4℃下饱和对二氯苯溶液或0.002mol/L的8-羟基喹啉液预处理8h效果最佳,花药愈伤则以饱和对二氯苯溶液预处理6h效果最佳。本实验的预处理温度是固定的,可克服预处理随季节和时间温度的变化而带来的不稳定性,且百日草花药愈伤染色体观察为首次报道。

AgNO_3对橡胶树花药愈伤组织形态及体胚发生的影响

橡胶树的花药愈伤组织在长期继代过程中,胚性易下降甚至丧失;而AgNO_3作为乙烯活性抑制剂,被广泛应用于植物组织培养中。该研究以继代培养4 a以上的热研7-33-97花药愈伤组织为材料,在继代培养基中添加2.5 mg·L^(-1)AgNO_3预培养35 d后,观察预培养前后愈伤组织表形及其细胞形态的变化,并设计不同浓度AgNO_3及不同处理时间对其进行体胚诱导,90 d后分别统计胚状体总数和正常胚数。结果表明:浅黄色质地柔软的愈伤组织在含AgNO_3的培养基上预培养后能转变成鲜黄色易碎愈伤组织,在倒置显微镜下前者大多表现为不规则多边形,细胞内含物较稀薄;而后者则呈圆形或椭圆形,细胞内含物丰富,属于典型的胚性细胞。在体胚诱导的第1个月添加5 mg·L^(-1)AgNO_3能显著促进体胚的发生,AgNO_3浓度升至10 mg·L^(-1)时体胚发生受到抑制,且畸形胚的形成率显著增加;在含5 mg·L^(-1)AgNO_3的培养基中培养2个月以上,体胚发育明显受阻,大部分形成畸形胚。该研究结果在一定程度上恢复了橡胶树长期继代花药愈伤组织的胚性能力,并提高了其体胚发生频率,为橡胶树花药胚性愈伤组织长期继代培养过程中胚性的保持提供了参考。

光皮树花药愈伤组织原生质体分离的研究

为获得高质量的原生质体,给光皮树转化系统的建立奠定基础,以光皮树花药愈伤组织为材料,研究了愈伤组织结构、酶液组合、酶解时间及渗透压对原生质体分离效果及活力的影响,从而确定适合光皮树花药愈伤组织原生质体最佳分离条件。结果表明:淡黄绿色、疏松的愈伤组织在CPW+2%纤维素酶R-10+0.3%蜗牛酶+0.25%果胶酶Y-23+13%甘露醇+0.6/L MES的酶解液中,黑暗条件下振荡酶解10 h,原生质体产量达到3.19×106个/g,具活力的原生质体为73.48%。

油茶12个物种花药愈伤组织诱导及继代培养

选择12个油茶物种进行花药愈伤组织的诱导,以小果油茶、普通油茶、短柱油茶、浙江红花油茶、茶陵红花油茶、多齿红花油茶诱导率较高,在40％～70％之间,其中小果油茶、普通油茶的愈伤组织诱导率高达70％。红皮糙果油茶、广西糙果油茶、茶陵红花油茶、多齿红花油茶、攸县油茶花药褐化较严重。继代培养中6-BA和KT均有较好的促进作用,小果油茶、普通油茶、短柱油茶、浙江红花油茶、茶陵红花油茶、多齿红花油茶的愈伤组织均增殖较好。油茶花药培养应以小果油茶、普通油茶、短柱油茶、浙江红花油茶、茶陵红花油茶、多齿红花油茶作为进一步试验的基本材料,开展下一步的愈伤组织增殖和脱分化试验。

基因枪介导转化水稻花药愈伤获得抗白叶枯病转基因植株

以质粒pBI12 1作外源DNA ,对基因枪介导转化水稻花药愈伤的有关参数进行了优化 ,优化值分别为射程 9cm ,枪膛氦气压力 110 0psi,真空度 36 0 0～ 3733Pa ,轰击次数 2次。轰击前后愈伤经 0 .4mol/L甘露醇处理可提高转化效率。在优化条件下将Xa2 1基因导入籼型光敏核不育水稻W945 1S ,获得了单倍体植株 ,经人工染色体加倍得倒二倍体转基因植株。

用花药愈伤组织作为转化受体的水稻转基因植株的分析

以花药愈伤组织作为转化的受体材料 ,利用农杆菌介导法将已克隆的Xa2 1基因导入粳稻栽培品种台北30 9中。共获得 7个转基因株系 ,其中 2个单倍体 ,4个二倍体 ,1个混倍体。PCR、Southern、FISH以及白叶枯病抗性的分析结果都表明Xa2 1基因已整合到T0 代受体基因组。调查了 4个二倍体株系T1代的分离情况 ,经 χ2 测验证明 ,有 2个株系的分离比为 3∶1,为单拷贝插入 ,另外 2个株系不符合孟德尔分离。 4个T0

冬小麦花药愈伤组织无性系R_2的变异

从一株冬小麦H_1花粉试管苗基部,取未分化绿苗的胚性愈伤组织建立细胞无性系,从中获得4丛R_1结实株系,对其R_2进行田间观察,发现其中一株发生了变异,R_2的株系变异率为25.00%.该变异株系R_2的86个单株的变异情况统计结果显示,在3个主要农艺性状中,株高变异率最高,为67.44%,其次是千粒重,为50.00%,单株穗数居第三位,为47.67%.其它性状如种子蛋白质含量,粒色,粒形,穗形均发生变异,且幅度大,频率高,不仅株系内存在变异,穗系内也存在变异.在调查的性状中只有芒性未发生变异.

大麦籽粒及花药愈伤组织的游离氨基酸含量分析

对同一基因型大麦花药愈伤组织与籽粒中的游离氨基酸含量尤其是赖氨酸含量之间的关系进行分析,结果表明,对同一基因型而言,愈伤组织及籽粒中的同一氨基酸含量高低具有相同趋势。同时着重分析了愈伤组织中游离脯氨酸的含量与绿苗分化的关系,结果表明游离脯氨酸含量高的愈伤组织,其绿苗分化率较高,说明脯氨酸对绿苗分化具有重要作用。966259的花药愈伤组织及籽粒中的游离氨基酸总含量及游离赖氨酸含量均最高。

不同培养基条件对红景天花药愈伤组织生长量的影响

为进一步开发利用红景天资源,以红景天花药诱导的愈伤组织为材料,研究了不同培养基、不同种类和浓度的生长素和细胞分裂素对花药愈伤组织生长量的影响。结果表明:培养基MS和NB对花药愈伤组织生长量的影响无显著差异;低浓度的生长素对红景天花药愈伤组织生长量有利,2,4-D对愈伤组织生长的影响略高于NAA。高浓度的6-BA利于在景天花药愈伤组织生长,在含有相同浓度NAA的培养基中,6-BA比KT适合花药愈伤组织生长。

槐树花药愈伤组织在继代培养过程中的染色体变异

选取15年生槐树(Sophora japonica)的花药(花粉粒为单核靠边期)接种在 MS 固体培养基上。培养基附加浓度不同的两种激素2,4-D 和 BA,组成10种培养基。两周后,在各培养基上的花药均产生愈伤组织,继代培养间隔为一个月。每次接种后10—20天,随机在不同的愈伤组织区取材。0.04%秋水仙素预处理2—4小时,卡诺液固定2—24小时,1 mol/L HCL、60℃水解5—15分钟,改良品红染色,常规压片,镜检记数并照像。

提高石刁柏花药愈伤组织的诱导及植株再生率的研究

本文就提高石刁柏花药愈伤组织诱导率及其器官分化率和植株生根,移栽成活率的有关于主要因子进行研究.1、适宜浓度的2,4-D、NAA、BA 配比的1/2MS(铁盐除外)培养基,可诱导芦笋单核期的花药产生较高百分率的花药愈伤组织,各激素适宜浓度为2,4-D 1.0mg/L、NAA 0.5—2mg/L、BA 0.5—2mg/L。诱导率最高可达78.05%。

不同基因型大豆花药愈伤组织诱导的研究

不同基因型大豆花药愈伤组织诱导的研究河北省承德农业学校苏淑欣，黄守印，池景存，尚文艳，崔海明，邢路军细胞水平的单倍体育种已在大多数单子叶植物上获得成功，花育号水稻、小麦品种已在生产上推广应用［１］，但大豆的单倍体育种至今未见成功的报道［２－６］。我们...

控制花药愈伤组织诱导及再生的小麦基因

巴黎大学和加拿大植物生物技术研究所的研究表明,在谷类植物中,控制花药培养物再生的基因与控制体细胞或组织培养物再生的基因是不同的(Agricell Report 8∶42,1987)10∶13,1988)。匈牙利科学院及作物研究所的 E.Szakács 及共同事发现:在小麦中,愈伤组织诱导,总的植物再生(绿色及白化植株)和绿色植物再生分别受不同的遗传控制并且能够各自独立地遗传(Plant Cell Rep.7∶127,1988)。通过对“Chinese Spring”/“Cheyenne”进行染色体替代系的遗传分析,Szakács研究小组断定7A 和1B 染色体对愈伤组织诱导起着相当大的作用,3A

籼型光敏感核不育系花药培养的研究

用籼型光敏感核不育系8902s(双8-14/珍汕97//珍汕97)与5个材料(两个籼型不育系8912s 和 W6154s,一个中间型广亲不育系8925s,以及粳广亲品系69024和 PC311)的杂种F1花药作外植体,将穗子置8—10℃下进行低温处理,然后分别接种在三种不同组成的培养基上进行培养,主要结果如下: