白菜花药组织总RNA提取方法比较及其分析

以白菜花药组织为试材,利用异硫氰酸胍法和改良Tris-硼酸法提取花药总RNA。结果显示两种方法提取RNA的产量都较高,异硫氰酸胍法提取纯度低,但省时高效,适用于对模板要求低的RNA提取。而改良Tris-硼酸法提取花药RNA的产量高、质量好、纯度高,适用于mRNA差异显示及基因表达的Northern印迹等的RNA提取。

不同预处理对萝卜花药组织结构的影响

研究了花枝低温预处理及常、低温下离体花药的甘露醇和秋水仙素预处理对萝卜花药组织结构的影响。结果表明：4℃低温条件下处理枝条，处理1，3，5d的花药绒毡层细胞出现从排列整齐到逐步退化的现象，药室中的小孢子染色也逐渐加深，7d后花药壁细胞退化严重，小孢子数目则减少，故枝条低温预处理合适的时问为3～5d。4℃条件下离体花药经甘露醇和秋水仙素预处理3d后，药室中小孢子数目多，染色深，处理超过3d，小孢子数目急剧减少，活力下降。25℃条件下甘露醇和秋水仙素预处理不利于花药结构的维持与小孢子活力的保持。

燕麦花药组织培养影响因子研究进展

燕麦花药组织培养受各种因子的影响,从基因型、供体植株生长条件、花药的选择、预处理、培养基、培养条件几个方面对国内外燕麦花药组织培养研究进展进行综述,以期为燕麦花药组织培养提供参考。

不同基因型及培养基在燕麦花药组织培养中的应用

以JA3、M44、19A647燕麦资源为试验材料,采用花药离体培养方法,将3种材料的花药接种于C17、W14培养基上,研究3种基因型在2种培养基上反应率、出愈率、转移率和再生率的差异,以期筛选出适合燕麦花药培养的基因型和诱导培养基。结果表明,在3个基因型中,JA3的反应率、出愈率、转移率都是最高的,分别达到36.29%、26.95%、86.93%,只有JA3获得了再生植株,其绿苗率为0.10%,可见JA3适合用于花药组织培养,可以作为燕麦花药培养的桥梁材料;C17培养基中的愈伤组织比较紧凑,质量较好,W14培养基中的愈伤组织不易聚集长大,质量较差,从W14培养基中共获得6株白化苗,从C17培养基中获得2株白化苗、2株绿苗。由研究结果可以看出,燕麦花药愈伤组织诱导和再分化在基因型之间的差异显著,JA3适合作为燕麦花药培养的桥梁品种,相较于W14培养基,C17为燕麦花药培养的最佳培养基。

植物花药组织培养技术的研究

植物花药组织培养技术在育种和基础理论研究中已应用广泛,研究阐述了花药组织培养的技术发展现状,系统地论述了植物花药组织培养过程中外植体的不同、培养基配方、接种方式、培养条件的不同对组培结果的影响,并对花药组织培养技术的应用进行概述,使花药组织培养技术研究体系更加清晰系统。

光皮树小孢子发育及其对花药愈伤组织诱导的影响

为了构建光皮树花药组织培养技术体系,以光皮树优良无性系湘林G1小孢子不同发育时期的花药为外植体进行愈伤组织诱导,结合对其小孢子不同发育时期中花的形态特征观察和叶片中GA、IAA、ZR、ABA内源激素变化研究,综合分析小孢子不同发育期对花药愈伤组织诱导的影响。结果表明:光皮树优良无性系湘林G1小孢子在花粉母细胞、四分体、单核细胞和双核细胞4个时期的花药愈伤组织诱导具有显著差异,其中处于单核靠边时期能获得较高诱导率;花药愈伤组织诱导率与小孢子不同发育时期叶片中内源激素GA、IAA、ZR、ABA的含量存在一定的相关性,其中与ABA的含量成显著负相关性。

玉米93供113-1花药愈伤组织的诱导及植株再生

本研究以玉米９３供１１３－１为材料，用ＭＳ、Ｎ６、Ｂ５和正１４四种培养基诱导花药愈伤组织，结果正１４培养基诱导率最高，为６．７４％，在激素的影响中，２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的激素组合愈伤组织诱导率最高。在愈伤组织的分化实验中，ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的激素组合分化效果最好。

根癌农杆菌介导的橡胶树花药愈伤组织遗传转化体系的建立

为建立根癌农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系,以花药愈伤组织为受体,研究了农杆菌菌株、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等因素对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌菌株、共培养温度和共培养时间对转化效率具有显著影响,AS不影响转化效率。2.2万个花药愈伤组织经EHA105菌株侵染后,转入未添加AS的培养基,22℃共培养6d,通过50mgL-1卡那霉素抗性筛选、叶片GUS染色、uidA和NptII基因PCR特异扩增、PCR产物测序及NptII基因Southern检测,鉴定出11株转基因植株,并通过嫁接和次生体胚发生,获得来自8个转基因株系的681株转基因植株,移栽成活253株。

消毒方法对草莓花药愈伤组织形成的影响

花药培养是培育脱毒草莓的重要途径，而表面消毒又是花药培养的重要环节，为了选择合适的表面消毒方法，我们进行了该项试验。１材料和方法供试草莓品种为“日本一号”，于河南省农科院植保所温室中种植。１９９８年１０月至１９９９年１月采集直径为０．４～０．６ｃｍ的...

光皮树花药愈伤组织原生质体分离的研究

为获得高质量的原生质体,给光皮树转化系统的建立奠定基础,以光皮树花药愈伤组织为材料,研究了愈伤组织结构、酶液组合、酶解时间及渗透压对原生质体分离效果及活力的影响,从而确定适合光皮树花药愈伤组织原生质体最佳分离条件。结果表明:淡黄绿色、疏松的愈伤组织在CPW+2%纤维素酶R-10+0.3%蜗牛酶+0.25%果胶酶Y-23+13%甘露醇+0.6/L MES的酶解液中,黑暗条件下振荡酶解10 h,原生质体产量达到3.19×106个/g,具活力的原生质体为73.48%。

采用流式细胞仪鉴定紫花苜蓿花药愈伤组织的变异

本试验采用流式细胞仪,对3个基因型8个继代周期的苜蓿愈伤组织DNA含量进行测定。通过DPAC软件(data pool application of cytometre)分析出细胞DNA含量变异百分率和处于S期细胞的百分率,并采用SPSS 10.0软件分析出愈伤组织继代时间与DNA含量变异率之间的关系。结果表明,本试验所采用的3个基因型8个继代周期24个紫花苜蓿愈伤组织样本DNA含量均发生了变化,且全都出现了DNA加倍的现象。在24个样本中,DNA含量变异率最大的是自选系大叶0510的愈伤组织继代15周时的样本,变异率达到了19.45%。通过SPSS10.0软件分析,表明紫花苜蓿愈伤组织DNA含量变异细胞百分率与继代时间存在相关性,随着继代时间的延长,染色体变异率有增加的趋势,但这种趋势不是无限增大的。继代0～12周是愈伤组织DNA含量变异的集中发生期,以后随着继代次数的增加,DNA含量变异率趋向于稳定。

AgNO_3对橡胶树花药愈伤组织形态及体胚发生的影响

橡胶树的花药愈伤组织在长期继代过程中,胚性易下降甚至丧失;而AgNO_3作为乙烯活性抑制剂,被广泛应用于植物组织培养中。该研究以继代培养4 a以上的热研7-33-97花药愈伤组织为材料,在继代培养基中添加2.5 mg·L^(-1)AgNO_3预培养35 d后,观察预培养前后愈伤组织表形及其细胞形态的变化,并设计不同浓度AgNO_3及不同处理时间对其进行体胚诱导,90 d后分别统计胚状体总数和正常胚数。结果表明:浅黄色质地柔软的愈伤组织在含AgNO_3的培养基上预培养后能转变成鲜黄色易碎愈伤组织,在倒置显微镜下前者大多表现为不规则多边形,细胞内含物较稀薄;而后者则呈圆形或椭圆形,细胞内含物丰富,属于典型的胚性细胞。在体胚诱导的第1个月添加5 mg·L^(-1)AgNO_3能显著促进体胚的发生,AgNO_3浓度升至10 mg·L^(-1)时体胚发生受到抑制,且畸形胚的形成率显著增加;在含5 mg·L^(-1)AgNO_3的培养基中培养2个月以上,体胚发育明显受阻,大部分形成畸形胚。该研究结果在一定程度上恢复了橡胶树长期继代花药愈伤组织的胚性能力,并提高了其体胚发生频率,为橡胶树花药胚性愈伤组织长期继代培养过程中胚性的保持提供了参考。

油茶12个物种花药愈伤组织诱导及继代培养

选择12个油茶物种进行花药愈伤组织的诱导,以小果油茶、普通油茶、短柱油茶、浙江红花油茶、茶陵红花油茶、多齿红花油茶诱导率较高,在40％～70％之间,其中小果油茶、普通油茶的愈伤组织诱导率高达70％。红皮糙果油茶、广西糙果油茶、茶陵红花油茶、多齿红花油茶、攸县油茶花药褐化较严重。继代培养中6-BA和KT均有较好的促进作用,小果油茶、普通油茶、短柱油茶、浙江红花油茶、茶陵红花油茶、多齿红花油茶的愈伤组织均增殖较好。油茶花药培养应以小果油茶、普通油茶、短柱油茶、浙江红花油茶、茶陵红花油茶、多齿红花油茶作为进一步试验的基本材料,开展下一步的愈伤组织增殖和脱分化试验。

百日草根尖和花药愈伤组织染色体制片技术

以种子萌发根尖和花药愈伤组织为材料,研究了取样时间、预处理方法对百日草染色体制片的影响。结果表明:根尖上午8:00～9:00,花药愈伤继代3～5d上午9:00～10:00为最佳取样预处理时间;采用三种药剂预处理活体根尖,以4℃下饱和对二氯苯溶液或0.002mol/L的8-羟基喹啉液预处理8h效果最佳,花药愈伤则以饱和对二氯苯溶液预处理6h效果最佳。本实验的预处理温度是固定的,可克服预处理随季节和时间温度的变化而带来的不稳定性,且百日草花药愈伤染色体观察为首次报道。

用花药愈伤组织作为转化受体的水稻转基因植株的分析

以花药愈伤组织作为转化的受体材料 ,利用农杆菌介导法将已克隆的Xa2 1基因导入粳稻栽培品种台北30 9中。共获得 7个转基因株系 ,其中 2个单倍体 ,4个二倍体 ,1个混倍体。PCR、Southern、FISH以及白叶枯病抗性的分析结果都表明Xa2 1基因已整合到T0 代受体基因组。调查了 4个二倍体株系T1代的分离情况 ,经 χ2 测验证明 ,有 2个株系的分离比为 3∶1,为单拷贝插入 ,另外 2个株系不符合孟德尔分离。 4个T0

冬小麦花药愈伤组织无性系R_2的变异

从一株冬小麦H_1花粉试管苗基部,取未分化绿苗的胚性愈伤组织建立细胞无性系,从中获得4丛R_1结实株系,对其R_2进行田间观察,发现其中一株发生了变异,R_2的株系变异率为25.00%.该变异株系R_2的86个单株的变异情况统计结果显示,在3个主要农艺性状中,株高变异率最高,为67.44%,其次是千粒重,为50.00%,单株穗数居第三位,为47.67%.其它性状如种子蛋白质含量,粒色,粒形,穗形均发生变异,且幅度大,频率高,不仅株系内存在变异,穗系内也存在变异.在调查的性状中只有芒性未发生变异.

大麦籽粒及花药愈伤组织的游离氨基酸含量分析

对同一基因型大麦花药愈伤组织与籽粒中的游离氨基酸含量尤其是赖氨酸含量之间的关系进行分析,结果表明,对同一基因型而言,愈伤组织及籽粒中的同一氨基酸含量高低具有相同趋势。同时着重分析了愈伤组织中游离脯氨酸的含量与绿苗分化的关系,结果表明游离脯氨酸含量高的愈伤组织,其绿苗分化率较高,说明脯氨酸对绿苗分化具有重要作用。966259的花药愈伤组织及籽粒中的游离氨基酸总含量及游离赖氨酸含量均最高。

不同培养基条件对红景天花药愈伤组织生长量的影响

为进一步开发利用红景天资源,以红景天花药诱导的愈伤组织为材料,研究了不同培养基、不同种类和浓度的生长素和细胞分裂素对花药愈伤组织生长量的影响。结果表明:培养基MS和NB对花药愈伤组织生长量的影响无显著差异;低浓度的生长素对红景天花药愈伤组织生长量有利,2,4-D对愈伤组织生长的影响略高于NAA。高浓度的6-BA利于在景天花药愈伤组织生长,在含有相同浓度NAA的培养基中,6-BA比KT适合花药愈伤组织生长。