红肉猕猴桃品种‘红阳’果实中花青素体的细胞学特征

目前关于植物器官着色的生化代谢途径及其调控等已有深入了解,而关于色素积累的细胞学过程研究还十分缺乏。本研究以目前红肉猕猴桃主栽品种‘红阳’为试验材料,通过光学显微镜及透射电子显微镜观察了该红肉猕猴桃果实内果皮横剖面着色组织的解剖特征,并描述了花青素体的细胞学特征。结果表明,‘红阳’果实中色素体的形成及着色细胞分布存在组织特异性。首次在猕猴桃果实中观察到2种花青素体形态,一种是规则的圆形色素体,另一种是小颗粒色素体;本研究还观察到花青素色素体载体的形态特征及其解体与液泡化过程。‘红阳’猕猴桃开花后30 d时,果实内果皮的圆形色素体出现在维管束及其周围的小细胞里,开花后68 d,小颗粒色素体开始在大的薄壁细胞里出现;在花后117 d,维管束及其周围小细胞仍在形成大量色素体颗粒。通过电镜观察表明,在这个时期的内果皮薄壁细胞中可以观察到大量的色素体载体(AVI carriers),这些载体内存在多种不同形态的色素体,可能反映了薄壁细胞的着色过程。有的色素体仍呈现圆形,有的呈现新月形或者其它不规则形,总体上载体内的这些色素体变得越来越小且越来越不规则,最终导致色素体载体不同程度的液泡化。这些结果暗示了红肉猕猴桃果实色素体的形成部位、细胞学形态特征以及色素体的解体与花青素释放过程,表现了"移位释放"的特点。

莲房原花青素低聚体纳米脂质体的制备及其稳定性、抗氧化性分析

采用逆向蒸发法和超声处理相结合成功地制备莲房原花青素低聚体(lotus seedpod oligomeric procyanidins,LSOPC)纳米脂质体,优化制备工艺并考察其稳定性和抗氧化活性。结果表明,LSOPC纳米脂质体的最佳制备工艺参数为大豆卵磷脂-胆固醇质量比3∶1、LSOPC添加量0.33 mg/m L、吐温80添加量16.7 mg/m L。在此条件下,LSOPC纳米脂质体的平均粒径为(35.57±0.08)nm,多分散指数为0.153±0.01。当LSOPC载量为1%时,脂质体为最高包埋率(71.97±0.42)%。LSOPC纳米脂质体在透射电子显微镜观察下为球状的囊泡结构,在低温时比较稳定。低浓度的葡萄糖、蔗糖及防腐剂对LSOPC纳米脂质体的粒径无显著性影响,而金属离子Fe^(3+)、Cu^(2+)、Zn^(2+)、Pb^(2+)显著影响其粒径。在4℃贮藏7 d后,与脂质体相比,LSOPC溶液清除2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基和铁还原能力显著下降。总抗氧化能力测定结果说明,LSOPC纳米脂质体的总抗氧化能力优于LSOPC溶液。

原花青素二聚体的药理研究进展

原花青素二聚体是一种具有抗氧化、清除自由基、防治心血管疾病、抗癌、抗炎等多种药理功能的药用有效成分,具有广泛的开发价值。

莲房原花青素低聚体微乳液的稳定性及抗氧化活性分析

制备莲房原花青素低聚体(LSOPC)微乳液,通过测定微乳液粒径,研究温度、Na Cl、糖、金属离子等对LSOPC微乳液稳定性的影响。结果表明:LSOPC微乳液的粒径是(0.33±0.02)μm,在低温条件下比较稳定;低浓度Na Cl、含量低于9%的葡萄糖和蔗糖对LSOPC微乳液的稳定性无显著影响;一定浓度下,K+、Mg^(2+)、Cu^(2+)、Al^(3+)对LSOPC微乳液稳定性无显著影响,Ca^(2+)、Fe^(2+)、Zn^(2+)、Fe^(3+)则显著影响其稳定性,粒径会有不同程度的增大。抗氧化活性实验结果表明,LSOPC微乳液和LSOPC溶液清除DPPH自由基IC50值分别为(6.55±0.04)、(7.33±0.04)μg/m L,前者的还原力强于后者,表明LSOPC微乳化后其抗氧化性显著增强。

C18硅胶制备荔枝果皮原花青素低聚体的组成分析及单体分离

为更快速地从荔枝果皮中分离制备纯度更高的A-型原花青素低聚体,本研究在传统大孔树脂富集纯化的基础上,利用C18硅胶填料对制备方法进行了优化。通过组分分析和HPLC、LC-MS鉴定可知,新法制得的荔枝果皮原花青素低聚体(Litchi pericarp oligomeric procyanidins,LPOPC)总酚含量高达940±123 mg/g,且主要为(-)-表儿茶素、A-型原花青素二聚体和三聚体,相对含量分别占44.86%、36.02%和9.86%,平均聚合度约为1.62。因此,当再次通过Toyopearl HW-40s凝胶对提取物进行柱层析分级时,可得到纯度较高的已知A-型原花青素二聚体和三聚体。等辐射分析法(Isobologram)研究显示,该A-型二聚体和三聚体均可清除自由基,并呈现出协同抗氧化性。

原花青素二聚体B_2对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及炎症因子表达的影响

目的通过观察原花青素二聚体B2(procyanidins di-mer B2,PCB2)对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及相关炎症因子表达的影响,探讨其抗炎的分子机制。方法免疫荧光法观察NF-κB/p65在细胞中的定位,RT-PCR检测PCB2对诱导细胞的COX-2 mRNA表达,Western blot分析COX-2蛋白含量变化,ELISA测定各处理组细胞上清液中IL-1β、VEGF的含量变化。结果 TNF-α(10μg.L-1)诱导RSC-364细胞NF-κB从细胞质转运至细胞核,50μmol.L-1 PCB2明显抑制NF-κB/P65核转运;PCB2剂量依赖性抑制COX-2基因和蛋白的表达;PCB2下调了TNF-α诱导的IL-1β、VEGF的水平。结论 PCB2能有效抑制COX-2、IL-1β及VEGF的表达,其机制可能与抑制TNF-α诱导的NF-κB核转运,抑制NF-κB活化有关。

莲原花青素对含有不同饱和度脂肪酸的乳糖-赖氨酸体系中晚期糖基化终末产物的抑制作用

研究莲原花青素低聚体(lotus seedpod procyanidin oligomers,LSOPC)对含有不同饱和度脂肪酸的乳糖-赖氨酸模拟体系中晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)生成的抑制作用。选择α-乳糖、L-赖氨酸和油酸/亚油酸/亚麻酸建立3种热加工模拟体系,采用荧光分光光度法、电子鼻等技术,研究了在不同加热温度和时间、不同质量浓度LSOPC、不同脂肪酸等因素的作用下LSOPC对模拟体系中生成AGEs抑制作用的影响。加热温度和时间是LSOPC抑制AGEs生成的重要因素。在各模拟体系中,LSOPC对AGEs的抑制率均随LSOPC质量浓度增加而增加,且低温加热模式下的抑制率和抑制速率比高温加热模式下大。通过电子鼻技术的指纹图谱分析,发现低温(100℃)时,添加LSOPC后3种模拟体系生成的气味物质之间无明显差异,高温(180℃)时,则有显著差异。LSOPC对含有不同饱和度脂肪酸的乳糖-赖氨酸模拟体系中AGEs的生成有一定的抑制作用,具有剂量依赖关系,且与加热温度和时间以及脂肪酸种类相关。

蔷薇红景天低聚体原花青素的稳定性和抗衰老研究

本文主要考察光、p H、温度和金属离子等对蔷薇红景天低聚体原花青素稳定性的影响以及其对果蝇的抗衰老作用。稳定性研究结果表明,光照、Fe3+、Sn2+、Al3+等条件可降低原花青素稳定性,低p H、低温以及K+、Mg2+、Na+和Cu2+条件下原花青素较稳定。果蝇抗衰老研究结果显示,低(0.04%)、中(0.12%)、高剂量(0.36%)原花青素对果蝇平均寿命和最高寿命均有不同程度的延长作用,其中中剂量(0.12%)能显著延长果蝇寿命,最高寿命和平均寿命分别可达72 d和55 d;中(0.12%)、高剂量(0.36%)组果蝇SOD活性均显著提高(p<0.05),且中(0.12%)、高(0.36%)剂量MDA含量均显著下降(p<0.05)。研究为蔷薇红景天低聚体原花青素的深入研究和开发利用提供了科学依据。

SO_4^(2-)/TiO_2固体酸降解莲房中高聚体原花青素研究

高聚体原花青素的抗氧化性能明显不如低聚体,而且不易被人体吸收利用.该研究致力于制备性能优良的SO_4^(2-)/TiO_2固体酸催化剂,采用该固体酸降解莲房中提取的高聚体原花青素.用紫外分光光度计和凝胶色谱仪进行分析,以平均聚合度和降解率作为参考指标,对该反应的降解效果进行评价.研究结果表明,以10 mL高聚体原花青素溶液作为降解原料,固体酸加入量为0.05 g,反应温度为70℃,反应时间为60 min的反应条件下,高聚体的平均聚合度从5.95降为2.31,降解率可以达到61.18%.

硬脂酰氯改性莲原花青素低聚体的稳定性与抗氧化作用研究

研究了硬脂酰氯改性莲原花青素低聚体在酸、碱、氧化剂、还原剂和食品中常见的阴、阳离子等不同环境体系中的稳定性,以及莲原花青素低聚体改性物在油脂储藏与肉类保鲜中的潜在作用。结果表明:莲原花青素低聚体改性物在弱酸及在少量还原剂存在条件下可基本保持稳定,而在强酸、碱性、氧化剂环境中结构容易被破坏;同时莲原花青素低聚体改性物能在多数阴、阳离子中保持结构稳定,但在Fe^2+、Fe^3+、Al^3+等水解性阳离子和CO3^2-、HCO3^-等酸根离子中极易发生变化。另外,莲原花青素低聚体改性物在菜籽油及冷却猪肉的保鲜中展示出比莲原花青素低聚体更优良的效果,表明经过硬脂酰氯改性,莲原花青素低聚体的抗油脂体系氧化能力得到有效提高。

低聚体原花青素对实验性SAH大鼠早期脑损伤的保护作用研究

目的探讨低聚体原花青素(OPC)对实验性蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤的影响。方法 160只大鼠随机分为假手术对照组、SAH+生理盐水(NS)组,以及SAH+低剂量(50μg/kg)、中剂量(100μg/kg)、高剂量(200μg/kg)OPC组。采用视交叉池注血法建立SAH大鼠模型,分别给予不同剂量OPC或NS侧脑室注射治疗。术后24 h,检测各组大鼠的神经功能评分、脑含水量(干湿重法)、凋亡蛋白表达(Western blot)、细胞凋亡和炎症因子水平。结果与对照组比较,SAH大鼠脑组织含水量、活性氧(ROS)水平及颞叶皮层细胞凋亡蛋白表达水平、细胞凋亡数和炎症因子水平均明显增加。而经OPC治疗大鼠的这些指标水平均有明显降低,以及早期脑损伤症状有所缓解。结论 OPC可以减轻SAH后的早期脑损伤,可能与其抗氧化、抗炎和抗凋亡作用有关。

莲原花青素低聚体对菜籽油抗氧化性的影响

以莲原花青素低聚体(lotus oligomeric proantho cyanidins,LSOPC)为添加物,研究其在菜籽油中的抗氧化作用。结果表明:0.02%的原花青素低聚体在油脂中的抗氧化性相当于0.02%的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(butylated hydroxytoluene,BHT),其含量增至0.10%时,在油脂中的抗氧化性仍明显小于0.02%叔丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone,TBHQ);油脂在氧化过程中,酸价从0.99升至1.19;类胡萝卜素含量(β-胡萝卜素当量)从48.4μg/g降至0.99μg/g;油脂的白度由24.50升至26.82;油酸、亚油酸和亚麻酸含量的变化最为明显,分别从50.78×104、15.60×104、5.71×104 mg/kg降至44.54×104、13.39×104、4.49×104 mg/kg。

硬脂酰氯改性对莲原花青素低聚体在油脂体系中抗氧化性质的影响

莲原花青素低聚体具有良好的抗氧化活性,因其富含酚羟基亲水性较高而限制了在油脂体系中的添加应用。为提高莲原花青素低聚体的抗油脂氧化性能,本研究利用硬脂酰氯对其改性,重点研究了反应物配比、催化剂用量和反应温度对反应的影响以及工艺条件的优化,同时探讨了其抗油脂氧化特性并对其分子结构初步表征。结果表明,改性最佳工艺条件为莲原花青素低聚体、硬脂酰氯、催化剂质量比为1∶2∶1.5(w∶w∶w),反应温度40℃,添加改性物的菜籽油经100℃高温氧化24 h后的POV为6.04 meq/kg,比添加未改性莲原花青素低聚体的对照组降低了31.6%。改性物红外图谱显示有亚甲基、脂肪长链和酯基基团特征吸收峰,可以说明莲原花青素低聚体与硬脂酰氯发生酯化交联,脂溶性得到改善从而使其在油脂中的抗氧化性能得到提高。

低聚体葡萄籽原花青素对顺铂损伤HEK293细胞及抗癌活性的影响

目的:探讨低聚体葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins extract,GSPE)及其结构单元儿茶素(catechin,C)对顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum(II),DDP)损伤HEK293人胚肾细胞的保护作用以及对DDP抗A549人肺腺癌细胞活性的影响。方法:体外培养HEK293细胞和A549细胞,以DDP建立损伤模型,分别用不同质量浓度的低聚体GSPE和儿茶素对细胞进行预处理,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞抑制率和存活率。结果:当低聚体GSPE质量浓度为16 mg/L时,对DDP诱导的HEK293细胞损伤的保护作用最佳,与DDP损伤组相比有显著差异(P<0.05),并且在达到此质量浓度时可显著增强DDP对A549细胞的损伤效果(P<0.05)。相同条件下儿茶素对DDP诱导的HEK293细胞损伤无显著影响(P>0.05)。结论:体外培养条件下,一定质量浓度的低聚体GSPE对DDP诱导的HEK293细胞损伤具有一定的保护作用,同时能增强DDP对A549细胞的杀伤作用。儿茶素对DDP诱导HEK293细胞损伤的保护作用不明显。

含低聚体原花青素的敷料对CO_(2)点阵激光术后面部皮肤修复作用

目的原花青素具有抗氧化、清除自由基、抗炎及抑菌作用。文中观察含低聚体原花青素的敷料对CO_(2)点阵激光治疗面部皮肤的修复作用和安全性。方法纳入2019年1月至2020年12月于明光市人民医院皮肤科收治的痤疮凹陷性瘢痕患者62例,随机均分为试验组和对照组。2组患者均行CO_(2)点阵激光治疗后,试验组患者外敷含低聚体原花青素的敷料,对照组外敷含透明质酸的敷料。2组均为每次20 min,2次/d,持续1周;1周后1次/d,共2周。观察2组患者治疗后24 h红斑、水肿及灼热等急性炎症反应程度,记录痂皮脱落时间。分别于治疗后24 h和7 d检测并比较2组患者角质层含水量和经表皮水分丢失(TEWL),并采用痤疮瘢痕权重(ECCA)评分评估瘢痕程度。结果试验组急性炎症反应评分优于对照组(P<0.05)。2组患者痂皮脱落时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗24 h后,试验组的角质层含水量低于对照组(P<0.05);试验组与对照组间TEWL及ECCA评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论CO_(2)点阵激光治疗面部痤疮凹陷性瘢痕后使用含低聚体原花青素的敷料,能够有效减轻炎症反应,是较为理想的皮肤强脉冲光术后辅助治疗方法。

葡萄籽原花青素低聚体治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的机制研究

目的探讨葡萄籽原花青素低聚体(GPC)对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的作用机制,为多发性硬化症的药物开发提供药效学依据。方法通过文献检索,收集具有神经保护作用的GPC成分。使用PharmMapper和STITCH数据库预测药物靶点,Uniprot数据库标准化靶基因,人类基因数据库(GeneCards)和人类孟德尔遗传数据库(OMIM)预测多发性硬化症相关基因。从药物与疾病之间的交叉靶点获得GPC治疗多发性硬化症的靶点。利用STRING 11.0数据库和Cytoscape 3.6.1软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。利用DAVID数据库对潜在靶点进行基因本体(GO)功能富集和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,筛选出重要的生物学过程和通路。采用EAE小鼠模型研究GPC的治疗机制。结果共获得42个靶点与GPC治疗多发性硬化症相关。KEGG富集分析涉及32条通路。药理实验表明,GPC改善EAE小鼠的临床症状,抑制了中枢神经系统炎症细胞浸润,减少髓鞘脱失。GPC可抑制中枢神经系统氧化应激指标和炎性因子表达,降低蛋白激酶B(Akt)、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)的磷酸化表达。结论GPC对EAE小鼠的治疗作用与抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路有关,为GPC的临床应用提供理论依据。

莲原花青素低聚体在模拟生理环境下对非酶糖化末端产物的抑制作用

为探究莲原花青素低聚体(oligomeric procyanidins of lotus seedpod,LSOPC)在模拟生理环境下对非酶糖化末端产物(advanced glycation end products,AGEs)的抑制作用,测定金属离子、高糖和高蛋白质量浓度条件下LSOPC对体外AGEs的抑制率,以及固定比例法评价LSOPC与表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)复配物对体外AGEs生成的抑制作用。结果表明:在模拟生理环境下,AGEs体外孵育最适反应时间为35 d,LSOPC的抑制效果达到最大值。不同质量浓度的金属离子(Cu^(2+)、Fe^(2+)、Zn^(2+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)、Al^(3+)、Sn^(2+))对体外AGEs生成的影响各不相同,其中Cu^(2+)和Fe^(2+)在模拟体系中AGEs生成的促进作用最强,但和LSOPC一起有协同抑制作用;其他5种金属离子对AGEs生成都有不同程度的抑制或促进作用,但对LSOPC对AGEs的抑制作用几乎无影响。在高糖高蛋白反应体系中,发现LSOPC在高糖、高蛋白以及单独高蛋白情况下,抑制效果最差。LSOPC与EGCG复配有协同抑制AGEs效果,并且在LSOPC与EGCG质量浓度比为2∶1时最佳。

葡萄籽提取物F2对人恶性胶质瘤U-87细胞的抑制增殖作用及对其甲酰肽受体(FPR)功能的影响

目的探讨葡萄籽提取物F2对人恶性胶质瘤细胞U-87增殖的影响及对其甲酰肽受体(FPR)功能的影响。方法采用MTT法检测F2对U-87细胞成活率的影响。光镜及AO/EB染色观察细胞形态学变化。流式细胞术考察F2对U-87细胞周期及线粒体膜电位的影响。趋化实验方法考察F2对fMLF诱导的U-87细胞趋化的影响。采用Fura-2双波长测定法考察F2对fMLF诱导的U-87细胞钙动员的影响,用westernblot方法考察F2对fMLF诱导的U-87细胞ERK1/2磷酸化的影响,并用激光共聚焦方法考察F2对U-87细胞FPR表达的影响。结果F2能显著抑制U-87细胞的增殖,其作用呈明显的时间和浓度依赖性,药物作用24h、48h、72h的IC50分别为75μg·mL-1、33.6μg·mL-1、25μg.mL-1。光镜及AO/EB观察F2作用48h能使U-87细胞形态发生明显改变,包括细胞变圆,胞浆内出现许多大大小小的空泡。F2能显著降低U-87细胞线粒体膜电位,诱导U-87细胞G2/M期阻滞并能诱导有典型paraptosis形态特征的细胞死亡。非细胞毒浓度的F2还能显著抑制FPR激动剂fMLF(10nM)诱导的U-87细胞趋化,且能显著抑制fMLF诱导的U-87细胞钙动员及ERK1/2磷酸化。而且F2还能显著降低在胶质瘤的增殖、迁移及血管生成中起重要作用的FPR的表达。结论F2不仅能显著抑制U-87细胞的增殖,还能通过抑制FPR激动剂fMLF诱导的U-87细胞的趋化而抑制肿瘤细胞迁移,能抑制其FPR的表达,是一种很有开发潜力的新型抗胶质瘤药物。

莲房原花青素对AGEs诱导的小鼠肠道组织损伤和微生物紊乱的改善作用

研究莲房原花青素低聚体(LSOPC)对膳食晚期糖化终末产物(AGEs)诱导的小鼠肠道组织损伤和微生物紊乱的改善作用。选用健康的雄性小鼠为动物模型,分为4组,分别饲喂高AGEs AIN-93G饲料,高AGEs AIN-93G中分别添加质量分数为0.2%和0.5%LSOPC的饲料以及正常AIN-93G饲料(对照组),饲喂12周,分析AGEs对小鼠的体质量、进食及进水量、脏器指数、肠道组织损伤、结肠紧密连接蛋白和寡肽转运蛋白的表达、结肠内炎症因子及肠道菌群的影响以及LSOPC的改善作用。实验结果表明,0.2%LSOPC和0.5%LSOPC均对高AGEs诱导的小鼠组织损伤有明显的改善作用,同时也增加了结肠内紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达量,减少寡肽转运蛋白Pept1的表达量,结肠内的炎症因子TNF-α、IL-6及黏附因子VCAM-1、ICAM-1的表达量,小鼠肠道环境和肠道微生物紊乱也得到较为明显的改善,且与添加LSOPC呈剂量依赖关系。结论:LSOPC能够减轻膳食AGEs引起的小鼠肠道组织损伤和肠道微生物紊乱,具有发展为基础膳食营养补充剂的潜力。