花鳗鲡与锦鲤池塘混养试验及水质指标检测

花鳗鲡(Anguilla marmorata)隶属鳗鲡目,鳗鲡科,鳗鲡属,为降河洄游性鱼类,是我国分布的两种鳗鲡之一。花鳗鲡营养丰富,含有多种人体必需氨基酸,是珍贵的食用鱼类之一,有极高的经济价值。近年来日本鳗鲡和欧洲鳗鲡种苗短缺,花鳗鲡在福建、广东、海南、广西等地逐渐成为新的养殖品种。国内学者在花鳗鲡的基础生物学、形态学、营养价值等方面开展了研究。本试验通过花鳗鲡与锦鲤混养,研究混养模式下的养殖效果及水质指标变化,为花鳗鲡养殖提供新的养殖模式。

不同规格花鳗鲡肌肉营养成分比较分析

研究旨在比较3种规格花鳗鲡肌肉常规营养成分、氨基酸含量和脂肪酸组成的差异情况。实验选用投喂相同饲料而不同规格的24尾花鳗鲡,分为10P组(体重约100 g/尾)、4P组(体重约250 g/尾)、2.5P组(体重约400 g/尾),进行肌肉基本营养成分、氨基酸含量和脂肪酸组成测定和分析,每个组8重复。结果表明:2.5P组的粗蛋白含量最高;10P组粗脂肪含量最高;氨基酸总量高低依次为4P组(64.99%)>2.5P组(62.52%)>10P组(60.84%),4P组必需氨基酸总量、非必需氨基酸总量和鲜味氨基酸总量均最高;花鳗鲡肌肉多不饱和脂肪酸中的二十碳五烯酸与二十二碳六烯酸之和所占比例由高到低分别为4P组(10.64%)>2.5P组(9.80%)>10P组(9.06%)。结果表明,3种规格花鳗鲡肌肉营养价值存在一定差异,4P花鳗鲡肌肉营养价值总体上最高。

花鳗鲡鱼体肌肉的氨基酸分析研究

为了探讨不同体重花鳗鲡鱼体肌肉氨基酸的营养功效,指导消费者合理消费。本研究比较了不同体重(A组:360～420g;B组:250～300g;C组:200～250g)花鳗鲡肌肉蛋白质的氨基酸组成,并分析了其必需氨基酸、呈味氨基酸、药效氨基酸含量。结果表明:花鳗鲡肌肉含有18种氨基酸,氨基酸总量分别达14.40%、18.30%、18.16%,谷氨酸含量最高。不同组别花鳗鲡的8种人体必需氨基酸含量高低顺序一致,占氨基酸总量的比例分别41.60%、41.63%、41.63%,呈味氨基酸的分布依次为甜味类氨基酸含量(A组:6.91%;B组:8.73%;C组:9.37%)、苦味类氨基酸含量(A组:5.46%;B组:6.96%;C组:6.94%)、酸味类氨基酸含量(A组:3.71%;B组:4.87%;C组:4.87%)、鲜味类氨基酸含量(A组:3.22%;B组:4.22%;C组:4.19%),药效氨基酸的分布依次为C组:12.56%、B组:11.93%、A组:9.33%。根据分析结果,本研究认为花鳗鲡鱼体肌肉蛋白是一种药食两用、氨基酸全面、肉质鲜美的优质蛋白,建议如以常规滋补兼顾口味为目的,以250～300g的体重为宜;如以药用为目的,则选用200～250g较好。

盐度对花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡幼鳗生长性能及消化酶活力的影响

文章研究了不同盐度对花鳗鲡(Anguilla marmorata)幼鳗和太平洋双色鳗鲡(A.bicolor pacifica)幼鳗生长性能及消化酶活力的影响。将花鳗鲡幼鳗[(9.76±0.36)g]和太平洋双色鳗鲡幼鳗[(11.82±0.04)g]分别在淡水(盐度0‰)与盐度5‰、10‰、18‰水体中养殖30d,测量每组实验鱼总重后检测胃、肠道和肝脏蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活力。结果表明,花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡在各盐度处理中存活率均为100%,未出现死亡。两种鳗鲡在淡水中生长良好,特定生长率最高,而饵料系数最低。盐度对花鳗鲡幼鳗和太平洋双色鳗鲡幼鳗消化酶活力的影响存在差异,其中花鳗鲡胃、肠道和肝脏蛋白酶活力在各盐度处理中均无显著变化(P>0.05),淀粉酶和脂肪酶活力均随盐度的增加而下降;太平洋双色鳗鲡胃蛋白酶活力在盐度10‰时最大,肝蛋白酶活力在盐度18‰时最大,而淀粉酶和脂肪酶活力在各盐度处理组无显著变化(P>0.05)。这表明盐度对花鳗鲡胃、肠道和肝脏的淀粉酶和脂肪酶活力具有抑制作用,对太平洋双色鳗鲡的蛋白酶活力有一定的激活作用。在相同盐度条件下,不同消化器官中同种消化酶活力存在差异,各盐度的两种鳗鲡肠道中淀粉酶和脂肪酶的活力均显著高于肝脏和胃(P<0.05),胃中蛋白酶活力高于肝脏和肠道,但不显著(P>0.05)。研究发现两种鳗鲡体内脂肪酶活力相对较高,表明其对脂肪具有较强的消化能力。建议在配制花鳗鲡幼鳗和太平洋双色鳗鲡幼鳗饲料时,适当提高粗脂肪比例,有助于促进对营养物质的消化吸收,提高养殖效益。

花鳗鲡病原菌弗氏柠檬酸杆菌的鉴定

首次报道了从养殖花鳗鲡(Anguilla marmorata)肝脏中分离得到优势菌株AMRB6,经人工腹腔注射感染健康花鳗鲡试验,结果证实该菌有致病作用,其半数致死量LD50为3.2×107CFU/mL.结合菌体形态特征、常规生理生化鉴定和Biolog自动微生物鉴定系统鉴定,以及16S rRNA序列扩增结果,表明该菌为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii).30种药物药敏试验结果表明,该菌株对左氧氟沙星、诺氟沙星、庆大霉素、卡那霉素等14种药物高度敏感.

人工诱导花鳗鲡的精巢发育成熟及其精子的生物学特性

用肌肉注射HCG的处理方式（剂量为500U／kg体重，每周注射1次，注射时间为6周）诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟，成熟率达80．0％。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明：花鳗鲡精子头部长径为（3．81±0．69）μm，短径为（1．24±0．15）μm；尾部长度为（24．83±3．05）μm；精液pH为7．3～7．5，精子密度每毫升1．02×10^10尾。精子的适宜盐度为15～20，其中盐度为15时，精子激活比率最高，快速运动时间以及精子的寿命最长。精子的pH适宜范围为6．0～8．0，pH值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外，4种金属离子（Mg^2＋、Ca^2＋、Na^＋和K^＋）对花鳗鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致，金属离子浓度过高或过低都会抑制精子的活力、缩短快速运动时间和寿命。而MgCl2、CaCl2、KCl、NaCl溶液浓度为0．4～0．6g／mL时，精子活力最好，最高激活比率为3级（41．0％～60．0％）。

人工诱导花鳗鲡卵巢发育成熟及相关激素和组织的作用

采用多次肌肉注射黄体生成素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH-A2)和鲤脑垂体匀浆(carp pituitary extract,CPE)的方法诱导花鳗鲡卵巢发育成熟。在任意挑选的15尾实验组鱼中,5尾卵巢发育完全成熟,平均性腺系数(gonadosomatic index,GSI)为(20.9±5.04)%(最大达到27.3%);5尾卵巢发育至成熟期,平均GSI为(7.2±2.86)%;5尾卵巢发育至卵黄生成期,平均GSI为(2.32±1.5)%;而对照组的性腺停留在未发育的Ⅱ期[GSI为(1.18±0.39)%],这表明注射的激素能诱导雌性花鳗鲡性腺发育直到完全成熟。检测卵巢发育过程中脑垂体GtH的mRNA水平,血清中类固醇激素水平以及肝脏和消化道组织学变化。结果表明,脑垂体中GtHα、LHβ和FSHβ的mRNA水平随着卵巢的发育而逐渐增加,在卵巢发育成熟后下降,其中GtHα和LHβ的含量在卵巢发育成熟时虽比发育时期略有下降,但仍然呈现高表达量,而FSHβ在卵巢发育成熟时的表达量极低,几乎检测不到。血清雌二醇的含量在卵巢开始发育和卵黄生成期时的含量较高,随着卵巢的发育成熟而下降;睾酮的含量在卵巢发育成熟过程中有所增加,在卵巢发育成熟时明显升高。肝糖原过碘酸希夫反应染色(periodic acid shiff,PAS)染色结果显示随着卵巢的发育成熟,肝细胞中糖原颗粒逐渐减少,脂肪含量有所增加,肝糖原参与卵巢生成过程中的物质与能量代谢活动。胃壁和肠壁的组织学显示,随着卵巢发育成熟而出现不同程度的退化。

菲律宾花鳗鲡种类鉴别与形态差异分析

根据脊椎骨数及量度性状,用形态学分析方法鉴别了菲律宾花鳗鲡鳗苗的种类,并应用方差、主成分和判别等分析方法比较研究了引进鳗苗种类间形态差异。结果表明,引进的菲律宾花鳗鲡鳗苗实为2种鳗鲡,即花鳗鲡和太平洋双色鳗。其中花鳗鲡数量绝多,个体较小;太平洋双色鳗数量少,但个体显著大于花鳗鲡。花鳗鲡总脊椎骨数、臀鳍起点前和起点后脊椎骨数均显著小于太平洋双色鳗。花鳗鲡与太平洋双色鳗的多个形态性状差异显著,包括体型、头部、口裂及鳍,散布全身。建议在鳗苗培育后期分级选别时,可根据花鳗鲡与太平洋双色鳗体型的差异和鳍型不同将其分开。花鳗鲡体型较小,背鳍前端和臀鳍前端距离较远;太平洋双色鳗体型较大,背鳍前端和臀鳍前端几乎平齐。

花鳗鲡工厂化循环水高密度养殖模式初探

根据花鳗鲡（Anguillamarmorata）生理生态特点构建循环水养殖系统。系统集成了臭氧消毒杀菌、机械过滤、生物过滤、液氧增氧等关键技术。试验研究循环水养殖系统中花鳗鲡的生长情况，对试验期间各项水质指标动态变化进行了监测。结果表明：各项水质指标均保持在花鳗鲡生长适宜范围内；平均规格29．97g的花鳗鲡经过260d养殖，平均体重达到716．20g，成活率达到86．5％，收获时鱼产量为82．6kg／m3，饵料系数维持在1．25左右，养殖周期较传统养殖模式缩短4—5个月，日换水率约为3％。利用封闭式循环水养殖模式进行花鳗鲡养殖切实可行。

花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRH基因克隆与表达分析

以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43—3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库为模板,克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素(mGnRH和cGnRH-II)cDNA序列。序列分析表明,花鳗鲡mGnRHcDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基,编码91个氨基酸,其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—22位氨基酸)、mGnRH十肽(23—32位氨基酸)、一个三肽裂解位点(33—35位氨基酸)和56个氨基酸的GnRH相关肽(36—91位氨基酸);花鳗鲡cGnRH-IIcDNA开放阅读框包含264个碱基,编码87个氨基酸,其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—24位氨基酸)、cGnRH-II十肽(25—34位氨基酸)、一个三肽裂解位点(34—36位氨基酸)和50个氨基酸的GnRH相关肽(37—87位氨基酸)。序列同源性分析表明,花鳗鲡mGnRH、cGnRH-IIcDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%;与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%—78%;而与鲤形目鱼类的相似性相对较低(63%—67%)。采用RT-PCR方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达,结果表明两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异;但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-II的。

吡喹酮、甲苯咪唑、溴氰菊酯对花鳗鲡的急性毒性

采用静水式急性毒性试验法研究了吡喹酮、甲苯咪唑和溴氰菊酯对花鳗鲡(Anguilla marmorata)(体重为0.87±0.19 g)的急性毒性。试验结果表明,在水温28±2℃时,吡喹酮对花鳗鲡的24 h LC50、48 h LC50、72 h LC50、96 h LC50分别为73.85 mg/L、66.71 mg/L、56.57 mg/L、52.72 mg/L,安全浓度为16.34 mg/L;甲苯咪唑对花鳗鲡的24 h LC50、48 h LC50、72 h LC50、96 h LC50分别为142.81mg/L、13.80 mg/L、5.19mg/L、1.74mg/L,安全浓度为0.023 mg/L;溴氰菊酯对花鳗鲡的24 h LC50、48 h LC50、72 h LC50、96 h LC50分别为9.56μg/L、9.34μg/L、7.69μg/L、7.67μg/L,安全浓度为2.68μg/L。吡喹酮、甲苯咪唑、溴氰菊酯对花鳗鲡分别属于低毒、中毒、剧毒药物。甲苯咪唑对花鳗鲡的安全浓度0.023 mg/L远低于欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)的常用浓度1～2 mg/L,因此在花鳗鲡养殖中使用甲苯咪唑制剂需十分谨慎。

花鳗鲡的核型研究

采用胸腔活体注射PHA及秋水仙素溶液,取头肾细胞,低渗处理,空气干燥法制片,对染色体进行Giemsa染色来研究花鳗鲡的核型。结果表明,花鳗鲡核型为2n=38,8m+2sm+9t,NF=58。

花鳗鲡的基础生物学研究

采用摄影技术和直接测量等方法对花鳗鲡的基础生物学进行研究。花鳗鲡的形态测定、内脏解剖、耗氧率及肌肉生化成分分析结果为:D-A/D-头后缘=1.465±0.028,为发育中的稳定形态比例性状,W=1.76×10-3L3.11;肠近中部有一个“V”型小弯曲;生殖腺出现时间明显晚于日本鳗鲡和欧洲鳗鲡;昼夜平均耗氧率为73.49 mg/kg.h;蛋白质、脂肪、水分含量百分比为11.44、5.08、77.94,氨基酸有18种,脂质以甘油三脂为主,无机元素、EPA和DHA含量高,DHA>EPA,营养价值优于日本鳗鲡和欧洲鳗鲡。

盐度对花鳗鲡(Anguilla marmorata)和太平洋双色鳗鲡(A. bicolor pacifica)幼鳗鳃丝及肾脏Na^+/K^+-ATP酶活力的影响

采用酶学分析的方法,以淡水组为对照,进行了盐度变化对花鳗鲡(Anguilla marmorata)[体质量(10.70±0.92)g]和太平洋双色鳗鲡(A. bicolor pacifica)幼鳗[体质量(12.11±0.79)g]鳃丝及肾脏Na+/K+-ATP酶活力影响的研究。结果表明,经不同的盐度(5、10、18)处理,各处理组的花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡幼鳗鳃丝Na+/K+-ATP酶活力均呈现先降低后升高最后再降低并趋于稳定的趋势。前者24h时达到最低值,48h时盐度10处理组上升至与对照组无显著差异(P>0.05),而盐度18处理组显著高于对照组(P<0.05)。后者6h时达到最低值,12h时盐度5和18处理组达到最高值,24h时盐度10处理组达到最高值。盐度变化对花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡幼鳗肾脏Na+/K+-ATP酶活力影响不明显。太平洋双色鳗鲡幼鳗鳃丝Na+/K+-ATP酶酶活提升速度及提升幅度均强于花鳗鲡幼鳗,故认为在盐度范围0—18时,太平洋双色鳗鲡幼鳗比花鳗鲡幼鳗对盐度变化具有更强的适应能力。

海南产花鳗鲡细胞色素b基因的克隆及序列分析

线粒体细胞色素b基因是目前研究鱼类分子系统进化的重要分子标记.笔者以日本鳗鲡线粒体基因组序列为模板设计并合成引物进行PCR扩增,并将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和纯化后,克隆到pMD18-T载体、测序,成功得到全长为1 140 bp的海南产花鳗鲡细胞色素b(Cyt b)基因序列.将该基因全长序列递交到Genebank数据库,获得序列登录号为EF690363.用DNA分析软件MEGA2比较了海南产花鳗鲡与递交到GenBank中的8种分布在中国东南沿海、日本海域及南太平洋海域的鳗鲡属(Anguillia)细胞色素b基因的地理差异,并构建了系统进化树.结果显示:日本产和夏威夷产花鳗的地理差异小于海南产花鳗与它们之间的地理差异.

激素诱导花鳗鲡精巢发育成熟期间性激素水平及相关细胞的超显微结构

通过注射人类绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟,每7d注射一次(剂量为500U.(体重)kg-1),共注射6次。检测此期间血清中促性腺激素(GtH)和性类固醇激素(T、11-KT、E2)的水平,以及相关细胞超显微结构的变化。结果表明,对照组雄性花鳗鲡性腺发育处于Ⅰ―Ⅱ期,GS(IGonadosome Index)为0.17±0.06%,血清中GtH、T、11-KT水平较低,并且T浓度低于0.1ng(试剂盒测定范围为0.1―20ng.mL-1);注射第3次后,实验组鱼性腺发育处于Ⅲ期,GSI为7.0±0.03%,血清中GtH、T、11-KT的水平均明显上升;排精后的实验组鱼GSI为9.57±2.1%,GtH、T、11-KT的水平比注射第3次的实验组鱼有所下降,但仍然高于对照组;在整个催熟过程中,血清中E2水平持续降低,从对照组的2.36ng.mL-1下降到排精后的0.83ng.mL-1。超显微结构的观察证明,与对照组相比排精后的实验组鱼脑垂体中GtH细胞的小颗粒减少,内质网池扩大,出现分泌并释放促性腺激素后留下的空泡。对照组鱼肝细胞富含糖原,几乎没有脂肪泡的存在,细胞核位于细胞中间,排精后的实验组鱼肝细胞脂肪泡增多变大,脂肪泡的形成导致细胞核偏位。

封闭循环流水养殖的花鳗鲡脂肪酸特征分析

为探寻封闭循环流水养殖模式下养殖的较大型（≥2 kg）花鳗鲡（Anguilla marmorata）各可食部的脂肪酸特征,利用索氏抽提法获得各部位的粗脂肪,以37种脂肪酸甲酯混标标准品为标准,气相色谱外标法检测脂肪酸的组成。检测结果显示,鱼皮中粗脂肪含量最高为26.96%,鱼肉的粗脂肪含量为10.36%;不同可食部的脂肪酸组成基本相似,饱和脂肪酸9种,单不饱和脂肪酸6种,多不饱和脂肪酸8种,饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸间的比例大约都为1∶3∶1,三大类脂肪酸中含量最高的分别为软脂酸C16∶0、油酸C18∶1n9c和二十二碳六烯酸C22∶6n3,油酸在不同可食部中均超过20 g/100 g总脂,C22∶6n3（DHA）在不同可食部中含量在4.42~5.59 g/100 g总脂之间。研究表明,较大型花鳗鲡是人体所需脂肪酸的良好食物来源。

花鳗鲡成鱼肌肉脂肪酸组成分析

为给花鳗鲡肉质营养评价及饲料研制提供基础数据和理论分析依据,对花鳗鲡肌肉粗营养成分与脂肪酸组成进行了测定。测定结果:花鳗鲡肌肉的水分含量为68.79%,蛋白质含量为17.58%,脂肪含量为10.86%,其中C14∶0、C15∶0、C16∶0、C18∶0,C16∶0等饱和脂肪酸(SFA)的相对含量为27.6%,C16∶1、C18∶1、C20∶1、C18∶1等单不饱和脂肪酸(MUFA)的相对含量为47.04%,C16∶3n-3、C18∶3n-3、C20∶5n-3、C22∶6n-3等n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFA)的相对含量为9.4%,C18∶2n-6、C20∶4n-6、C18∶2n-6等n-6多不饱和脂肪酸(n-6PUFA)的相对含量为6.66%,多不饱和脂肪酸中DHA的相对含量为2.29%,EPA的相对含量为5.30%。分析结果显示,花鳗鲡肌肉中蛋白质和多不饱和脂肪酸含量非常高,属于优质的蛋白和脂肪源。

高温对不同规格花鳗鲡存活、摄食和生长的影响

在室内循环水养殖系统中设置28℃、30℃和32℃三个高温处理组，研究高温对2种规格（规格Ⅰ：7.58～7.90 g／尾和规格Ⅱ：25.45～27.41g／尾）花鳗鲡（Anguilla marmorata）存活、摄食和生长的影响，实验周期30 d。结果显示：（1）水温28～32℃时，2种规格花鳗鲡存活率均高于95％；（2）高温对规格Ⅰ的实验鱼饲料转化率、摄食率以及生长性能影响不显著，对规格Ⅱ的实验鱼摄食率影响不显著，对饲料转化率、生长性能影响显著，且均与温度呈负相关的关系；（3）规格大小对花鳗鲡的饲料转化率和摄食率有显著影响，饲料转化率随规格的增大而升高，摄食率随规格的增大而下降。结果表明高温对小规格花鳗鲡幼鳗的摄食和生长影响不明显，对大规格幼鳗的摄食和生长有显著的抑制作用。

五种中草药复方体外激活花鳗鲡(Anguilla marmorata)外周血白细胞活性的评价

作为典型的降河洄游鱼类,花鳗鲡(Anguilla marmorata)在我国主要分布于长江下游及以南水域。中草药作为抗生素等化学类渔药的绿色替代品,对养殖鱼类具有抗菌、消炎、促生长等多种功效。为研究中草药复方在花鳗鲡病害防治中的作用,扩大水产养殖业渔药研制与应用的选择,采用非连续性密度梯度离心法对花鳗鲡外周血白细胞的分离体系进行了优化,试验设置了密度分别为1.031、1.043、1.056、1.067、1.090 g/mL的五种分离液,分别采用染色观察法和流式细胞术检测各分离液中白细胞浓度;以浓度1.0 mg/mL的五种复方药液分别与105 cell/mL的白细胞悬液共孵育2 h后,分别采用NBT法和流式细胞术测定白细胞的呼吸暴发活性和吞噬能力,评价五种中草药复方(多糖复方Dt,白头翁复方Btw,板蓝根复方Blg,大黄复方Dh,百里酚复方Blf)对花鳗鲡外周血白细胞的激活作用。结果显示:1.043 g/mL和1.056 g/mL的分离液所分离获得白细胞浓度均接近105 cell/mL,可在后续实验中叠加使用该两个浓度的分离液分离获得白细胞;流式细胞术检测白细胞浓度比染色观察法更为灵敏准确;5种复方均能显著提高花鳗鲡外周血白细胞的呼吸暴发活性(P<0.05),大小依次为Blg>Dt>Btw>Blf>Dh;Dt和Blg能显著提高白细胞吞噬率(P<0.05),Btw、Blf、Dh也能提高白细胞吞噬率,但差异不显著(P>0.05);5种复方对发生吞噬白细胞比率的影响差异不显著(P>0.05)。