芳基烃受体AhR对CVB3诱导病毒性心肌炎小鼠心肌细胞损伤和焦亡的影响

目的:探究抑制芳基烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)对柯萨奇B3病毒(coxsackievirus 3,CVB3)诱导的小鼠病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)心肌损伤及细胞焦亡的影响。方法:将60只BALB/c小鼠随机分为对照组(Control)、AhR抑制剂组(AhR inhibitor)、模型组(VMC)、VMC+AhR抑制剂组(VMC+AhR inhibitor),每组15只。VMC组和VMC+AhR抑制剂组小鼠腹腔注射CVB3建立心肌炎模型后,AhR抑制剂组和VMC+AhR抑制剂组小鼠腹腔注射AhR抑制剂CH223191(10mg/kg)。10d后,通过高分辨率Vevo2100小动物超声成像系统检测各组小鼠心脏超声指标,ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白l(cardiac troponin l,cTnl)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的含量,苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化,TUNEL染色检测心肌组织细胞的凋亡情况,免疫组织化学染色测定心肌组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)与消皮素D(Gasdermin-D,GSDMD)的阳性表达水平,实时荧光定量PCR和Western blot检测心肌组织焦亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase-1)、细胞凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、NLRP3及GSDMD在mRNA和蛋白上的表达水平。结果:与对照组比较,VMC组小鼠FS和EF下降,LVIDd和LVAWd增加,血清中cTnl、TNF-α、IL-1β以及IL-18的含量均上升,心肌组织内细胞排列紊乱,伴随大量炎性细胞浸润,心肌组织内TUNEL阳性率升高,NLRP3阳性表达率和GSDMD阳性表达率也升高,caspase-1、ASC、NLRP3及GSDMD的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与VMC组比较,VMC+AhR抑制剂组小鼠FS和EF升高,LVIDd和LVAWd减小,血清中cTnl、TNF-α、IL-1β以及IL-18的含量均降低,心肌组织病理损伤明显减轻,心肌组织内TUNEL阳性率下降,同时,NLRP3阳性表达率和GSDMD阳性表达率均降低,caspase-1、ASC、NLRP3及GSDMD的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制AhR对CVB3诱导的小鼠病毒性心肌炎起保护作用,能够减轻心肌组织损伤,并抑制心肌细胞焦亡。

芳基烃受体及其转录调控的细胞色素P4501A在环境污染物所致毒性中的作用

芳基烃受体属于碱性螺旋-环-螺旋蛋白超家族的转录因子。环境污染物激活芳基烃受体,上调cyp1a的表达,诱导自身的Ⅰ相代谢,增加代谢中间体的生成,代谢中间体与生物大分子结合,造成机体损伤。环境污染物同时可激活芳基烃受体并改变一系列与细胞增殖、细胞周期进程和凋亡相关基因的表达,导致机体损伤并诱发肿瘤。

AhR和Wnt信号通路的相互作用研究进展

人体正常发育与健康状态的维持常依赖于AhR与Wnt信号通路的恰当调节,而两条信号通路一旦失调则会导致发育障碍和疾病。研究表明,虽然AhR和Wnt信号通路在整个进化过程中高度保守,但两条通路之间仍存在着相互作用,其在多种生理过程及疾病的形成与发展中扮演了关键角色。本文综述了AhR与Wnt信号通路相互作用的最新研究发现,并初步总结了两条信号通路间的相互作用机制,旨在推动对AhR与Wnt信号通路相互作用机制的进一步研究,并为临床疾病的诊断、治疗和预防提供新的思路。

多噻烷诱导芳香烃受体作用研究

目的 :通过特殊的细胞株研究多噻烷有无诱导芳香烃受体的作用。方法 :用化学激活荧光素酶表达方法 ,离体测试多噻烷诱导完整细胞中芳香烃受体依赖的基因表达。结果 :多噻烷各浓度对人肝细胞瘤细胞有毒性 ,抑制细胞生长 ;对小鼠肝细胞瘤细胞基本无毒 ;各浓度在人和小鼠肝细胞瘤细胞中所致荧光素酶活性均未明显高于阴性对照组 (DMSO)。结论 :多噻烷对人和小鼠肝细胞瘤细胞无诱导芳香烃受体的作用。

不明原因胚胎停育患者外周血及绒毛组织中芳香烃受体的表达及意义

目的:探讨芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)在胚胎停育中的作用。方法:分别选取30例不明原因胚胎停育患者作为病例组,30例正常早期妊娠人工流产妇女作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测外周血中AhR蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测绒毛组织中AhR mRNA表达水平,蛋白质印迹(Western blotting)法检测绒毛组织中AhR蛋白表达水平。结果:病例组外周血AhR蛋白表达水平[(4.99±0.82)ng/mL]高于对照组[(3.11±0.79)ng/mL],差异有统计学意义(t=2.860,P=0.046)。病例组绒毛组织中AhR mRNA表达水平(2.84±0.51)高于对照组(1.53±0.49),差异有统计学意义(t=3.208,P=0.033)。病例组绒毛组织中AhR蛋白表达水平(0.85±0.11)高于对照组(0.61±0.09),差异有统计学意义(t=2.925,P=0.043)。结论:外周血及绒毛组织中AhR表达增高,可能与不明原因胚胎停育有关。

陈皮酚类化合物调控AHR和NF-κB通路抗苯并芘诱导的肺上皮细胞损伤

本文研究了苯并芘(Bap)诱发肺上皮细胞炎性损伤的作用机制及陈皮中的酚类化合物的抗炎活性及作用机制。通过从陈皮中分离出来酚类化合物并用于抗Bap诱导的人肺上皮II型细胞(A549)损伤的活性研究,检测Bap对细胞炎症因子、NF-κB、芳基烃受体(AHR)通路相关蛋白表达的影响及陈皮酚类化合物对Bap造成损伤的保护作用。本文从陈皮中分离得到6个酚类化合物,研究表明,其中aspidin BB可降低3.74%由Bap诱导的A549细胞凋亡。aspidin BB可抑制Bap诱导的NO及炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)分泌,分别降低了49.22%、26.79%、37.86%和42.94%。Westernblotting结果显示,aspidinBB可抑制Bap诱导的AHR和NF-κB相关蛋白的激活,增强A549细胞的抗炎作用。因此得出陈皮酚类化合物aspidin BB可通过减少Bap诱导的炎性因子分泌,调控AHR、NF-κB通路发挥抗炎及抗氧化损伤的功能。

芳香烃受体在内毒素诱发大鼠肺损伤时Clara细胞分泌蛋白表达下调中的作用

目的:评价芳香烃受体(AhR)在大鼠内毒素性肺损伤时Clara细胞分泌蛋白(CCSP)表达下调中的作用。方法:清洁级健康雄性SD大鼠24只,8周龄,体质量200~250 g,采用随机数字表法分为4组(n=6):正常对照组(C组)、ALI组、ALI+AhR拮抗剂组和ALI+溶剂组。采用气管内注入LPS 1 mg/kg的方法制备内毒素性肺损伤模型,注入LPS前2 h时,ALI+AhR拮抗剂组腹腔注射AhR拮抗剂6,2′,4′-三甲氧基黄酮溶液5 mg/kg(6,2′,4′-三甲氧基黄酮加溶剂二甲基亚砜配成1 ml溶液),ALI+溶剂组腹腔注射二甲基亚砜溶液1 ml。给予LPS后48 h时麻醉下处死大鼠,采用酶联免疫法测定左肺支气管肺泡灌洗液(BALF)CCSP浓度,采用免疫组化法测定右肺组织支气管上皮CCSP表达。结果:与C组比较,其余3组支气管上皮CCSP表达下调,BALF中CCSP浓度降低(P<0.05或0.01);与ALI组和ALI+溶剂组比较,ALI+AhR拮抗剂组组织病理学损伤减轻,支气管上皮CCSP表达上调,BALF中CCSP浓度上升(P<0.01)。结论:大鼠内毒素性肺损伤时AhR部分介导了CCSP的表达下调。

双歧杆菌在过敏性哮喘治疗中的作用机制研究进展

过敏性哮喘是一种由多种炎性因子介导的气道慢性炎症,以气道高反应和可逆性呼气气流受限为临床特征。肠道菌群失调可能与过敏性哮喘的发生有关。双歧杆菌是一种肠道有益菌。双歧杆菌可以通过色氨酸代谢途径,促进芳基烃受体(AHR)配体表达,调节辅助性T细胞/调节性T细胞平衡,抑制气道的炎症反应;AHR可通过抑制活性氧簇(ROS)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路,减轻气道炎症反应及黏液分泌,缓解过敏性哮喘的发展。双歧杆菌可促进短链脂肪酸的生成,下调核因子-κB信号通路、抑制转化生长因子/Smads信号通路及上调G蛋白受体41和G蛋白受体43表达,减轻气道炎症、降低气道高反应,缓解过敏性哮喘的发展。双歧杆菌可抑制Toll样受体3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白信号通路,减轻气道炎症及结构重塑,缓解过敏性哮喘的发展。

芳基烃受体核转位因子样蛋白2在子宫内膜癌中的表达

目的探讨芳基烃受体核转位因子样蛋白2(ARNTL2)在子宫内膜癌中的表达、作用及其可能的信号通路。方法采用免疫组织化学SP法、RT-PCR和Western blotting实验检测子宫内膜癌及正常内膜组织中ARNTL2的表达;小干扰RNA(Si-ARNTL2)敲低ARNTL2的表达,CCK-8实验检测细胞增殖能力,划痕愈伤实验和小室穿透实验(Transwell)检测细胞迁移和侵袭能力;Western blotting检测细胞上皮间质转化指标:N-钙黏蛋白(N-cad)、E-钙黏蛋白(E-cad)、Vimentin蛋白、Snail蛋白、Slug蛋白及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(Wnt蛋白、β-连环蛋白)的表达。结果免疫组织化学、RT-PCR和Western blotting结果均显示,ARNTL2在子宫内膜癌组织中表达上调(t_(免疫组织化学)=2.213,P=0.033;t_(RT-PCR)=4.766,P<0.001;t_(Western blotting)=2.659,P=0.012);Si-ARNTL2转染可成功降低子宫内膜癌细胞系(KLE和Ishikawa)ARNTL2的表达。敲低ARNTL2后,CCK8实验结果显示,两种细胞的吸光度值下降(P均<0.05);划痕愈伤实验结果显示,两种细胞的划痕愈合率下降(P均<0.001);Transwell侵袭及迁移实验结果均显示,两种细胞穿膜细胞数减少(P均<0.01);Western blotting实验结果显示,两细胞系E-cad表达上升(P均<0.05),N-cad、Vimentin、Snail、Slug蛋白表达下降(P均<0.05),两细胞Wnt、β-catenin蛋白的表达均下降(P均<0.05)。结论ARNTL2在子宫内膜癌组织中的表达升高,降低子宫内膜癌细胞中ARNTL2的表达可抑制子宫内膜癌的增殖和转移,其可能通过Wnt/β-catenin通路发挥作用。

2，3，7，8-四氯二苯并二噁英对人芳香烃受体和转化生长因子α mRNA表达的影响

目的研究2，3，7，8-四氯二苯并二噁英（TCDD）染毒对表皮细胞芳香烃受体（AhR）和转化生长因子（TGF-α）表达的影响。方法利用半定量逆转录PCR技术（RT-PCR）对24hTCDD染毒组进行AhR和TGF-α基因表达的测定，并分析两者之间的相互关系。结果以β-aetin为内参照，测定细胞中AhR和TGF-α mRNA表达的相对含量。结果显示随着TCDD浓度的增高，细胞中AhR mRNA的相对表达量呈现下降的趋势，r=-0．548，各染毒组与对照组相比差异有统计学意义（F=4．124，P=0．021），两两比较7×10^-10mol／L组（0．0620±0．0085）和7×10^-9mol／L组（0．0518±0．0194）与对照组（0．1138±0．0227）之间的差别有统计学意义（t=-3．48，P〈0．05；t=-4．17，P〈0．01），且其相对表达量分别为对照组的55％和45％。TGF-α mRNA的相对表达量随浓度的增加则呈现上升的趋势，相关系数r=0．695（P〈0．01），各组之间差异有统计学意义（F=15．789，P=0．000），在7×10^-10mol／L组（0．1474±0．0390）和7×10^-9mol／L组（0．2133±0．0364）相对表达量与对照组（0．0561±0．0100）的差别具有统计学意义（t=4．49，P〈0．01；t=7．74，P〈0．01），且其相对表达量是对照组的2．6倍和3．8倍。同时对AhR与TGF-α mRNA相对表达水平进行相关分析，两者呈负相关，r=-0．561（P〈0．05）。结论TCDD对细胞增殖过程中可影响基因表达，AhR表现为下调，TGF-α表现为上调，且两基因表达量之间存在负相关关系。

芳香烃受体及其核转位蛋白与复发性流产的关系

目的探讨不同部位芳香烃受体(AhR)、核转位蛋白(ARNT)、雌二醇(E_2)、雌激素受体(ER)表达水平与复发性流产(RSA)的关系。方法选择2016年5月至2017年9月在山西大医院妇产科门诊行早期人工流产的RSA患者64例(RSA组),既往有正常胎儿分娩史、自愿行人工流产的正常早孕妇女30例(正常组)。在人工流产的同时留取绒毛、蜕膜组织及其外周血,用酶联免疫法检测两组患者绒毛、蜕膜组织中AhR、ARNT、ER及外周血中AhR、ARNT水平,用微粒子化学发光免疫法检测两组外周血中E_2水平,对有关数据进行统计分析。结果 (1)RSA组外周血中ARNT水平显著高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);两组外周血中AhR、E_2水平组间比较差异无统计学意义(P>0. 05)。RSA组绒毛及蜕膜组织中AhR、ARNT水平显著高于正常组(P <0. 05);而ER水平低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)两组绒毛组织、蜕膜组织中的AhR/ARNT比值差异均无统计学意义(P>0. 05);RSA组绒毛组织和蜕膜组织中的AhR/ER、ARNT/ER比值均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论绒毛、蜕膜组织中AhR、ARNT过度表达,ER低表达可能与RSA的发生有关。

芳香烃受体在人表皮、毛囊和皮脂腺上的表达及其意义

目的 观察芳香烃受体（AhR）在人表皮、毛囊及皮脂腺细胞上的表达及在二噁英作用下的激活情况。方法 采用免疫荧光和免疫组化法观察AhR蛋白在人面部表皮、毛囊、皮脂腺及体外培养的HaCaT细胞和SZ95人皮脂腺细胞上的表达情况；Western印记法观察2,3,7,8-四氯二苯-p-二噁英（TCDD）作用HaCaT细胞和SZ95细胞3 d后AhR蛋白表达的变化情况。结果 AhR蛋白在人面部皮肤表皮、毛囊、皮脂腺细胞上表达，并且AhR蛋白在表皮棘层和颗粒层的表达强于基底细胞层，在皮脂腺小叶的外周和中央表达强于皮脂腺小叶中间，在毛囊外毛根鞘和近毛小皮细胞上的表达强于内毛根鞘细胞。AhR蛋白在HaCaT细胞和SZ95细胞的细胞核和胞质中高表达。在TCDD作用下，HaCaT细胞和SZ95细胞内AhR蛋白表达明显下降，显示AhR在TCDD作用下被激活。结论 AhR在人表皮、毛囊、皮脂腺、HaCaT细胞及SZ95细胞上高表达，并在TCDD作用下激活，显示二噁英有可能通过AhR信号途径引起了人表皮、毛囊和皮脂腺的异常分化。

微RNA-124-3p通过芳香烃受体激活β-联蛋白通路调控胃癌细胞增殖和侵袭的机制

目的探讨微RNA(miR)-124-3p及其靶向基因芳香烃受体(AHR)在胃癌诊断和预后评估中的价值,及其调控胃癌细胞增殖和侵袭的相关分子机制。方法基于癌症基因组图谱数据库和基因型组织表达数据库获得miR-124-3p在胃腺癌患者的临床和预后特征,通过生物信息学分析miR-124-3p水平高低与不同病理分期、TNM分期、总生存期、无病生存期和无进展间期胃腺癌患者的关系。由Target Scan 7.1网络工具预测miR-124-3p与互作分子AHR mRNA的作用位点,通过小鼠皮下成瘤实验、免疫组织化学染色、双荧光素酶检测、实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹实验验证miR-124-3p在AHR mRNA中的靶结合位点。选择9只4~6周龄、体重为(18.43±0.29)g的雄性Balb/c裸小鼠,分别由小鼠尾静脉注射miR-124-3p模拟物(miR-124-3p组)、阴性对照模拟物(阴性对照组)和0.9%氯化钠溶液(氯化钠对照组),用miR-124-3p模拟物、阴性对照模拟物和0.9%氯化钠溶液转染胃癌细胞(MKN-45、AGS),分析生物学实验中3组小鼠AHR和连环蛋白β1基因(CTNNB1)的mRNA表达水平,AHR和β-联蛋白的蛋白质表达水平,以及miR-124-3p对转染的胃癌细胞增殖和侵袭的影响。统计学方法采用Pearson相关分析和Holm-Sidak法校正的多重t检验。结果miR-124-3p低表达与胃腺癌患者严重的病理分期、TNM分期均呈正相关(R^(2)=0.83、0.86,P=0.031、0.023);miR-124-3p高表达与总生存期、无病生存期和无进展间期延长均呈正相关(R^(2)=1.00、0.99、0.99,P=0.029、0.044、0.049)。小鼠皮下成瘤实验结果显示,miR-124-3p组瘤体内的凋亡细胞数多于阴性对照组和氯化钠对照组[(43.33±1.86)/高倍视野比(20.00±1.73)/高倍视野、(18.67±1.76)/高倍视野],差异均有统计学意义(t=8.55、8.33,P=0.013、0.014)。免疫组织化学染色结果显示,miR-124-3p组小鼠体内肿瘤组织的AHR蛋白质的光密度低于阴性对照组和氯化钠对照组(0.081±0.008比0.276±0.019、0.273±0.018),差异均有统计学意义(t=9.06、7.51,P=0.012、0.017)。双荧光素酶检测结果显示,转染miR-124-3p模拟物的野生型AHR MKN-45细胞中荧光强度低于转染阴性对照模拟物的细胞(0.293±0.020比1.000±0.032),差异有统计学意义(t=18.56,P<0.001)。RT-qPCR检测结果显示,转染miR-124-3p模拟物的MKN-45细胞中AHR和CTNNB1的mRNA水平均低于未处理的MKN-45细胞(0.51±0.09比1.02±0.02、0.46±0.03比1.03±0.01),差异均有统计学意义(t=4.51、16.60,P=0.046、0.004)。蛋白质印迹实验结果显示,转染miR-124-3p模拟物的MKN-45细胞中的AHR和β-联蛋白的蛋白质相对表达量均低于转染0.9%氯化钠溶液和阴性对照模拟物的细胞(3332.94±81.25比9041.60±439.79、8276.54±562.52,2725.79±167.57比9701.94±410.02、8081.66±275.84),差异均有统计学意义(t=15.49、7.91、17.35、19.42,P=0.004、0.016、0.003、0.003)。结论miR-124-3p与胃癌诊断和预后相关,可通过负向调节AHR mRNA和蛋白质表达,进而下调CTNNB1 mRNA和β-联蛋白通路相关蛋白质表达,于体内外诱导胃癌细胞凋亡。因此,miR-124-3p可能成为胃癌诊断和预后评估的潜在标志物。

芳香烃受体在色氨酸代谢调节免疫中的作用

芳香烃受体（AhR）是一种配体依赖性胞内受体，配体种类多样，根据来源可分为外源性和内源性配体。不同配体结合并激活AhR，可使AhR转位至核上，调节下游基因如细胞色素P450家族基因CYP1转录活动，在介导病理过程和维持机体正常发育与生理功能中发挥着重要作用。色氨酸（Trp）代谢产物是一类主要的内源性配体。犬尿氨酸（Kyn）作为Trp代谢的主要产物，与AhR相互作用后可影响免疫细胞分化与活性，调节机体适应性免疫应答，发挥抑制抗肿瘤免疫的作用。近年来Kyn在移植免疫中的作用也越来越引人瞩目。本文将对AhR在Trp代谢调节免疫中作用的研究进展进行综述。

芳烃受体在器官纤维化发生和发展中的作用

纤维化为临床上常见的慢性疾病,在多个器官和组织均有发生,发病率逐年升高。芳烃受体(AhR)为一种配体依赖性的转录因子,可调控细胞增殖、迁移、凋亡和分化等过程。近年研究显示,AhR在肝、肺、肾和心脏等器官纤维化的发生和发展中发挥着重要作用,激动AhR可抑制纤维化的发生和发展,AhR激动剂在器官纤维化治疗中的开发和应用值得关注。

AhR基因-1661G／A位点与GSTPl基因-313A／G位点联合基因型多态性与内异症发病的相关性

目的探讨芳香烃受体（AhR）基因一1661G／A（AhR一1661G／A）位点与谷胱甘肽硫转移酶p1（GSTPl）基因一313AZG（GSTPl—313A／G）位点联合基因型单核苷酸多态性与内异症发病的相关性。方法采集2008年10月至2009年11月在南方医科大学珠江医院及佛山市第一人民医院经腹或腹腔镜手术及术后病理检查证实的432例内异症患者（病例组）和因输卵管结扎、输卵管复通、腹腔镜下输卵管通液、卵巢单纯性囊肿、畸胎瘤等进行腹、盆腔手术且术中未发现内异症病灶的493例患者（对照组）的外周血，采用荧光定量PCR技术为基础的高分辨率熔解（HRM）曲线分析技术检测两组患者外周血中AhR一1661G／A位点及GSTPl—313A／G位点单核苷酸多态性。结果两组中AhR一1661G／A及GSTPl—313A／G位点同时分型成功的例数分别为病例组431例、对照组490例。病例组患者AhR一1661G／A位点与GSTPl—313A／G位点联合基因型分布分别为AG＋AA（120例）、AG＋AG（64例）、AG＋GG（8例）、GG＋AA（109例）、GG＋AG（84例）、GG＋GG（4例）、AA＋AA（31例）、AA＋AG（10例）、AA＋GG（1例）；对照组中联合基因型分布分别为AG＋AA（131例）、AG＋AG（68例）、AG＋GG（6例）、GG＋AA（157例）、GG＋AG（66例）、GG＋GG（4例）、AA＋AA（35例）、AA＋AG（20例）、AA＋GG（3例）；两组患者外周血中联合基因型频率比较，差异无统计学意义（X^2=12．558，P=0．128）。联合基因型GG＋AG携带者比基因型GG＋AA携带者内异症的发病风险高1．833倍（95％CI为1．233～2．274）。结论AhR一1661G／G位点与GSTPl—313A／G位点联合基因型多态性与内异症的发病有关。

治疗寻常型银屑病新药:本维莫德

本维莫德(benvitimod)是一种芪类小分子化合物,通过激活芳烃受体发挥抗氧化、抗炎、免疫调节等治疗银屑病作用。2019年被我国药品监督管理局批准用于局部治疗成人轻中度寻常型银屑病,临床疗效较好。本维莫德安全性良好,患者可耐受,常见的不良反应为毛囊炎和接触性皮炎。

miR-126调控肺鳞癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨miR-126在调控肺鳞癌细胞SK-MES-1增殖中的作用及机制。方法取10对肺鳞癌组织和癌旁组织,利用q PCR检测各个组织中miR-126的表达水平;合成并将miR-126 mimic和NC转染进入SK-MES-1细胞后,q PCR检测miR-126在上述细胞中的表达,并用MTS检测12、24、48 h时细胞的活力。构建野生型和突变型(nuclear receptor coactivator,NCo A) 7 3’UTR插入p MIR-REPORTTM luciferase vector载体,并将其与pRL-TK质粒共转染进入SK-MES-1细胞,之后分别将等量的miR-126和NC再转染进入SK-MES-1细胞,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测萤火虫和海肾荧光素酶活性。应用q PCR和western blot检测转染miR-126 mimic后不同时间点NCo A7 mRNA和蛋白以及芳基烃受体核转运子(Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT)蛋白的变化。应用co-IP检测NCo A7与ARNT蛋白的相互作用。转染ARNT siRNA以及NC 48 h后,应用q PCR和western blot检测ARNT mRNA和蛋白的表达,并用MTS评估其对SK-MES-1细胞增殖的抑制作用。结果肺鳞癌组织中miR-126的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。转染miR-126 mimic 12、24和48 h后,SK-MES-1细胞中miR-126的表达水平均显著高于0 h组(P<0.05),而NCo A7 mRNA和蛋白、ARNT蛋白的表达水平显著低于0 h组(P<0.05)。荧光素酶报告基因结果显示野生型NCo A7 3’UTR质粒和miR-126 mimic共转染组的相对荧光素酶活性较野生型NCo A7 3’UTR质粒和NC共转染组明显的降低(P<0.05)。Co-IP的结果显示NCo A7与ARNT蛋白之间有相互作用关系。应用ARNT siRNA转染后较NC组可显著下调ARNT mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),其中S1和S2序列siRNA沉默效果较好。MTS结果显示转染S1和S2后12、24、48 h的细胞增殖水平显著低于NC组(P<0.05)。结论 miR-126在肺鳞癌中的表达水平较低。上调肺鳞癌细胞SK-MES-1中miR-126表达后,通过其下调靶点NCo A7的表达,进而可抑制ARNT介导的细胞增殖。miR-126可作为潜在的治疗肺鳞癌的靶点。

氯吡格雷治疗下CYP2C19与P2Y热点突变致血小板高反应性的效应研究

目的 研究氯吡格雷治疗患者CYP2C19和P2Y热点突变导致血小板因药物耐受而出现高反应性的效应关系,探索检出突变相关功能改变的临床适用方法.方法 病例对照研究.选取104例接受抗血小板治疗且冠状动脉介入术前服用负荷剂量（300 mg/d）氯吡格雷的冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者,在术后12 ～24 h内测定血小板功能,通过血栓弹力图（TEG）检测血小板抑制率,通过流式细胞术检测CD62p和血管扩张刺激磷蛋白（VASP）;焦磷酸测序法测定中国人群药物代谢酶热点突变CYP2C19＊2（681G＞ A）、CYP2C19＊3 （636G＞ A）和血小板膜糖蛋白受体基因P2Y1 （893C ＞T）、P2Y12 （52G＞ T）4个位点基因多态性.以CYP2C19分型结果为依据分为野生组（＊1/＊ 1）、杂合突变组（＊2/＊1）、纯合突变组（＊2/＊2）,结合其他3个位点突变情况,分析各组氯吡格雷作用下的血小板功能差异.应用单因素方差分析进行不同基因型组间比较,两组间比较选用t检验及非参数检验进行统计学分析.结果 野生组血小板反应指数（PRI）为（35.75±23.11）％,杂合突变组为（48.77 ±24.22）％,纯合突变组为（66.73±15.74）％,差异有统计学意义（F=9.170,P＜0.05）;野生组CD62p水平为（9.38±11.16）％,杂合组为（9.45±8.91）％,纯合突变组为（10.87±8.31）％,差异无统计学意义（F=0.087,P＞0.05）;37例受试个体中未检出P2Y1（893C＞ T）位点突变,检出1例P2Y12（52G＞ T）位点突变.结论 CYP2C19＊2突变与氯吡格雷疗效降低密切相关,VASP检测的血小板反应指数可有效反映其改变.