芳基烃受体核转位因子样蛋白2在子宫内膜癌中的表达

目的探讨芳基烃受体核转位因子样蛋白2(ARNTL2)在子宫内膜癌中的表达、作用及其可能的信号通路。方法采用免疫组织化学SP法、RT-PCR和Western blotting实验检测子宫内膜癌及正常内膜组织中ARNTL2的表达;小干扰RNA(Si-ARNTL2)敲低ARNTL2的表达,CCK-8实验检测细胞增殖能力,划痕愈伤实验和小室穿透实验(Transwell)检测细胞迁移和侵袭能力;Western blotting检测细胞上皮间质转化指标:N-钙黏蛋白(N-cad)、E-钙黏蛋白(E-cad)、Vimentin蛋白、Snail蛋白、Slug蛋白及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(Wnt蛋白、β-连环蛋白)的表达。结果免疫组织化学、RT-PCR和Western blotting结果均显示,ARNTL2在子宫内膜癌组织中表达上调(t_(免疫组织化学)=2.213,P=0.033;t_(RT-PCR)=4.766,P<0.001;t_(Western blotting)=2.659,P=0.012);Si-ARNTL2转染可成功降低子宫内膜癌细胞系(KLE和Ishikawa)ARNTL2的表达。敲低ARNTL2后,CCK8实验结果显示,两种细胞的吸光度值下降(P均<0.05);划痕愈伤实验结果显示,两种细胞的划痕愈合率下降(P均<0.001);Transwell侵袭及迁移实验结果均显示,两种细胞穿膜细胞数减少(P均<0.01);Western blotting实验结果显示,两细胞系E-cad表达上升(P均<0.05),N-cad、Vimentin、Snail、Slug蛋白表达下降(P均<0.05),两细胞Wnt、β-catenin蛋白的表达均下降(P均<0.05)。结论ARNTL2在子宫内膜癌组织中的表达升高,降低子宫内膜癌细胞中ARNTL2的表达可抑制子宫内膜癌的增殖和转移,其可能通过Wnt/β-catenin通路发挥作用。

Bmal1低表达对胰岛β细胞功能的影响

目的研究生物钟基因芳香烃受体核转位蛋白样1基因(Bmal1)低表达对大鼠胰岛细胞瘤细胞-1(INS-1)功能的影响。方法应用大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞,随机将INS-1细胞分为空白组、阴性对照组和Bmal1 siRNA组,通过RNA干扰技术沉默Bmal1,比较三组细胞内活性氧(ROS)水平、胰岛素(GSIS)含量、核因子E2相关因子2(Nrf2)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)mRNA表达,并采用透射电镜观察线粒体结构变化。结果阴性对照组与空白组ROS水平、GSIS含量、Nrf2、CAT、GSH-Px mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);Bmal1 siRNA组ROS水平、Nrf2表达高于阴性对照组,GSIS含量、CAT、GSH-Px mRNA表达低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。透射电镜结果显示,在空白组和阴性对照组中线粒体为圆形或椭圆形,具有完整的膜和少量管状嵴;Bmal1 siRNA组中线粒体肿胀、形状不规则,线粒体嵴断裂和消失。结论Bmal1低表达可导致β细胞氧化应激增强,GSIS下降,其作用机制可能与影响Nrf2信号通路有关。