3'-磷酸腺苷-5'-磷酰硫酸(PAPS)是生物肝素酶法制备途径的硫磺基供体,价格高且易分解。芳基硫磺基转移酶(ASTIV,EC 2.8.2.1)可以转化对硝基硫酸苯酯(PNPS)和3'-磷酸腺苷-5'-磷酸(PAP)生成PAPS。利用大肠杆菌系统高效可...3'-磷酸腺苷-5'-磷酰硫酸(PAPS)是生物肝素酶法制备途径的硫磺基供体,价格高且易分解。芳基硫磺基转移酶(ASTIV,EC 2.8.2.1)可以转化对硝基硫酸苯酯(PNPS)和3'-磷酸腺苷-5'-磷酸(PAP)生成PAPS。利用大肠杆菌系统高效可溶性表达ASTIV。对鼠源ASTIV基因序列进行密码子优化并全合成;转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达;对表达条件进行优化,提高可溶表达量;Ni2+亲和层析纯化目标蛋白,重组ASTIV产量达到80 mg/L,纯度高达95.3%,比酶活为42.5 m U/mg;用碱性磷酸酶(CIAP)转化ASTIV构型,比酶活进一步提高到85.0 m U/mg。该研究为ASTIV重组表达,PAPS酶法制备以及生物肝素合成奠定了坚实的基础。展开更多
文摘3'-磷酸腺苷-5'-磷酰硫酸(PAPS)是生物肝素酶法制备途径的硫磺基供体,价格高且易分解。芳基硫磺基转移酶(ASTIV,EC 2.8.2.1)可以转化对硝基硫酸苯酯(PNPS)和3'-磷酸腺苷-5'-磷酸(PAP)生成PAPS。利用大肠杆菌系统高效可溶性表达ASTIV。对鼠源ASTIV基因序列进行密码子优化并全合成;转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达;对表达条件进行优化,提高可溶表达量;Ni2+亲和层析纯化目标蛋白,重组ASTIV产量达到80 mg/L,纯度高达95.3%,比酶活为42.5 m U/mg;用碱性磷酸酶(CIAP)转化ASTIV构型,比酶活进一步提高到85.0 m U/mg。该研究为ASTIV重组表达,PAPS酶法制备以及生物肝素合成奠定了坚实的基础。
