抵当汤对高速泳动族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB通路的调控作用

目的:探讨抵当汤及其拆方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响及作用机制。方法:将体外培养的HUVECs随机分为空白血清组、LPS组、LPS+抵当汤组、LPS+植物药组、LPS+动物药组;抑制Toll样受体4(TLR4)后分为TAK-242组、抵当汤TAK-242组、植物药TAK-242组、动物药TAK-242组,给予相应处理后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白质免疫印迹法检测HUVECs中HMGB1、TLR4和核因子κB p65的蛋白表达水平,实时定量PCR(RT-qPCR)法检测HMGB1、TLR4和核因子κB p65的基因表达情况,免疫荧光法测定HMGB1、TLR4和核因子κBp65的荧光强度。结果:与A组比较,LPS组细胞上清液及HUVECs中HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κB p65表达均增强(均P<0.01)。与LPS组比较,LPS+抵当汤组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65的表达均减弱(P<0.05,P<0.01)。与LPS+抵当汤组比较,LPS+植物药组和LPS+动物药组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65表达显著增强(P<0.05,P<0.01)。LPS+植物药组中的HMGB1、IL-6和TNF-α表达低于LPS+动物药组(P<0.05,P<0.01),TLR4和核因子κBp65表达高于LPS+动物药组(P<0.05)。抑制TLR4后,与LPS组比较,TAK-242组的HMGB1、TLR4、核因子κBp65表达减弱(P<0.05,P<0.01)。与TAK-242组比较,抵当汤TAK-242组各指标表达低于TAK-242组(P<0.05,P<0.01)。与抵当汤TAK-242组比较,植物药TAK-242组和动物药TAK-242组各指标表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:抵当汤及其拆方可通过抑制细胞炎症反应对HUVECs发挥保护和改善作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/TLR4/核因子κB信号通路活化有关。

时钟基因芳烃受体核转位因子样蛋白1通过调控沉默信息调节因子1抑制转化生长因子-β1/Smad蛋白2通路减轻肾小管上皮细胞缺氧/复氧后纤维化的研究

目的探讨时钟基因芳烃受体核转位因子样蛋白1(Bmal1)调控沉默信息调节因子1(SIRT1)通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白2(Smad2)通路在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧后纤维化中的作用。方法将HK-2细胞随机分组:正常对照组(A组)、缺氧/复氧组(B组);siCTRL组(C组)、siBmal1组(D组)、HR +siCTRL组(E组)、HR+ siBmal1组(F组);HR + siCTRL +二甲基亚砜(DMSO)组(G组)、HR+ siCTRL+白藜芦醇(Resveratrol)组(H组)、HR+ siBmal1 +DMSO组(I组)、HR+ siBmal1 + Resveratrol组(J组),用小干扰RNA(siRNA)敲低Bmal1,各组给予相应干预措施,蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞Bmal1、SIRT1、TGF-β1、Smad2、磷酸化Smad蛋白2(p-Smad2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、锌指转录因子1(snail1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达量。使用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析。结果 B组Bmal1、SIRT1指标低于A组(0.310±0.039、0.248±0.037比0.668±0.161、0.416±0.049,t=3.046、3.873,P<0.05),而B组TGF-β1、p-Smad2指标高于A组(0.734±0.022、0.563±0.07比0.280±0.102、0.190±0.021,t=6.115、7.062,P<0.05);D、E组Bmal1、SIRT1指标低于C组(0.547±0.031、0.647±0.029比0.754±0.036,0.311±0.024、0.339±0.017比0.450±0.032,t=6.335、3.289、5.861、4.688,P<0.05),D、E组TGF-β1、p-Smad2指标高于C组(0.314±0.011、0.379±0.007比0.072±0.009,0.399±0.015、0.313±0.025比0.240±0.013,t=15.910、20.150、7.736、3.553,P<0.05);F组Bmal1、SIRT1指标低于D、E组(0.199±0.033比0.547±0.031、0.647±0.029,0.158±0.016比0.311±0.024、0.339±0.017,t=10.950、14.000、6.433、7.606,P<0.05),F组TGF-β1、p-Smad2指标高于D、E组(0.443±0.026比0.314±0.011、0.379±0.007,0.488±0.026比0.399±0.015、0.313±0.025,t=8.472、4.233、4.304、8.488,P<0.05);H组Bmal1、SIRT1指标高于G组(0.964±0.026、0.444±0.031比0.629±0.036、0.339±0.019,t=11.830、4.829,P<0.05),而H组TGF-β1、p-Smad2指标低于G组(0.235±0.022、0.213±0.016比0.386±0.027、0.297±0.011,t=7.583、4.867,P<0.05);I组Bmal1、SIRT1指标低于G组(0.484±0.018、0.183±0.015比0.629±0.036、0.339±0.019,t=5.115、7.189,P<0.05),I组TGF-β1、p-Smad2指标高于G组(0.497±0.015、0.637±0.025比0.386±0.027、0.297±0.011,t=5.613、19.620,P<0.05);J组Bmal1、SIRT1指标低于H组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.964±0.026、0.444±0.031,t=13.600、7.660,P<0.05),J组TGF-β1、p-Smad2指标高于H组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.235±0.022、0.213±0.016,t=4.430、14.430,P<0.05);J组Bmal1、SIRT1指标高于I组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.484±0.018、0.183±0.015,t=3.351、4.358,P<0.05),J组TGF-β1、p-Smad2指标低于I组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.497±0.015、0.637±0.025,t=8.767、10.050,P<0.05)。结论时钟基因Bmal1通过调控SIRT1抑制TGF-β1/Smad2信号通路进而减轻HK-2细胞缺氧/复氧后纤维化。

乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子-κB通路对急性胃肠损伤家兔肠屏障功能保护机制

目的探讨乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能保护机制。方法40只家兔,平均分为4组,对照组(未建立严重多发伤并急性胃肠损伤),损伤组、药物对照组和干预组均建立严重多发伤并急性胃肠损伤模型。建模成功后药物对照组注射丙氨酰谷氨酰胺1.2 g/kg,干预组腹腔注射100000 U/kg的乌司他丁,8 h一次,连续7 d。其余家兔同部位注射等体积生理盐水。抽取静脉血检测肠黏膜屏障、炎症及应激指标,HE染色检测小肠病理形态,HMGB1、TLR4、NF-κB检测采用免疫印迹及聚合酶链式反应法。结果损伤组肠脂肪酸结合蛋白、二胺氧化酶、D乳酸、降钙素原和C反应蛋白均高于对照组(P<0.05),药物对照组和干预组上述指标均低于损伤组,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,损伤组丙二醛(MDA)升高,超氧化物岐化酶(SOD)降低;与损伤组比较,药物对照组和干预组MDA降低,SOD升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组家兔小肠组织中HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA比较存在差异,损伤组HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA高于对照组,与损伤组比较,药物对照组和干预组上述指标降低,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁能够提高严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能,改善炎症及应激,并具有浓度依赖性,其作用机制与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路相关。

Toll样受体-2、核因子-κB在Aβ诱导的阿尔茨海默病中的作用

目的探讨Toll样受体2(TLR-2)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β与β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法将雄性Wistar大鼠50只,随机分为A、B、C、D、E组,每组10只;A组大鼠双侧海马CA1区注射5μl生理盐水,B^E组双侧海马注射5μl Aβ(分别含Aβ25~350.5、1、5、10μg);ELISA检测TNF-α、IL-1β含量;免疫组化(IHC)检测海马CA1区TLR-2表达;实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测TLR-2、NF-κB基因的mRNA表达。结果 IHC检测TLR-2主要聚集在Aβ斑块周围,D组(0.036 6±0.007 3)、E组(0.044 8±0.010 8)TLR-2阳性表达明显高于A组(0.018 7±0.005 8)、B组(0.010 0±0.003 4)、C组(0.015 1±0.006 0)(P<0.01);ELISA检测大鼠血清TNF-α含量D组(568.65±44.66)pg/ml、E组(685.06±29.92)pg/ml明显高于A组(426.87±55.91)pg/ml、B组(432.99±28.09)pg/ml、C组(488.14±39.04)pg/ml(P<0.01),IL-1β含量D(104.60±9.32)pg/ml、E组(143.38±17.09)pg/ml明显高于A(49.13±8.46)pg/ml、B(60.89±14.71)pg/ml、C(79.81±9.94)pg/ml三组(P<0.01);qRT-PCR检测大鼠海马组织内TLR-2 mRNA表达D组(2.185 9±0.381 4)、E组(2.977 7±0.390 7)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.178 5±0.106 6)、C组(1.463 3±0.127 3)(P<0.01);NF-κB mRNA表达D组(1.747 0±0.125 6)、E组(2.271 9±0.533 2)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.274 3±0.165 1)、C组(1.429 1±0.077 7)(P<0.01)。结论随着Aβ剂量不断增加,TLR-2促进小胶质细胞吞噬和清除Aβ的能力不足使Aβ积聚体并激活NF-κB,促进更多的TNF-α、IL-1β释放,最终导致大鼠脑内神经元损伤。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路研究枇杷叶提取物对急性肺损伤模型大鼠炎症因子的影响

目的 基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路研究枇杷叶提取物对急性肺损伤(ALI)大鼠炎症因子的影响及潜在机制。方法 60只SPF级Wistar大鼠按照随机数字表法分为空白组(NC组)、模型组(ALI组)、阳性对照组(Dex组)、枇杷叶提取物低剂量组(EJLE-L组)、枇杷叶提取物中剂量组(EJLE-M组)和枇杷叶提取物高剂量组(EJLE-H组),每组10只。ALI组、Dex组、EJLE-L组、EJLE-M组、EJLE-H组气管内均滴注2 mg/kg脂多糖建立大鼠ALI模型。建模后,Dex组腹腔注射5 mg/kg地塞米松,EJLE-L组、EJLE-M组、EJLE-H组分别腹腔注射50、100、150 mg/kg枇杷叶提取物,NC组和ALI组腹腔注射5 mg/kg生理盐水。观察各组大鼠肺组织病理组织学及细胞超微结构变化,比较各组大鼠肺组织湿重/干重值,外周循环、肺组织炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平及肺组织HMGB1、TLR4、NF-κB累积光密度值(IOD)及蛋白、mRNA表达量。结果 与ALI组比较,Dex组、EJLE-L组、EJLE-M组、EJLE-H组肺组织湿重/干重值[(6.12±0.14)、(5.76±0.11)、(5.09±0.12)、(4.67±0.10)比(6.89±0.17),P<0.05],肺组织病理评分[(7.79±0.65)分、(5.45±0.43)分、(3.23±0.29)分、(1.02±0.20)分比(13.23±1.00)分,P<0.05],外周循环炎症因子IL-1β[(102.32±11.23)ng/L、(87.86±9.09)ng/L、(64.54±6.74)ng/L、(43.11±5.63)ng/L比(147.87±15.64)ng/L,P<0.05]、IL-6 [(114.43±15.34)ng/L、(99.07±11.23)ng/L、(78.43±9.02)ng/L、(55.46±6.12)ng/L比(156.65±19.98)ng/L,P<0.05]、TNF-α[(156.64±19.09)ng/L、(107.64±12.32)ng/L、(69.09±9.09)ng/L、(49.98±5.46)ng/L比(201.98±24.43)ng/L,P<0.05]水平,肺组织炎症因子IL-1β[(172.21±17.68)ng/L、(123.32±14.35)ng/L、(95.54±10.76)ng/L、(70.94±8.75)ng/L比(223.42±28.76)ng/L,P<0.05]、IL-6[(154.43±17.65)ng/L、(100.23±11.43)ng/L、(76.42±8.93)ng/L、(66.75±6.55)ng/L比(198.90±22.34)ng/L,P<0.05]、TNF-α[(164.58±18.97)ng/L、(110.23±14.53)ng/L、(90.23±10.98)ng/L、(61.65±6.57)ng/L比(223.42±34.52)ng/L,P<0.05]水平,肺组织HMGB1[IOD值:(232.32±34.42)、(197.87±29.09)、(123.23±15.46)、(69.98±8.98)比(398.89±45.53),蛋白:(2.32±0.29)、(2.00±0.17)、(1.78±0.10)、(1.35±0.20)比(2.76±0.21),mRNA:(2.10±0.17)、(1.85±0.19)、(1.53±0.14)、(1.29±0.20)比(2.90±0.21),P <0.05]、TLR4 [IOD值:(214.34±22.35)、(168.98±18.90)、(100.34±11.23)、(77.85±8.45)比(453.34±52.32),蛋白:(2.54±0.23)、(2.04±0.22)、(1.61±0.18)、(1.46±0.14)比(2.98±0.34),mRNA:(2.03±0.25)、(1.76±0.21)、(1.54±0.14)、(1.25±0.10)比(2.76±0.22),P<0.05]、NF-κB [IOD值:(200.97±28.87)、(159.09±16.57)、(102.32±14.35)、(67.84±7.98)比(323.43±39.98),蛋白:(1.87±0.20)、(1.34±0.19)、(1.00±0.15)、(0.88±0.09)比(2.00±0.16),mRNA:(2.67±0.20)、(2.21±0.19)、(1.97±0.17)、(1.54±0.12)比(3.02±0.22),P<0.05]均明显降低;与Dex组、EJLE-L组、EJLE-M组比较,EJLE-H组上述指标改善更明显(P<0.05)。结论枇杷叶提取物可明显抑制ALI大鼠外周循环及肺部炎症,其可能通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路逆转肺损伤。

大承气汤抑制高迁移率族蛋白1-Toll样受体4信号通路减轻炎症反应改善重症胰腺炎大鼠肾损伤

目的研究大承气汤(DCQD)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾损伤的作用及机制。方法60只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham)、SAP组,DCQD治疗组和r-HMGB1组各15只。经胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠构建大鼠SAP模型。评估各组肾脏病理形态,血清中淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LIS)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和高迁移率族蛋白1(HMGB1)含量,血清和肾脏白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及肾脏HMGB1、乙酰化HMGB1(Acetyl-HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、Myd88、p-p65和p65蛋白表达。结果与Sham组比较,SAP组肾脏病理损伤加重,AMS、LIS、Cr、BUN、HMGB1、IL-6、MCP-1、TNF-α、Acety-HMGB1、TLR4、Myd88和p-p65的表达增高(P<0.05);与SAP组比较,DCQD组肾脏病理损伤减轻,AMS、LIS、Cr、BUN、HMGB1、IL-6、MCP-1、TNF-α、Acety-HMGB1、TLR-4、Myd88和p-p65的表达降低(P<0.05);与DCQD组比较,r-HMGB1组肾脏病理损伤加重,AMS、LIS、Cr、BUN、HMGB1、IL-6、MCP-1、TNF-α、Acety-HMGB1、TLR-4、Myd88和p-p65的表达增高(P<0.05)。四组间p65表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大承气汤对SAP诱发的肾损伤有保护作用,其作用机制与促进HMGB1去乙酰化修饰,继而抑制HMGB1-TLR-4/NF-κB介导的炎症反应相关。

G蛋白偶联胆汁酸受体1调控机体炎症信号通路的研究进展

G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)与胆汁酸(BAs)及其衍生物结合后,激活下游通路传导,调控动物的多种代谢过程。GPBAR1通过核转录因子κB(NF-κB)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号转导通路,调节动物体炎症反应。因此,本文重点阐述GPBAR1对动物炎症通路的调控进展,为BAs及其衍生物成为治疗炎症性疾病的潜在药物提供参考。

毛蕊异黄酮靶向高迁移率族蛋白1对心肌缺血再灌注损伤大鼠保护作用实验研究

目的:探讨毛蕊异黄酮对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及机制。方法:SPF级SD大鼠,建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型。随机分为四组:假手术组、心肌缺血再灌注损伤组、毛蕊异黄酮低剂量组、毛蕊异黄酮高剂量组。将H9C2细胞分为四组:对照组、缺氧/复氧组、毛蕊异黄酮组、重组高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白组。超声心动图评估大鼠心功能,ELISA法测定心肌标志酶,HE染色观察心肌组织病理变化,TUNEL染色测定心肌组织和H9C2细胞凋亡情况,PPI网络分析毛蕊异黄酮的靶点预测和分子对接,胆囊收缩素八肽(CCK)8检测细胞活力,免疫荧光检测心肌HMGB1的表达量,Western blot检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)和半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)相对表达水平。结果:心肌缺血再灌注损伤组较假手术组左心室舒张阶段末期内径(LVEDD)、左心室收缩阶段末期内径(LVESD)均上调(均P<0.05),而左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)均下调(均P<0.05);心肌纤维断裂,炎性细胞浸润增多;血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白(cTnI)水平显著升高;TUNEL阳性细胞数量升高,Cleaved caspase-3水平上调;HMGB1表达量增加(均P<0.05)。与心肌缺血再灌注损伤组比较,毛蕊异黄酮低、高剂量组LVEDD、LVESD均下调(均P<0.05),而LVEF和LVFS均上调(均P<0.05);心肌组织纤维排列尚规则,炎性细胞数量较少;血清CK-MB、LDH和cTnI水平降低;TUNEL阳性细胞数量降低,Cleaved caspase-3水平下调;HMGB1表达量降低(均P<0.05)。PPI和分子对接显示毛蕊异黄酮与HMGB1能较好的结合。缺氧/复氧组较对照组H9C2细胞TUNEL细胞阳性数量显著升高,Cleaved caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB p65表达上调(均P<0.05)。毛蕊异黄酮组较缺氧/复氧组H9C2细胞TUNEL细胞阳性数量降低,Cleaved caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB p65表达下调(均P<0.05)。而毛蕊异黄酮组基础上给予rHMGB1后,毛蕊异黄酮的保护作用被逆转。结论:毛蕊异黄酮能够明显改善大鼠心肌缺血再灌注损伤,这可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路有关。

耐力训练模型大鼠心肌Toll样受体4/核因子κBp65的表达

背景:急性心肌缺血缺氧可以引起血管紧张素Ⅱ的表达升高,上调心肌细胞Toll样受体4和核因子κB的蛋白表达。Toll样受体4缺乏的小鼠在压力超负荷的情况下心肌肥大程度下降,提示Toll样受体4/核因子κBp65参与了应激和心肌肥大发生、发展过程。目的:通过建立一次急性运动、4周和10周递增负荷运动模型,探讨Toll样受体4/核因子κBp65信号通路在心肌适应性运动过程中的作用。方法:大鼠随机分为3个大组,分别进行一次急性运动、4周耐力训练和10周耐力训练。采用跑台运动方式训练。每个大组划分为4个小组:安静对照组、末次运动后0 h(0 h)、3 h(3 h)、24 h(24 h)取材组。结果与结论:(1)大鼠心肌Toll样受体4蛋白表达在一次急性运动后呈持续高水平表达;4周、10周耐力训练后均出现一过性表达增高,高水平状态的持续时间缩短;(2)核因子κBp65表达在大鼠4周耐力训练后持续性升高,10周耐力训练只能引起末次运动后一过性升高,而运动后24 h组与安静组相比表达降低;(3)肌球蛋白重链1/2/4/6表达在大鼠一次急性运动后呈持续高水平表达,4周耐力训练后也呈持续性升高,10周耐力训练后则只出现一过性升高。结论:运动诱发Toll样受体4/核因子κBp65信号通路激活参与了运动心肌适应过程。

核转录因子κB、Toll样受体和炎性细胞因子在颅内动脉瘤破裂中的表达及相关性

目的探究核转录因子κB(NF-κB)、Toll样受体(TLR)和炎性细胞因子在颅内动脉瘤(IA)破裂中的表达及相关性。方法通过手术收集IA以及IA破裂的动脉瘤组织作为IA组和IA破裂组,同时收集健康血管组织作为对照组。通过qPCR检测动脉瘤组织中NF-κB、TLR4、白细胞介素1β(IL-1β)以及超敏C反应蛋白(hs-CRP)mRNA水平,通过Western blot检测NF-κB和TLR4蛋白水平。酶联免疫吸附法检测各组血清中IL-1β和hs-CRP的水平。结果IA组和IA破裂组动脉瘤组织中的NF-κB、TLR4、IL-1β、hs-CRP mRNA和NF-κB、TLR4蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),此外,IA破裂组动脉瘤组织中的NF-κB、TLR4、IL-1β、hs-CRP mRNA和NF-κB、TLR4蛋白水平显著高于IA组(P<0.05)。IA组和IA破裂组血清IL-1β和hs-CRP显著高于对照组(P<0.05),IA破裂组血清IL-1β和hs-CRP水平显著高于IA组(P<0.05)。结论与IA患者相比,IA破裂患者的动脉瘤组织中具有更高水平的NF-κB、TLR4、IL-1β以及hs-CRP mRNA和蛋白的表达,并且血清中IL-1β和hs-CRP的水平也更高,这说明NF-κB、TLR4、IL-1β以及hs-CRP可能与IA破裂有关。

基于TLR-4/NF-κB信号通路及水通道蛋白1表达探讨大陷胸汤干预重症急性胰腺炎早期肺损伤的效应机制

目的:探讨大陷胸汤对重症急性胰腺炎(SAP)早期肺损伤的影响及作用机制。方法:将60只大鼠随机分为实验组、模型组和对照组,每组20只。实验组予大陷胸汤灌胃,对照组及模型组予蒸馏水灌胃,在连续灌胃7 d后,模型组与实验组以胰胆管注射牛磺胆酸钠的方式制备SAP模型,于造模后12、24、48、72 h各时间点分别处死5只大鼠取材,观察大鼠一般情况、胸腹水量、肺湿干重比、胰腺组织及肺组织病理学改变、肺组织白细胞介素(IL)-1及Toll样受体4(TLR-4)水平、肺组织核因子(NF)-κB及水通道蛋白1(AQP1)表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠一般情况较差,胰腺炎症反应以及肺损伤程度较重,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平升高(P<0.05),肺组织AQP1表达水平下降。与模型组相比,实验组大鼠一般情况较好,肺损伤程度较轻,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平下降(P<0.05),肺组织AQP1表达水平升高,造模后72 h后,胰腺组织坏死程度与同期模型组相比明显好转。结论:大陷胸汤可在一定程度上减轻SAP大鼠早期肺损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB炎症信号通路,增强AQP1表达有关。

半胱氨酰白三烯受体1调节APP/PS1小鼠原代神经元β淀粉样蛋白生成及机制

目的探究半胱氨酰白三烯受体1(CysLT_(1)R)对体外培养的APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠(APP/PSI小鼠)皮质原代神经元β淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及机制。方法①将携带CysLT_(1)R的慢病毒-绿色荧光蛋白载体(LV-CysLT_(1)R-EGFP)或空载体(LV-EGFP)转染至APP/PS1小鼠皮质原代神经元,使神经元过表达CysLT_(1)R(CysLT_(1)R-OE),采用Western印迹法检测神经元CysLT_(1)R蛋白表达水平。②分别以CysLT_(1)R激动剂YM17690(1μmol·L^(-1))单用或与CysLT_(1)R拮抗剂普仑司特(Pran 1μmol·L^(-1))联用处理CysLT_(1)R-OE神经元12 h;采用ELISA检测细胞培养基内Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)水平;Western印迹法检测神经元中淀粉样前体蛋白(APP)、β淀粉样前体蛋白切割酶1(BACE1)、早老素(PS)1和PS2表达水平。以YM17690(1μmol·L^(-1))单用或与Pran(1μmol·L^(-1))联用处理CysLT_(1)R-OE神经元2 h后,采用Western印迹法检测CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基在细胞内的分布。③采用渗透差法在CysLT_(1)R-OE神经元中导入核定位序列多肽(NLS-pep,10 g·L^(-1))竞争性抑制CysLT_(1)R核转位或阴性对照多肽(NON-pep,10 g·L^(-1)),随即以YM17690(1μmol·L^(-1))处理CysLT_(1)R-OE神经元12 h,采用Western印迹法检测CysLT_(1)R激活后细胞培养基内Aβ水平、胞质中APP和BACE1表达水平;以YM17690(1μmol·L^(-1))处理导入多肽后的CysLT_(1)R-OE神经元2 h,采用Western印迹法检测CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基在细胞内的分布。结果①CysLT_(1)R-OE神经元CysLT_(1)R蛋白表达水平较对照组显著增加(P<0.01)。②与CysLT_(1)R-OE组相比,CysLT_(1)R-OE+YM17690组神经元分泌Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)显著增加(P<0.05),胞质中BACE1及细胞核中CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基表达水平显著增加(P<0.05),而神经元中APP,PS1和PS2表达水平无明显改变。YM17690和Pran联用(CysLT_(1)R-OE+YM17690+Pran组)可消除上述改变。③与CysLT_(1)R-OE+YM17690组相比,CysLT_(1)R-OE+NLS-pep+YM17690组CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基在细胞核内的表达水平显著下降(P<0.05),神经元分泌Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)显著下降(P<0.05),胞质中BACE1表达水平下调(P<0.05),APP未见显著改变。结论CysLT_(1)R被激活后,通过上调BACE1表达从而促进Aβ的生成,其机制可能是通过CysLT_(1)R发生核转位并激活NF-κB信号通路介导。

NF-κB对冠心病患者外周血单核细胞LOX-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨核因子-κB(NF-κB)对冠心病患者外周血单核细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA表达的影响。方法分离收集冠心病患者外周血单核细胞,分为3组:对照组在不含血清的RPMI-1640中孵育24h;ox-LDL组在不含血清的RPMI-1640中加ox-LDL(40μg/ml)孵育24h;PDTC(NF-κB抑制剂)组:先加PDTC(10^(-5)mol/L)培育1h之后加ox-LDL(40μg/ml)继续孵育24h,之后收集单核细胞及细胞上清液,采用异硫氰酸胍—酚—氯仿抽提法提取总RNA,扩增目的基因LOX-l,并采用ELISA法测定上清液中sLOX-1蛋白浓度。结果与对照组比较,ox-LDL组单核细胞LOX-1 mRNA表达增加(0.304±0.047vs0.813±0.131,P<0.05),细胞上清液中sLOX-1蛋白含量(ng/ml)增加(7.277±1.979 vs 16.517±2.064,P<0.05);PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达及细胞上清液中sLOX-1蛋白含量均增高(分别为0.502±0.140和11.997±1.757,P<0.05)。与ox-LDL组相比,PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达减少,细胞上清液中sLOX-1蛋白含量显著减少(P<0.05)。结论 ox-LDL可诱导人单核细胞LOX-1表达增加,NF-κB也参与了ox-LDL对LOX-1表达并有促进作用。

膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa单抗通过抑制HMGB1/TLR4途径减轻ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(英文)

观察膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa单抗对小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)病变和HMGB1/TLR4途径基因表达变化的影响,以探讨膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂对As进程的影响及其机制.30只5周龄雄性ApoE-/-小鼠随机均分为3组:溶剂对照组(生理盐水50μl,腹腔注射),IgG对照组(50μg,腹腔注射),GPⅡb/Ⅲa单抗组(50μg,腹腔注射).实验ApoE-/-小鼠均已高脂、高胆固醇饲料喂养,10周后处死动物.油红O染色观察主动脉窦As病变;活体荧光显微镜观察颈总动脉As病变处血小板黏附;Western blot检测HMGB-1、TLR4与NF-κB蛋白的表达;免疫组化观察主动脉窦As病变部位MOMA-2和VCAM-1的表达;ELISA法检测血浆中HMGB-1、IL-1β、TNF-α与MCP-1的含量.研究结果表明:与对照组相比,GPⅡb/Ⅲa单抗组ApoE-/-小鼠As病变和血小板黏附显著减少(P<0.05);且该组小鼠主动脉TLR4与NF-κB蛋白的表达明显降低;其血清中的HMGB-1、IL-1β、TNF-α与MCP-1的水平也明显下降(P<0.05).此外,GPⅡb/Ⅲa单抗治疗显著减少As病变处MOMA-2和VCAM-1的表达(P<0.05).GPⅡb/Ⅲa单抗减轻ApoE-/-小鼠As病变可能与抑制HMGB1/TLR4途径介导的炎症有关.

HMGB1基因敲除通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的 研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因敲除减轻脓毒症小鼠急性肺损伤及抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路的作用。方法 野生型(WT)小鼠分为WT-Sham组和WT-模型组,HMGB1基因敲除(KO)小鼠分为KO-Sham组和KO-模型组。WT-模型组和KO-模型组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症ALI模型,WT-Sham组和KO-Sham组进行假手术操作。造模后24 h,检测动脉血氧分压(PaO_(2)),计算氧合指数(OI),检测肺组织病理改变,计算肺损伤评分,检测血清及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的浓度,肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达。结果 WT-模型组的PaO_(2)、OI、血清及肺组织SOD的浓度低于WT-Sham组,肺损伤评分、血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA的浓度、肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达水平高于WT-Sham组(P<0.05);KO-模型组肺组织中不表达HMGB1,PaO_(2)、OI、血清及肺组织SOD的浓度高于WT-模型组,肺损伤评分、血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA的浓度、肺组织中TLR4、核NF-κB的表达水平低于WT-模型组(P<0.05)。结论敲除HMGB1减轻脓毒症小鼠ALI,相关的分子机制可能是抑制TLR4/NF-κB通路介导的炎症反应和氧化应激反应。

高迁移率族蛋白B1对体外氧糖剥夺/复氧复糖后大鼠脊髓反应性星形胶质细胞不同亚型的作用

背景:脊髓损伤后星形胶质细胞可以活化为A1、A2两种不同亚型的反应性星形胶质细胞,其在基因、分子和功能方面完全不同,对脊髓损伤修复的具体作用也不同。已经证明高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)是脊髓损伤后的重要炎症、免疫因子,可以引起细胞水肿、炎症反应及细胞凋亡等,但其对A1、A2两种反应性星形胶质细胞的影响尚不清楚。目的:观察大鼠脊髓星形胶质细胞经氧糖剥夺/复氧复糖(oxygen-glucose deprivation/restoration,OGD/R)后激活为反应性星形胶质细胞的情况,探索损伤后产生的HMGB1对反应性星形胶质细胞不同亚型的影响及作用机制。方法:培养大鼠脊髓星形胶质细胞至第3代,经过OGD/R处理后观察细胞的形态变化,划痕实验检测细胞的迁移能力,Western blot检测反应性星形胶质细胞的激活情况。抑制HMGB1表达后分为5组:正常组、OGD6 h/R6 h组、HMGB1干扰组、阴性序列组、OGD6 h/R6 h+12μmol/L HMGB1抑制剂丙酮酸乙酯组,Western blot和细胞免疫荧光法检测反应性星形胶质细胞不同亚型特征性蛋白C3、S100A10的表达,划痕实验检测细胞的迁移能力。为探究HMGB1对反应性星形胶质细胞影响的可能机制,分为正常组、OGD6 h/R6 h组、OGD6 h/R6 h+5μmol/L TLR4抑制剂CLI-095组、OGD6 h/R6 h+5μmol/L NF-κB抑制剂BAY 11-7082组,Western blot检测TLR4、NF-κB、C3和S100A10的表达。结果与结论:(1)氧糖剥夺后细胞体积减小,边缘皱缩,迁移能力增加,复氧复糖后,细胞体积增大,活化为A1、A2型反应性星形胶质细胞,OGD6 h/R6 h时S100A10表达最多,OGD6 h/R12 h时C3表达最多(P<0.05);(2)沉默或抑制HMGB1的表达对反应性星形胶质细胞的影响:与OGD6 h/R6 h组相比,抑制HMGB1使C3表达减少(P<0.05),S100A10表达增多(P<0.05),细胞的迁移能力增强;(3)与OGD6 h/R6 h组相比,OGD6 h/R6 h+CLI 095组TLR4表达减少(P<0.05),OGD6 h/R6 h+CLI 095组和OGD6 h/R6 h+BAY 11-7082组NF-κB表达减少,C3表达减少,S100A10表达增多(P<0.05);(4)结果表明,星形胶质细胞在OGD/R后可以活化为2种不同亚型的反应性星形胶质细胞,抑制HMGB1表达可以减少A1型反应性星形胶质细胞,增多A2型反应性星形胶质细胞,细胞迁移能力增加,主要是通过TLR4/NF-κB通路产生影响。

核转录因子NF-κB调节人肾小管上皮细胞SIGIRR表达机制的研究

目的探讨人肾小管上皮细胞(HKC)内核转录因子NF-κB(NF-κB)反馈调控单免疫球蛋白白介素1受体相关蛋白(SIGIRR)表达的分子机制。方法分子克隆法构建pLNCX2-G418-SIGIRR过表达载体,经PT67细胞包装后感染HKC细胞,构建SIGIRR过表达细胞和对照细胞。使用IL-1β诱导,Western blot验证过表达SIGIRR可抑制NF-κB活化。使用NF-κB阻断剂和干涉NF-κB活性后,免疫荧光法验证活化的NF-κB可调控SIGIRR表达。在线工具预测SIGIRR启动子区存在NF-κB结合位点。分子克隆法从人基因组DNA内获取含有结合位点的SIGIRR启动子序列,连接至荧光素酶载体pGL3-Luc,构建pGL3-Luc-SIGIRR,并突变结合位点。使用荧光素酶报告基因实验和染色质免疫沉淀技术(ChIP)共同验证活化的NF-κB可结合在SIGIRR启动子区调控SIGIRR基因的表达。结果构建的pLNCX2-G418-SIGIRR逆转录病毒载体经酶切、测序验证后对比SIGIRR基因编码序列完全一致,重组体和对照载体经病毒包装后转入HKC细胞后成功构建HKC/SIGIRR实验组和HKC/Co对照组细胞系,在mRNA和蛋白水平的SIGIRR表达差异有统计学意义(P<0.05,P<0.001)。过表达SIGIRR细胞组相比对照组细胞可以减少IL-1β诱导的NF-κB的活化(P<0.001),抑制NF-κB活化和干涉NF-κB表达后,SIGIRR的表达出现下调。提取人基因组DNA后,分子克隆法获得SIGIRR目的启动子序列连接至载体,成功构建pGL3-Luc-SIGIRR荧光素酶载体并定点突变载体,经酶切和测序验证与目的序列完全一致。通过荧光素酶报告基因实验和CHIP实验证实NF-κB可结合SIGIRR启动子区域,调控SIGIRR表达。结论HKC细胞中SIGIRR可以影响NF-κB的活化,活化的NF-κB可以结合到SIGIRR的启动子区域,调控SIGIRR的基因表达变化,形成一个反馈体系,控制NF-κB的过度活化。

血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗脓毒症并发急性肺损伤的效果及对HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗脓毒症合并急性肺损伤的临床效果及对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 采用随机数字表法将2022年1—12月接受治疗的140例脓毒症并发急性肺损伤患者分为研究组70例和对照组70例。2组均按指南给予基础治疗,在此基础上研究组给予血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗,对照组给予血必净注射液治疗,2组疗程均为2周。比较2组临床疗效,治疗前后血清HMGB1、TLR4及NF-κB水平,血清炎性因子水平,并记录2组不良反应。结果 治疗后研究组总有效率为91.43%(64/70)优于对照组的75.71%(53/70)(P<0.05)。治疗后2组血清HMGB1、TLR4、NF-κB、超敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、降钙素原水平均降低,且研究组低于对照组(P<0.05,P<0.01)。2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗脓毒症并发急性肺损伤患者临床效果较好,可有效降低血清HMGB1、TLR4、NF-κB和炎性因子水平,且安全性较高。

基于HMGB1通路的盐酸戊乙奎醚对脑梗死的保护效应

目的:探究基于HMGB1通路的盐酸戊乙奎醚对脑梗死的保护效应。方法:取50只SD雄性大鼠分组探讨PHC治疗脑梗死的最佳剂量及效果,并探究HMGB1通路的作用。结果:PHC干预可减轻神经细胞损伤,效果与剂量相关。与假手术组相比,模型组和PHC组多项指标异常;而与模型组相比,PHC组指标改善,且与剂量相关。抑制HMGB1与PHC高剂量效果相同,可改善脑组织炎症和氧化应激,降低蛋白表达。PHC治疗与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路相关,联合抑制可增强效果。结论:PHC对脑梗死大鼠具有保护作用,抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路,下调炎症因子表达。

运动性骨骼肌损伤中时钟基因BMAL1与MyoD的作用

背景:一次大负荷运动后会引起肌联蛋白titin降解导致骨骼肌损伤,成肌调节因子家族MyoD参与骨骼肌生成,在骨骼肌损伤修复中发挥重要的作用。目的:观察一次大负荷运动不同时相下骨骼肌MyoD、时钟基因BMAL1与titin表达变化,以期明确BMAL1与MyoD在运动诱导骨骼肌损伤中的作用。方法:24只8周龄SD大鼠随机分为安静对照组(n=4)和运动组(n=20)。运动组大鼠于跑台进行90 min下坡跑,运动后即刻(0 h)及运动后12,24,48,72 h取比目鱼肌。通过实时荧光定量PCR实验检测BMAL1、MyoD的mRNA表达量;透射电镜观察骨骼肌肌纤维超微结构变化;免疫荧光观测MyoD与BMAL1、BMAL1与titin的定位情况。结果与结论:①透射电镜显示:一次大负荷离心运动后,大鼠比目鱼肌部分位置肌节变宽,Z线模糊不清呈水波状,其中运动后12 h损伤最为严重,72 h后基本恢复;②实时荧光定量PCR检测显示:运动组BMAL1的mRNA表达呈现先升高,后趋于正常的状态;MyoD的mRNA表达呈现先下降、后升高的趋势;③免疫荧光观测:运动组可在12,24 h观测到BMAL1和MyoD的共定位;可在0,12,24 h观测到BMAL1和titin的共定位;④结果表明,MyoD与BMAL1共同参与运动性骨骼肌损伤的修复,可能是通过titin进行的。