芳香化酶抑制剂对暗纹东方鲀CYP19A、DMRT1基因表达及性腺分化的影响

采用组织学和分子生物学方法,研究了投喂芳香化酶抑制剂来曲唑(LE)后暗纹东方鲀(Takifugu obscures)初孵仔鱼CYP19A、DMRT1基因表达以及性腺的组织学变化,以期进一步了解P450芳香化酶(P450arom)在鱼类早期性别分化过程中的作用。RT-PCR结果显示,对照组样品CYP19A和DMRT1表达显示性二态,雌性表达CYP19A基因,雄性表达DMRT1基因。LE处理组在性别分化期间,雄性样品单一表达DMRT1,雌性样品则同时表达CYP19A和DMRT1。qRT-PCR结果显示:LE处理组雌性仔鱼CYP19A基因表达被显著抑;虽然在仔鱼出膜后22d(dph)的表达水平高于9 dph,但仅为同日对照组的2.11%。LE处理组雌性样品22 dph时DMRT1基因表达量上调,至150 dph时达对照组雄性水平。55 dph的性腺组织学结果表明,LE处理可导致暗纹东方鲀稚鱼原始卵巢退化,并向功能性精巢发育。150 dph的LE处理组性腺均为精巢,并与对照组精巢发育同步。结论认为,暗纹东方鲀性腺分化期间P450arom是卵巢形成和维持发育所必须的,抑制P450arom活性可导致雌性暗纹东方鲀发生雄性化逆转。

CYP19基因表达与芳香化酶活性调控因子的研究进展

芳香化酶是雌激素合成中的关键酶,催化睾酮和雄烯二酮转化为雌激素。本文在对芳香化酶的蛋白结构、基因特征和分布进行阐述的基础上,重点对编码该蛋白的CYP19基因的调控因子以及芳香化酶活性的调节进行探讨。CYP19基因的调控因子包括cAMP反应元件(CRE)、类固醇生成因子1/肾上腺4结合蛋白(SF-1/Ad4BP)、雌激素受体(ER)等顺式作用因子和TATA结合蛋白(TBP)、生长因子等反式作用因子。主要通过cAMP依赖性蛋白激酶信号通路在转录水平对其进行调节。而芳香化酶表达及其酶活性的调控因子主要集中于性类固醇激素和促性腺激素,此外还受到温度等外部因子等因素的调节。芳香化酶的调节对维持雌雄激素间作用的平衡、保证机体的正常生理功能具有重要意义。

人雄激素芳香化酶基因(CYP19)结构及其表达调控研究进展

人雄激素芳香化酶与乳腺癌的发生和发展密切相关．综述了编码该酶的ＣＹＰ１９基因的结构、独特的组织特异性表达和调控ＣＹＰ１９基因表达的各种因素及其有关的调控机制．

CYP19基因及其产物芳香化酶P450与雌激素依赖性疾病

芳香化酶P4 5 0 (aromatasecytochromep4 5 0 ,P4 5 0arom)是雄激素转化为雌激素的限速酶 ,不仅存在于全身多种正常组织中 ,而且也存在于许多雌激素依赖性肿瘤组织中。CYP19基因是P4 5 0arom的编码基因 ,它的组织特异性表达决定了P4 5 0arom在各组织中发挥其不同的生理或病理作用。本文就CYP19基因和P4 5 0arom的结构、功能及其与雌激素依赖性疾病的关系作以综述。

翘嘴鳜性腺型芳香化酶基因CYP19a的克隆及表达研究

采用同源克隆与SMART RACE技术首次分离和克隆了翘嘴鳜性腺型芳香化酶基因CYP19a的c DNA全长,并通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q PCR)技术分析了其在翘嘴鳜成体不同组织及性腺不同发育时期的表达特点。序列分析结果显示,CYP19a基因全长1 873 bp(Gen Bank登录号为KX911988),其中开放阅读框长1 581 bp,编码526个氨基酸。通过多序列比对,发现该基因编码的蛋白质具有P450arom A特定的功能保守序列,包括I-螺旋区、Ozol肽区、亚铁血红素结合区域以及芳香化酶特异性结合区域;同时,CYP19a基因序列的同源性分析结果显示,其在脊椎动物中较为保守。此外,q PCR检测结果显示,CYP19a基因在翘嘴鳜成体组织中的表达存在显著差异(P<0.05),主要在性腺中表达,其次在脑和肝脏有少量表达;而且CYP19a基因在繁殖期性腺中的表达量显著低于非繁殖期性腺中的表达量(P<0.05)。以上研究表明,CYP19a基因在鱼类性腺形成及发育过程中具有重要作用。

CYP19A1基因突变致芳香化酶缺乏症1例

芳香化酶缺乏症(aromatase deficiency,AD)是一种罕见的芳香化酶基因(CYP19A1)失活突变引起的常染色体隐性遗传病,导致先天性雌激素缺乏综合征。AD患者的母亲在妊娠期以及女性胎儿出生时均可出现男性化表现,而男性患者通常在成年后因身高持续增长和代谢异常才得以诊断。2019年中南大学湘雅二医院收治了1例AD患者,该患者为37岁成年男性,成年后仍持续生长,其雌二醇低于可测线、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)升高、骨龄落后、骨骺未闭合、骨量减少,CYP19A1基因检测示c.1093C>T,p.R365W纯合子突变。该病临床较罕见,临床医生需提高对该病的认识,早期诊断和治疗,以改善患者的长期预后。

芳香化酶抑制剂来曲唑对胡子鲇性腺分化及相关基因表达的影响

采用组织学和荧光实时定量PCR方法,检测饲喂不同剂量芳香化酶抑制剂来曲唑(letrozole,50、100和200μg/g)对胡子鲇(Clarias fuscus)性腺组织学和性别比率的影响,以及200μg/g来曲唑对性分化前后脑型芳香化酶基因(Cyp19a1b)和翼状螺旋/叉头转录因子2(Foxl2)基因表达的影响,结果表明,50μg/g剂量的来曲唑对胡子鲇性腺分化无显著影响;但100μg/g和200μg/g剂量的来曲唑可促进胡子鲇精巢分化,抑制卵巢分化,卵巢腔最早出现时间和初级卵母细胞出现时间均分别推迟3 d和6 d,而初级精母细胞最早出现时间则分别提前2 d和5 d,且雄性率分别达65.8%和71.3%,显著高于50μg/L组和对照组(P<0.05)。胡子鲇性腺分化前(出膜后12 d),Cyp19a1b和Foxl2基因即开始表达,性腺分化前后Cyp19a1b相对表达量无显著差异(P>0.05),但Foxl2相对表达量则随性分化而逐渐降低,且来曲唑显著抑制性腺分化过程中Cyp19a1b和Foxl2的表达(P<0.05)。结果表明,100μg/g以上剂量的来曲唑可有效诱导胡子鲇分化为雄性;Cyp19a1b可能不直接参与胡子鲇性腺分化,但Foxl2直接参与此过程。

稀有鮈鲫脑芳香化酶cDNA片段的克隆与表达分析

芳香化酶(P450arom)是雌激素合成过程中的关键酶,在性别分化中起重要作用。鱼类存在卵巢性和脑型两种芳香化酶,分别由Cyp19a和Cyp19b编码。稀有鮈鲫作为我国特有的实验动物,尚无其芳香化酶的有关资料,其性别分化机制亦不清楚。本研究采用RT-PCR的方法以简并引物扩增了稀有鮈鲫脑型芳香化酶基因Cyp19b的部分序列,其长度为1070bp,编码357个氨基酸残基,具有典型的芳香化酶结构域。RT-PCR分析发现该基因主要在稀有鮈鲫的脑中表达,在性腺、肠、肾中也有表达;其在雌、雄脑中的表达差异不显著。在胚胎发育阶段,Cyp19b的表达从囊胚期开始,至神经胚期达到较高水平,随后下降,孵化期又有所增强,孵化10d后维持在高水平。这些结果说明Cyp19b以脑中表达为主,可能在稀有鮈鲫神经系统发育和脑的性别分化中有重要作用。

芳香化酶基因表达调控与乳腺癌关系的研究进展

芳香化酶是绝经后乳腺局部雌激素生成的限速酶,其编码基因CYP19的结构、功能和表达具有组织特异性。在多种调控因素影响下,该基因通过选择性利用不同的启动子及相应的外显子Ⅰ进行组织特异性调节,影响芳香化酶表达。CYP19基因表达在正常的乳腺组织中主要是通过启动子PⅠ.4,起决定作用的外显子Ⅰ是1b;在癌变组织则主要是启动子PⅡ、PⅠ.3,变为外显子1c占主导地位。CYP19基因的特异性表达为从基因水平治疗乳腺癌提供了理论基础。

P450芳香化酶与多囊卵巢综合征

P450芳香化酶是雄激素转化为雌激素的限速酶,其表达具有组织特异性,在不同的组织中转化不同的底物,产生不同活性的雌激素,P450的表达受多种调节因子的作用,多囊卵巢综合征患者卵巢中P450芳香化酶的表达异常的,造成卵巢激素分泌紊乱,影响卵泡成熟和排卵,但是多囊卵巢综合征妇女卵巢中芳香化酶的表达缺陷还是亢进尚无定论,寻找调节P450芳香化酶的特异蛋白也是未来的研究方向之一,就P450芳香化酶在多囊卵巢综合征中的表达及影响因素作综述。

芳香化酶与子宫内膜癌

芳香化酶是雌激素合成的关键酶,肿瘤组织内的芳香化酶在将肾上腺和/或卵巢来源的雄激素转化为雌激素的过程中发挥了重要作用。子宫内膜癌的发生、发展与局部产生的雌激素有关。就芳香化酶的基因表达、调控及其在子宫内膜癌中的表达和芳香化酶抑制剂在子宫内膜癌中的应用作综述。

芳香化酶抑制通过降低抗氧化应激能力影响稳转hSOD1-G93A的NSC-34细胞活力

目的 研究抑制芳香化酶表达对稳定转染人SOD1-G93A (hSOD1-G93A)的NSC-34细胞活力的影响并探讨可能的机制。方法 将稳定转染hSOD1-G93A的NSC-34细胞分为三组,分别为对照组(SOD-G93A)、转染空质粒组(SOD1-G93A-E)、转染芳香化酶抑制质粒Cyp19a1 ShRNA组(SOD1-G93A-D)。通过实时定量PCR检测Cyp19a1 mRNA表达水平,通过CCK8试剂盒检测各组细胞活力,通过LDH试剂盒检测各组细胞LDH释放水平,通过蛋白印迹法检测各组细胞中芳香化酶(aromatase)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase1,NQO1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)表达水平。结果 瞬时转染48h后,SOD1-G93A-D组Cyp19a1 mRNA表达水平较SOD1-G93A-E组显著下降(P<0.05),细胞活力较SOD1-G93A-E组及SOD1-G93A组明显下降(P<0.05),LDH释放水平较其他两组明显升高(P<0.05)。细胞活力及LDH释放水平在SOD1-G93A-E组及SOD1-G93A组间未发现显著差异(P>0.05)。芳香化酶、NQO1和GCLM蛋白水平在SOD1-G93A-D组明显降低(P<0.05)。结论 抑制芳香化酶通过降低抗氧化应激能力影响稳转hSOD1-G93A的NSC-34细胞活力。

奥美拉唑对HepG2细胞中CYP2C19酶表达及活性的影响

目的 研究奥美拉唑（omeprazole）对Hep G2细胞CYP2C19酶表达及活性的影响,间接反映奥美拉唑和氯吡格雷联合用药是否存在药物的相互作用。方法 通过MTT实验筛选出奥美拉唑对Hep G2细胞的无毒浓度。采用实时定量PCR（Q-PCR）及Western印迹法检测奥美拉唑（浓度分别为0、0.1、1和10 mg/L）对Hep G2细胞中CYP2C19在m RNA和蛋白水平上表达的影响。奥美拉唑（0、0.1、1、10和100 mg/L）与表达人CYP450同工酶和人CYP450还原酶的昆虫细胞的微粒体共同孵育,在体外水平上通过荧光强度的变化分析对CYP2C19酶活性的影响。结果 奥美拉唑对Hep G2细胞无毒性的浓度范围为0~10mg/L。在m RNA及蛋白表达水平上,奥美拉唑各浓度组均抑制CYP2C19酶的表达,且具有浓度依赖性。酶活性检测表明,当奥美拉唑的浓度达到10、100 mg/L时,荧光强度明显减弱,表明高浓度奥美拉唑抑制CYP2C19酶的表达。结论 奥美拉唑能降低Hep G2细胞色素氧化酶CYP2C19的表达,并抑制其活性,提示奥美拉唑与其他需经过CYP2C19酶代谢才能转化为活性代谢产物的药物（氯吡格雷）联用时,有可能会出现药效抵抗现象。

甘遂与甘草合用对大鼠肝药酶CYP1A2、CYP2C19和CYP2E1的影响

“十八反”则告诫人们,甘遂（Euphorbia kansui,EK）与甘草（Glycyrrhiza uralensis,GU）相对立不宜伍用.但有学者认为,反药同用能相反相成,产生较强的功效.故一直以来,甘遂与甘草组合在临床上仍有广泛的应用[1-3].近年来,中药用药的安全性问题越来越受到重视,阐明“反”的机制,已成为中医药理论自身发展的必然要求.药物相互作用中最常见的原因是CYP450的诱导和抑制[4-5].

广州地区肝酶CYP2C19基因型人群调查

目的 了解广州地区人群CYP2C19基因多态性分布情况。方法 采用聚合酶链式反应结合限制性内切酶技术 (PCR -RFLP) ,分析该地区 15 5例健康志愿者的基因型 ,含酶切位点者 ,被切成两个片段为野生型纯合子 (Wt/Wt) ,即药物强代谢型 (EM) ;不含酶切位点者不能被酶切 ,为突变型纯合子 (m/m) ,即弱代谢型 (PM) ;部分酶切者为突变型杂合子 (Wt/m)。结果 弱代谢 (PM)发生率为 15 5 % (2 4 / 15 5 ) ,强代谢 (EM)为 84 5 % (131/ 15 5 ) ,其中野生型纯合子 (Wt/Wt)为 36 8% (5 7/ 15 5 ) ,杂合子 (Wt/m)为 4 7 7% (74 / 15 5 )。结论 等位基因存在两种点突变形式m1和m2 ,国人弱代谢基因型 (m/m)和强代谢基因型杂合子 (Wt/m)均显著高于西方人种 ,强代谢基因型中杂合子 (Wt/m)明显多于纯合子 (Wt/Wt) ,这可能是质子泵抑制剂疗效个体差异的重要原因。

药物代谢酶CYP2D6和CYP2C19的基因多态性与个体化治疗

药物代谢酶的活性高低是决定药物代谢强度和持久性的主要因素。参与药物代谢的酶主要有细胞色素P450（cytochromep450，CYP450）同工酶、N-乙酰转移酶（N．acefyltransferase，NAT）、醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase，ADH）和酯酶（esterase）等，而在众多代谢酶中，CYP450酶起着非常重要的作用，它可代谢降解大约40％～50％的药物。CYP450酶又称混合功能氧化酶或单加氧酶，是一种以血红蛋白为辅基的B族细胞色素超家族蛋白酶，广泛存在于动物、真核有机体、植物、真菌和细菌中，是必不可少的结构酶。

肝药酶CYP2C19基因多态性与氯吡格雷及质子泵抑制剂药物相互作用的研究进展

氯吡格雷是目前临床用于抗血小板聚集最重要的药物之一,质子泵抑制剂（PPI）亦是近年来治疗酸相关性疾病最有效的药物。CYP2C19基因多态性与PPI、氯吡格雷的药效学、药代动力学密切相关,对临床治疗有重要的现实意义。

肝药酶CYP2C19基因多态性与抗抑郁药所致肝功能改变的关系

目的:探讨肝药酶CYP2C19基因多态性与抗抑郁药所致肝功能改变的关系。方法:检测35例应用抗抑郁药稳定剂量(符合临床诊疗指南推荐剂量)持续2周的患者CYP2C19基因多态性及治疗前后各项肝功能指标,并进行各基因型肝功能指标变化的比较。结果:35例患者中,CYP2C19基因型为快代谢型8例,中代谢型26例,慢代谢型1例。入组者肝功能指标基线均在正常范围;治疗2周后血清碱性磷酸酶(ALP)(P=0. 016)、总蛋白(TP)(P=0. 025)、总胆红素(TBIL)(P=0. 029)、直接胆红素(DBIL)(P=0. 035)水平明显下降;丙氨酸氨基转移酶(ALT)/天冬氨酸氨基转移酶(AST)(P=0. 032)、前白蛋白(PA)(P=0. 16)水平显著升高;各代谢型间治疗前后肝功能各项指标差值比较差异无统计学意义。结论:肝药酶CYP2C19基因多态性可能与抗抑郁药所致肝功能改变无关。

烷化剂环磷酰胺和异环磷酰胺对大鼠肝微粒体CYP2C19酶活性的影响

目的探讨烷化剂环磷酰胺和异环磷酰胺对CYP2C19酶活性的影响,为临床合理用药提供理论依据。方法利用高效液相色谱法测定大鼠体外培养体系中肝微粒体CYP2C19酶的活性,以5-羟基奥美拉唑(5-OHOMZ)与奥美拉唑(OMZ)的比值表示,比较加入和不加入环磷酰胺和异环磷酰胺CYP2C19酶活性的变化。结果加入环磷酰胺与异环磷酰胺时,CYP2C19酶活性分别降低20.7%±3.47%、12.63%±6.32%。结论环磷酰胺与异环磷酰胺对CYP2C19酶活性具有较显著的抑制作用,故应注意代谢性相互作用对药物疗效的影响,以达到临床合理用药的目的。