N-甲基芸香碱通过调控ERK通路诱导人胶质母细胞瘤细胞凋亡和自噬

目的:已知红树林相关植物能够产生具有抗肿瘤活性的天然化合物。尽管这些化合物具有潜在的治疗价值,但其抗肿瘤作用的分子机制尚需阐明。本研究侧重探讨一种来源于红树林相关植物大管[Micromelum falcatum(Lour.)Tan.]的生物碱N-甲基芸香碱对人胶质母细胞瘤U87细胞的影响。方法:从大管茎皮中分离得到15种化合物。其中,N-甲基芸香碱被筛选用于评估其对U87细胞生长的抑制作用。采用划痕实验、Hoechst 33342/PI染色和蛋白免疫印迹等多种方法,研究了该化合物对细胞迁移、凋亡以及与自噬相关的蛋白的影响。结果:N-甲基芸香碱在24 h内抑制了U87细胞的迁移活动,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加,促使U87细胞发生凋亡,同时提高了U87细胞中自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I的比值。此外,在N-甲基芸香碱处理细胞后,发现ERK信号通路被下调。结论:N-甲基芸香碱能够诱导U87细胞的凋亡和自噬性细胞死亡,从而抑制细胞生长,这种效应似乎与ERK信号通路有关。

毛果芸香碱减轻对乙酰氨基酚所致肝损伤的作用及机制研究

目的 研究毛果芸香碱减轻对乙酰氨基酚(Acetaminophen, APAP)所致肝损伤的作用及机制。方法 采用小鼠腹腔注射APAP建立急性肝损伤模型,将18只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、APAP模型组、毛果芸香碱组,每组6只。毛果芸香碱组小鼠腹腔给药毛果芸香碱(2.5 mg/kg体重)7 d,末次给药1 h后,APAP模型组和毛果芸香碱组腹腔注射APAP(400 mg/kg体重),空白对照组腹腔注射等量生理盐水,APAP注射后12 h处死所有小鼠,采集血液和肝脏等组织样本。血清生化检测仪检测血清肝功指标天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase, AST)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase, ALT),采用HE染色方法检测肝脏病理评估毛果芸香碱对APAP诱导肝损伤的药效作用;Western blot方法检测肝脏增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)及细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases1/2, ERK1/2)蛋白表达,探索肝细胞增殖作用及其可能的机制。结果 与空白对照组比较,APAP模型组小鼠的ALT和AST含量均显著升高(P<0.001),表明APAP模型建立成功;与APAP模型组比较,毛果芸香碱组小鼠血清AST含量显著降低(P<0.01),ALT含量无统计学差异(P>0.05)。HE染色病理学结果显示,与空白对照组比较,APAP模型组小鼠肝脏出现肝小叶中心坏死、肝内出血和细胞核消失或固缩;与APAP模型组比较,毛果芸香碱组小鼠改善了肝小叶中心坏死、肝内出血和细胞核固缩。Western blot结果显示,与空白对照组和APAP模型组比较,毛果芸香碱组小鼠肝脏PCNA蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);与空白对照组和APAP模型组比较,毛果芸香碱组小鼠p-ERK/ERK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 毛果芸香碱能减轻APAP所致肝损伤,其分子机制可能是毛果芸香碱通过激活肝细胞中m3AchR-ERK1/2信号通路进而促进肝细胞增殖来发挥作用。

毛果芸香碱对映体的毛细管电泳手性分离

采用 β_环糊精及其衍生物作为手性选择剂对毛果芸香碱对映体进行了分离 ,研究了环糊精类型和浓度对分离的影响 ,同时考察了背景电解质 pH、操作电压和温度等因素对对映体分离的影响 ;结果表明 ,采用羟丙基_β_环糊精 (HP_β_CD)可以使毛果芸香碱对映体达到基线分离 ,优化条件下手性分离度可达2.79,为此类药物提供了一种简便、快速的毛细管电泳手性分离分析方法。

原发性闭角型青光眼毛果芸香碱脂质体治疗的研究

目的研究1%毛果芸香碱脂质体对原发性闭角型青光眼的疗效和不良反应。方法原发性闭角型青光眼60例60只眼,其中对照组30例,30只眼;试验组30例,30只眼。用药前后,测量眼压及瞳孔直径,检查房角以及视力、结膜、角膜、前房、虹膜、瞳孔、晶体、眼底,A型超声测量前房深度、晶体厚度、眼轴,同时记录患者的自觉症状。1%毛果芸香碱滴眼液(对照组):每次滴眼1滴,约50μL,1d 4次;1%毛果芸香碱脂质体滴眼液(试验组):每次滴眼1滴,约50μL,1d 2次。结果2组患者性别、年龄、用药前眼压、瞳孔直径经统计学检验P>0.05,差异无显著性。2组患者滴药后各时间段的眼压均下降与用药前相比,差异有显著性(配对t检验,P<0.05);滴药后各时间段2组患者眼压相比,试验组眼压下降明显,差异有显著性(独立样本t检验,P<0.05)。2组患者滴药后各时间段的瞳孔值与用药前相比,瞳孔均有缩小,差异有显著性(配对t检验,P<0.05);滴药后各时间段2组瞳孔值相比,试验组瞳孔值小,差异有显著性(独立样本t检验,P<0.05)。每组用药前后以及2组患者用药前后前房深度、晶体厚度及眼轴长度,经统计学检验,无差异。脂质体组有7例发生滴药后短暂的表面刺痛感,2组未发现其他眼部和全身的不良反应。结论毛果芸香碱脂质体滴眼液应用于原发性闭角型青光眼的治疗,能减少滴眼次数,有效地控制眼压。

毛果芸香碱和布林佐胺滴眼液对兔眼表组织的影响

目的:探讨抗青光眼药物毛果芸香碱和布林佐胺滴眼液及各自的防腐剂三氯叔丁醇和氯化苯甲烃胺(BAC)对兔眼表组织的影响。方法:选取新西兰大白兔15只,分为正常对照组(3只)、毛果芸香碱组(A组,6只)和布林佐胺组(B组,6只)。用药组右眼使用青光眼药物毛果芸香碱或布林佐胺滴眼液,左眼使用对应的防腐剂三氯叔丁醇或BAC,连续用药30d。取球结膜组织行苏木素-伊红(HE)染色计数结膜上皮层炎症细胞数;角膜行扫描电镜检测并进行上皮损害分级评分。结果:与正常对照组比较,布林佐胺滴眼液(P<0.01)和防腐剂BAC(P<0.01)导致球结膜上皮层炎症细胞浸润增多;毛果芸香碱滴眼液(P>0.05)和三氯叔丁醇(P>0.05)引起的球结膜炎症细胞增多不明显。布林佐胺滴眼液导致球结膜炎症细胞增加的程度较毛果芸香碱滴眼液严重(P<0.01)。青光眼药物和防腐剂均可导致兔角膜上皮超微结构的损伤,表现为角膜上皮细胞六边形结构变为不规则、边界不清、细胞膜皱缩、细胞间距增宽、上皮细胞表面的微绒毛丢失、细胞空洞和暗细胞增加。布林佐胺滴眼液和BAC引起的角膜损害较毛果芸香碱滴眼液(P<0.01)和三氯叔丁醇明显(P<0.05)。各组左右两眼的球结膜炎症细胞数和角膜损害评分均无显著差异。结论:布林佐胺滴眼液和防腐剂BAC使用1个月后可导致兔球结膜炎症细胞增加和角膜上皮细胞损伤,毛果芸香碱滴眼液和三氯叔丁醇主要引起角膜上皮超微结构的变化;防腐剂是引起眼表损伤的主要原因。布林佐胺滴眼液对兔眼表的损伤较毛果芸香碱滴眼液严重。

硝酸毛果芸香碱缓释滴眼液的研制及临床应用

硝酸毛果芸香碱（匹罗卡品）用于治疗青光眼，由于其疗效确切，使用至今已有上百年的历史［１］。但目前在临床上使用的主要剂型仍为水溶液。由于眼内不易滞留药物，因而点药次数甚多，尤给需长期应用该药治疗的患者带来颇多不便。为克服此类缺陷，我们经多次实验，在原硝...

0．004％曲伏前列腺素滴眼液和2％毛果芸香碱滴眼液联合应用对正常兔降眼压效果的评价

背景拟胆碱能药物和前列腺素类似物分别用于治疗原发性闭角型青光眼和开角型青光眼的临床效果已被证实，临床上二者常联合用药治疗青光眼，但理论上二者对睫状肌的作用机制是相背离的，因此有必要对二者联合用药的效果和作用机制进行进一步探讨。目的观察联合应用质量分数0．004％曲伏前列腺素和质量分数2％毛果芸香碱的降眼压效果。方法将正常无色素兔30只以随机数字表法随机分为毛果芸香碱组、曲伏前列腺素组和联合用药组3个组，每只兔任意选择一侧眼作为实验眼，分别每日3次点用2％毛果芸香碱滴眼液或每晚1次0．004％曲伏前列腺素滴眼液，联合用药组按上述用法同时点用上述两种药物；对侧眼点用生理盐水为对照眼。各组动物于用药前1d 8：00时以Perkins手持式压平眼压计测量双眼眼压作为基线眼压，并分别于用药后第1、2、4、8、14和24天的8：00时测量双眼眼压，以点眼前后眼压的变化作为主要观测指标。结果毛果芸香碱组、曲伏前列腺素组和联合用药组点眼后1d的眼压均明显低于基线眼压，而对照眼点眼前后眼压无明显变化；各实验眼治疗后各时间点间眼压无明显变化。毛果芸香碱组、曲伏前列腺素组和联合用药组实验眼眼压在点眼前与对照眼相比无明显差异，但点眼后均明显低于对照眼，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与各组基线眼压比较，毛果芸香碱组、曲伏前列腺素组和联合用药组的实验眼眼压分别降低了17．5％～22．0％、23．8％～26．4％和27．6％～32．0％。对正常眼来说，联合用药组降眼压作用最强，其次依次为曲伏前列腺素和毛果芸香碱。结论联合用药的降眼压效果比单独点用毛果芸香碱和曲伏前列腺素的效果要好，但小于单独滴用毛果芸香碱和曲伏前列腺素的降眼压幅度之和。

毛果芸香碱脂质体的制备及其质量评价

目的:研究毛果芸香碱脂质体滴眼剂的处方和制备工艺,并对其质量进行评定。方法:采用逆相蒸发法制备毛果芸香碱脂质体,以包封率为指标通过正交试验法优选处方,用透射电镜和粒径测定仪测定脂质体的形态和粒径分布,用高效液相色谱法测定脂质体中毛果芸香碱的含量和包封率。结果:制备的脂质体形态归整,数均粒径为69.5nm,药物包封率为47.42%,体外药物释放时间明显延长,8h时释放94.12%。结论:本研究所得的处方和工艺可制备性能优良的毛果芸香碱脂质体。

M_3受体激动剂毛果芸香碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究M3受体激动剂毛果芸香碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用Langendorff灌注系统,建立离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。观察毛果芸香碱5μmol.L-1对复灌后冠脉流量、心肌丙二醛(MDA)含量、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性和心肌梗死面积的影响。结果毛果芸香碱改善缺血再灌注后的冠脉流量,其中5 min(P<0.01)和10min(P<0.05)的冠脉流量增加显著;降低心肌MDA含量(P<0.05)并提高心肌SOD活性(P<0.05);缩小心肌梗死面积(P<0.05)。上述作用可被选择性M3受体阻断剂4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide(4-DAMP)3 nmol.L-1所逆转。结论M3受体激动剂毛果芸香碱通过激动心肌M3受体而对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤起保护作用。

联合毛果芸香碱滴眼液治疗眼外伤房角后退继发性青光眼

目的探讨联合毛果芸香碱滴眼液治疗外伤引起房角后退继发性青光眼的临床疗效。方法回顾性分析山东省眼科医院2007年8至2012年7收治12例(12只眼)眼外伤房角后退继发性青光眼患者的临床资料,患者均有眼球钝挫伤史且超生生物显微镜(UBM)和前房角镜检查可见外伤眼有不同程度的房角后退,入院眼压为(48.50±3.10)mm Hg,瞳孔直径为(5.15±0.70)mm。治疗:积极治疗原发性损伤,控制炎症,口服及静脉给予降眼压药物联合局部应用0.5%马来酸噻吗洛尔滴眼液、1%布林佐胺滴眼液、酒石酸溴莫尼定滴眼液降眼压治疗3～5 d,眼压不再下降,记录眼压为(35.00±3.55)mm Hg,此时加用0.5%毛果芸香碱滴眼液每日4次。详细记录患者治疗转归,观察眼压变化。结果加用毛果芸香碱眼滴眼液24 h后眼压为(21.90±3.87)mm Hg,平均下降(13.10±1.10)mm Hg。治疗前后瞳孔直径缩小(2.10±0.31)mm。4例患者最终逐渐减量药物致停,眼压正常;8例患者眼压降低后行小梁切除术控制眼压。结论毛果芸香碱滴眼液可以应用于眼外伤房角后退继发性青光眼患者,在减轻炎症的的基础上,联合应用毛果芸香碱滴眼液能够有效的降低眼压。

毛果芸香碱防止Nd∶YAG激光虹膜切除术后眼压升高

目的:了解毛果芸香碱是否能有效降低棕色虹膜人种激光虹膜切除术后眼压急性升高。方法:原发性闭角型青光眼48例58眼,按年龄、性别进行匹配,分为治疗组和对照组。治疗组术前30min和术后即刻滴用20g/L毛果芸香碱,对照组滴用安慰剂。术后0.5,1.0,1.5,2.0,3.5h观察眼压和其他情况。结果:激光治疗后,治疗组和对照组眼压最大升高值分别为0.62±0.67kPa(1kPa=7.5mmHg)和1.13±0.87kPa,两组间差异有显著性(P=0.03)。治疗组的眼压明显下降发生于Nd∶YAG激光虹膜切除术后0.5,1.0和1.5h。除治疗组激光虹膜切除术后瞳孔直径明显小于对照组外,未见其他眼部和全身的副作用。结论:20g/L毛果芸香碱在棕色人种中可以有效地防止Nd∶YAG激光虹膜切除术后眼压升高。

1%毛果芸香碱脂质体滴眼液对兔眼的缩瞳作用

目的对比研究1%毛果芸香碱脂质体滴眼液与1%毛果芸香碱滴眼液对兔眼的缩瞳作用。方法家兔18只,随机分为实验组、阳性对照组、阴性对照组。实验组应用1%毛果芸香碱脂质体滴眼液,阳性对照组应用1%毛果芸香碱滴眼液,阴性对照组应用空白脂质体滴眼液。各组家兔左眼滴入滴眼液,右眼滴入生理盐水作为空白对照,分别在给药前,给药后0.25、0.5、1、2、3、4、5、7h测量瞳孔直径。结果3组滴药前瞳孔直径左右眼比较,差异无显著性(P>0.05)。滴药后0.25h,阳性对照组缩瞳作用最大(P<0.01),滴药1h瞳孔开始散大,滴药后5h差异无显著性(P>0.05);实验组滴眼后0.5h瞳孔最小(P<0.01),3h瞳孔开始散大,7h差异无显著性(P>0.05);阴性对照组在观察的7h内无差异(P>0.05)。结论1%毛果芸香碱脂质体滴眼液具有缓慢释药,延长作用时间的优点。

硝酸毛果芸香碱壳聚糖滴眼液的制备及初步药效学考察

目的:以壳聚糖为增黏剂,制备硝酸毛果芸香碱壳聚糖滴眼液,以增强其疗效,减少给药次数。方法:经筛选选定本品处方及制备方法,对其性状、黏度、含量、稳定性等质量进行检测,并通过对比毛果芸香碱壳聚糖滴眼液与毛果芸香碱滴眼液对兔眼的缩瞳作用,对其药效进行初步考察。结果:壳聚糖的加入不影响主药的理化性质,对其含量测定亦无干扰且可延长滴眼液在眼部的滞留时间,具有延长药效的作用。结论:本品制备简单,质量稳定,疗效确切,具有临床应用价值。

高效液相色谱法测定硝酸毛果芸香碱片的含量及均匀度

目的 :以HPLC法测定硝酸毛果芸香碱片的含量及均匀度。方法 :采用KromasilC18柱 ,以苯甲酸为内标物 ,醋酸钠2 .94g与稀醋酸 38.4ml,加水溶解成 6 0 0ml(pH4.5 )后 ,加甲醇 40 0ml为流动相 ,检测波长 2 30nm。结果 :硝酸毛果芸香碱的平均回收率为 10 0 .5 % ,RSD为 0 .8%。结论 :方法简便、准确。

放疗前给予毛果芸香碱对大鼠颌下腺功能的影响

目的:探讨电离辐射前给予毛果芸香碱对大鼠颌下腺有无保护作用. 方法:将18只Winstar鼠随机分为对照组和实验组,后者电离辐射前给予毛果芸香碱,一次性10GyX射线局部照射两组大鼠颌下腺区. 照射后96h,比较两组唾液量,唾液电解质及颌下腺组织学差异. 结果:实验组唾液量,Ca2+均高于对照组,且细胞水肿不明显,单位面积内浆液性细胞计数多于对照组,但K+低于对照组. 结论:电离辐射前给予毛果芸香碱对大鼠颌下腺有保护作用.

硝酸毛果芸香碱温敏凝胶的研制及溶蚀性能研究

目的制备硝酸毛果芸香碱温敏凝胶,考察其载药凝胶溶蚀行为。方法以泊洛沙姆为温敏凝胶基质制备硝酸毛果芸香碱眼用凝胶,通过凝胶相变温度筛选最佳处方,采用无膜溶蚀实验研究凝胶释药特性。结果18%、19%、20%的泊洛沙姆407溶液在体温范围内发生相变形成凝胶,其pH≈7,凝胶中硝酸毛果芸香碱释放速度分别为0.462、0.393、0.294 mg.min-1。结论18%-20%泊洛沙姆407溶液适合作为眼部给药的温敏凝胶基质,凝胶中药物释放基本符合零级释放行为。

褪黑素对毛果芸香碱致痫大鼠行为和海马Fos蛋白表达的影响

目的:探讨褪黑素对毛果芸香碱致痫大鼠的抗惊厥作用及其作用特点。方法:实验于2003-08/12在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室完成。建立毛果芸香碱致痫大鼠模型,依据褪黑素不同的给药时间、给药剂量进行分组,观察褪黑素对癫痫大鼠行为学和海马Fos蛋白表达的影响。结果:17:00给药时,褪黑素10～50mg/kg腹腔注射组均可明显延长毛果芸香碱致痫大鼠首次痫性发作出现的潜伏期(P<0.01),并可显著抑制海马Fos蛋白的表达P<0.01),上述作用尤以褪黑素25mg/kg(腹腔注射组明显。结论:褪黑素在毛果芸香碱致痫大鼠模型中具有抗惊厥作用,且这种作用呈一定的剂量、时间依赖性。

含玻璃酸钠的硝酸毛果芸香碱滴眼液

目的 :通过处方改进 ,减轻硝酸毛果芸香碱滴眼液对眼结膜、角膜的刺激性 ,延长作用时间。方法 :使用玻璃酸钠增加制剂的粘稠度及润滑性。结果 :通过动物实验及临床试用证实 ,改进后的制剂对眼结膜、角膜的刺激明显减轻 ,作用时间明显延长。结论 :通过提高滴眼液的粘稠度和润滑性 ,玻璃酸钠可减轻滴眼液的刺激性 ,增加有效作用时间。

大鼠心肌梗死后迷走神经重构及毛果芸香碱的心脏保护作用

目的采用结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,观察梗死后心电图(ECG)改变、乳酸脱氢酶(LDH)水平、梗死面积大小、痛阈(机械痛阈、热痛阈)改变、迷走神经支配密度、M3受体mRNA及心型脂肪酸结合蛋白(FABP)表达;分析并探讨毛果芸香碱的心脏保护作用及对疼痛的缓解效果。方法根据随机数字原则将雄性30只成年SPF级SD大鼠随机分成假手术组、梗死组、毛果芸香碱组各10只。梗死模型制造成功的标志为ECG中标Ⅱ导联呈现ST段弓背型向上抬高,或病理性Q波出现。用毛果芸香碱舌下静脉注射治疗4 w后,观察毛果芸香碱对梗死心肌的保护作用及对内脏痛的影响。结果与梗死组比较,毛果芸香碱组ECG中抬高的ST段显著下降,心肌梗死范围减少;机械痛阈增加,热痛阈降低;血清LDH活性、迷走神经支配密度下降;M3受体mRNA及FABP的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论毛果芸香碱可通过改善迷走神经重构来缓解心肌梗死症状,同时调节心肌梗死后的痛阈大小变化,起到保护心脏的作用。

离子敏感型毛果芸香碱眼用原位凝胶的制备及其初步药效学考察

目的以海藻酸钠为胶凝剂,羟丙基甲基纤维素(HPMC)为增黏剂,制备硝酸毛果芸香碱(PN)眼用原位凝胶,以增强其疗效,减少给药次数。方法通过对海藻酸钠与HPMC的配比研究,筛选出最佳的凝胶基质,制备PN原位凝胶;以PN滴眼剂及空白凝胶为对照,以家兔瞳孔直径为评定指标,进行初步药效学考察。结果筛选出的最佳基质组成为:1%(w/v)海藻酸钠,2%(w/v)HPMC(E50LV)。与PN滴眼液相比,PN原位凝胶缩瞳作用明显延长,具有缓释效果。结论以海藻酸钠与HPMC制备的原位凝胶PN制剂具有缓释、长效作用,值得进一步研发。