芹糖异甘草苷对小鼠免疫功能的影响及抗肿瘤作用

目的 探讨芹糖异甘草苷(ILA)在体内通过影响免疫系统对小鼠认识水平和抗肿瘤作用的影响。方法 尾静脉注射的方式给小鼠注射ILA;采用水迷宫检测小鼠的认知水平;流式细胞术检测免疫细胞T细胞、B细胞、NK细胞的数量;利用重度免疫缺陷鼠B-NDG进行免疫重建观察ILA与免疫系统的关系;检测脾脏组织免疫细胞T细胞、B细胞、NK细胞数量;B-NDG小鼠血液和海马组织进行RNA测序分析ILA调控的相关信号通路;采用CCK-8法体外检测人宫颈癌细胞活性,初步探讨ILA与肿瘤之间的联系。结果 水迷宫结果表明ILA不能改善小鼠的认知能力。流式细胞术检测免疫细胞中的T细胞、B细胞、NK细胞数量,结果表明ILA能稳定增加正常小鼠血液(P<0.01)和脾脏组织(P<0.01)中NK细胞的数量,ILA能增加重度免疫缺陷小鼠脾脏组织中的NK细胞数量并促进NK细胞的重建(P<0.01)。B-NDG小鼠血液RNA测序结果表明,ILA调控血小板激活、病灶黏附、趋化因子信号通路以及FcγR介导的吞噬凋亡作用,在血小板激活通路中上调Snap23、Rap1b、Fcer1g、Fermt3、p2ry12、Gnai2基因。B-NDG小鼠海马组织RNA测序结果表明,ILA可以刺激Th1和Th2和Th17细胞分化通路,可以激活吞噬小体。CCK-8法结果表明,ILA具有抑制人宫颈癌细胞(C33A)的细胞活性作用(P<0.01)。结论 芹糖异甘草苷能够激活免疫系统增加NK细胞的数量,驱动吞噬作用。同时,芹糖异甘草苷还具有抑制肿瘤细胞生长的作用,可用于抗肿瘤药物的开发。

白芍甘草药对中芹糖异甘草苷和异甘草苷在大鼠体内药代动力学研究

目的:比较炙甘草与白芍配伍前后,炙甘草中芹糖异甘草苷和异甘草苷的药动学行为差异。方法:采用文献报道的HPLC法,同时测定大鼠灌服炙甘草药材、白芍甘草药对后血浆中芹糖异甘草苷和异甘草苷的含量,计算药代动力学参数并进行t检验。结果:与白芍配伍后,异甘草苷的AUC显著降低,通过药时曲线趋势可见对芹糖异甘草苷亦有影响,但药代动力学参数表现不明显,尚需进一步研究。结论:白芍可能通过抑制炙甘草中的芹糖异甘草苷的代谢,增加其生物利用度。

桔梗皂甙V与去芹糖桔梗甙D的鉴定

目的：通过实验研究改进桔梗皂甙类成分的分离及鉴定方法，为桔梗质量标准的制定提供科学依据．方法：利用大孔吸附树脂脱糖脱色及薄层硅胶作柱层析介质，并首次利用电喷雾质谱技术结合理化分析对桔梗皂甙类成分进行分析鉴定．结果：两个单体化合物分别被鉴定为桔梗皂甙Ｖ和去芹糖桔梗皂甙Ｄ，结论：运用电喷雾质谱新技术，大大简化了皂甙类的结构鉴定过程．

高圣草素-7-O-β-D-芹糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷与血清白蛋白相互作用研究

在模拟人体生理条件下,应用紫外吸收光谱、荧光光谱和同步荧光光谱法研究高圣草素-7-O-β-D-芹糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(HAG)与牛血清白蛋白(BSA)及人血清白蛋白(HSA)的结合作用。结果表明:HAG对BSA和HSA的内源荧光均有显著的猝灭作用,且猝灭机理主要为静态猝灭。HAG与BSA和HSA的结合常数K分别为3.03×104L.mol-1和6.22×104L.mol-1,结合位点数n分别为0.858和0.911,结合距离r分别为2.88 nm和3.09 nm,其作用力以氢键和范德华力为主。利用同步荧光技术考察了HAG对BSA和HSA构象的影响。

HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定冰梅上清丸中儿茶素、表儿茶素、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E和桔梗皂苷D_3

目的建立HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定冰梅上清丸中的儿茶素、表儿茶素、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E和桔梗皂苷D_3。方法采用Kromasil C18色谱柱;流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液,进行梯度洗脱;流速:0.9 m L/min;柱温:30℃;检测波长分别规定为280 nm(儿茶素、表儿茶素)和210 nm(去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D_3)。结果儿茶素、表儿茶素、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E和桔梗皂苷D_3分别在18.16~363.20μg/m L(r=0.999 9)、14.89~297.80μg/m L(r=0.999 7)、5.35~107.00μg/m L(r=0.999 6)、4.92~98.40μg/m L(r=0.999 4)、4.15~83.00μg/m L(r=0.999 9)范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率分别为98.74%、97.57%、99.37%、97.74%、98.13%,RSD分别为1.21%、0.96%、0.80%、1.10%、1.68%。结论本文建立的方法可作为冰梅上清丸的质量控制方法。

芹糖葛根素对非酒精性脂肪肝小鼠肝脂代谢的影响

目的研究芹糖葛根素对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠的防治作用,及其对肝脂代谢的影响。方法将32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组和低、高剂量实验组,每组8只。正常组给予普通维持饲料;其余3组饲养高脂饮食构建NAFLD模型。低、高剂量实验组分别灌胃给予5、10 mg·kg^(-1)芹糖葛根素;正常组与模型组均灌胃给予等量二甲基亚砜。4组小鼠每天给药1次,连续给药8周。观察小鼠体质量变化,用试剂盒检测小鼠血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)含量和肝组织中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)含量,用蛋白质印迹法检测乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)和磷酸化5′-磷酸腺苷活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白的表达水平。结果正常组、模型组和低、高剂量实验组的体质量分别为(32.69±1.37)、(45.51±3.29)、(41.18±3.22)和(38.28±2.62)g,血清GPT分别为(36.53±6.44)、(134.56±39.91)、(121.54±43.38)和(75.92±25.98)U·L^(-1),小鼠血清GOT分别为(60.81±8.74)、(188.51±39.70)、(156.02±41.67)和(126.79±16.49)U·L^(-1),肝TC分别为(2.17±0.24)、(6.46±1.22)、(5.86±0.66)和(3.62±0.45)mmol·L^(-1),肝TG分别为(0.57±0.09)、(1.39±0.27)、(1.28±0.34)和(0.73±0.19)mmol·L^(-1),ACC1蛋白相对表达水平分别为1.01±0.04、2.00±0.02、1.47±0.08和1.20±0.09,p-AMPK蛋白相对表达水平分别为1.03±0.09、0.33±0.02、0.66±0.04和0.95±0.08。模型组的上述指标与高剂量实验组和正常组相比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论芹糖葛根素通过调控AMPK信号通路,从而改善NAFLD小鼠的脂代谢。

叶敏-乔雪团队在芹糖苷类成分的生物合成研究方面取得重要进展

2023年10月20日,北京大学药学院天然药物及仿生药物全国重点实验室叶敏/乔雪研究团队在国际期刊Nature Communications在线发表了题为“Insights into the missing apiosylation step in flavonoid apiosides biosynthesis of Leguminosae plants”的研究论文。芹糖是一种含有叔醇基团的支链戊糖。目前已报道约1200个植物来源的芹糖苷,其中黄酮类芹糖苷占比最大,且在植物生长调控中发挥类激素作用。但是芹糖苷类成分的生物合成途径尚不清楚,芹糖转移酶的催化机制亦不明确。由于其结构特殊,化学合成芹糖基团步骤繁琐且不经济。因此挖掘可识别催化芹糖的糖基转移酶具有重要意义。

RP-HPLC同时测定桔梗中去芹糖桔梗皂苷D与桔梗皂苷D

目的为了更加科学、准确地控制中药桔梗的质量,建立了同时测定桔梗中去芹糖桔梗皂苷D与桔梗皂昔D量的反相高效液相色谱法。方法桔梗用70%乙醇超声提取,采用Hypersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水为流动相,体积流量1.0 mL/min;检测波长210 nm,柱温30℃,以外标法检测。结果去芹糖桔梗皂昔D与桔梗皂苷D可以达到基线分离,平均回收率分别为97.81%和98.22%。结论首次报道了反相高效液相色谱同时测定桔梗中去芹糖桔梗皂苷D与桔梗皂苷D的定量测定方法,该方法操作简单,结果稳定可靠,可作为中药桔梗的质量控制依据。

桔梗中去芹糖桔梗皂苷E与桔梗皂苷E的含量

目的:建立桔梗中去芹糖桔梗皂苷E和桔梗皂苷E的含量测定方法。方法:采用Hypersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈?水(45∶55)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长210 nm,柱温为25℃,以外标法检测。结果:去芹糖桔梗皂苷E与桔梗皂苷E的线性关系良好,平均加样回收率(n=6)分别为97.2%和99.4%,RSD分别为0.56%和1.2%。结论:本方法可用于桔梗药材中去芹糖桔梗皂苷E与桔梗皂苷E的定量分析。

高效液相法测定颐神达络方中葛根素、3′-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素、大豆苷和芍药苷的含量

目的建立反相高效液相法测定颐神达络方中葛根素、3′-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素、大豆苷和芍药苷含量的方法.方法采用ODS HYPERSIL 色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,乙腈-4‰磷酸水梯度洗脱,检测波长为240 nm,柱温：室温,对葛根素、3′-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素、大豆苷和芍药苷的含量进行测定.结果葛根素、3′-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素、大豆苷和芍药苷分别在0.152～0.912 μg、0.184～1.104 μg、0.240～1.200 μg、0.142～0.852 μg、0.204～1.224 μg的范围内呈现良好的线性关系,r=0.999 5、0.999 6、0.999 3、0.999 6、0.999 7（n=6）,平均加样回收率分别为100.09%、101.12%、100.69%、100.05%、99.19%,RSD分别为2.00%、2.97%、2.90%、2.95%、1.62%.结论本方法简便、准确、可靠,可以作为颐神达络方有效部位的质量控制方法.

采用大鼠单向肠灌流研究(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷吸收的影响因素

目的：考察（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（简称丁香树脂酚糖苷）在大鼠不同肠段的吸收动力学特征及相关影响因素。方法：采用大鼠在体单向肠灌流实验方法,考察p H值、药物浓度、不同肠段、P-糖蛋白（P-gp）等因素对丁香树脂酚糖苷的影响。结果：丁香树脂酚糖苷在空白肠灌流和不同p H（5.0~8.0）溶液中性质稳定。丁香树脂酚糖苷单用时在肠道中的吸收按十二指肠、空肠、回肠的顺序依次下降,其中在回肠中的吸收显著低于其他肠段（P〈0.05）;随着浓度的增加,各肠道的吸收速率常数（Ka）和肠道有效渗透率（Peff）有逐渐饱和的趋势;在与P-gp抑制剂维拉帕米联用后,其吸收显著增加（P〈0.05）。结论：该药在各肠段均有吸收,但在十二指肠中吸收较好;且其吸收与体内的转运蛋白P-gp有关系,与P-gp抑制剂联用后,吸收能显著增加。

基于代谢组学的去芹糖桔梗皂苷D镇咳祛痰机制研究

利用基于UHPLC-LTQ-orbitrap-MS的代谢组学技术,分析去芹糖桔梗皂苷D(deapio-platycodin D,DPD)对浓氨水引咳模型以及酚红排泄模型小鼠肺部组织内源性代谢物代谢紊乱的调控作用,明确DPD发挥镇咳、祛痰活性的代谢调控途径。经江西中医药大学动物伦理委员会批准后(批准号:JZLLSC-20190235),通过浓氨水引咳和酚红排泄实验评估DPD的镇咳、祛痰药效,采用UHPLC-LTQ-orbitrap-MS方法筛选差异性代谢物,利用MetaboAnalyst平台分析与差异性代谢物相关的代谢通路。结果表明,DPD能显著延长(P<0.05)模型小鼠咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数,能显著增加(P<0.05)模型小鼠的酚红排泄量。通过UHPLC-LTQ-orbitrap-MS技术共鉴定出25种与咳嗽相关的差异性代谢物、38种与排痰相关的差异性代谢物,DPD能显著回调这些差异性代谢物水平。代谢通路分析结果显示亚油酸代谢,花生四烯酸代谢,甘油磷脂代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,戊糖和葡萄糖醛酸相互转化与赖氨酸降解为其改善浓氨水引咳模型小鼠代谢紊乱的主要途径;亚油酸代谢,牛磺酸与亚牛磺酸代谢,甘油磷脂代谢,嘌呤代谢,嘧啶代谢,花生四烯酸代谢与不饱和脂肪酸代谢为其改善酚红排泄模型小鼠代谢紊乱的主要途径;其中亚油酸代谢,花生四烯酸代谢,甘油磷脂代谢为DPD发挥镇咳祛痰活性的共有调控途径。这些代谢通路与抗炎、免疫功能调节、神经递质释放、细胞信号传导、能量代谢与细胞凋亡等的调控机制密切相关。本研究首次阐明了DPD的镇咳祛痰机制。

络合萃取-反萃取制备甘草超滤液中芹糖甘草苷的工艺研究

目的以芹糖甘草苷的萃取率、反萃取率为评价指标,建立一种甘草超滤液中芹糖甘草苷的分离纯化方法。方法以芹糖甘草苷的萃取率为指标,通过单因素实验和U5(53)均匀设计筛选最佳的络合萃取剂组成、配比及萃取时间;以芹糖甘草苷的反萃取率为指标,筛选最佳的反萃取剂种类、质量分数及反萃取时间。结果最佳络合萃取条件为13%三烷基氧膦(TRPO)+87%磺化煤油(TBP)萃取30min,芹糖甘草苷萃取率达85.69%;最佳反萃取条件为0.05%Na OH水溶液反萃取30 min,芹糖甘草苷反萃取率达88.35%。结论优选所得的络合萃取-反萃取工艺条件可高效分离甘草超滤液中的芹糖甘草苷,可为芹糖甘草苷的制备提供一种新的技术。

HPLC法测定儿感退热宁口服液中连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸

目的建立HPLC法同时测定儿感退热宁口服液中连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸。方法 Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈–0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长:275 nm(0~21.0 min检测连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷)和210 nm(21.0~55.0 min检测去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素、青蒿酸);柱温25℃;体积流量0.9 mL/min;进样量:10μL。结果连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸分别在3.47~69.40μg/mL(r=0.999 5)、18.78~375.60μg/mL(r=0.999 2)、6.64~132.80μg/mL (r=0.999 7)、2.57~51.40μg/mL (r=0.999 5)、4.86~97.20μg/mL(r=0.999 3)、4.23~84.60μg/mL(r=0.999 8)、0.79~15.80μg/mL(r=0.999 1)、2.16~43.20μg/mL(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率分别为98.76%、100.12%、99.34%、97.57%、98.29%、99.25%、96.87%、98.02%,RSD值分别为1.53%、0.89%、0.91%、1.38%、1.02%、0.83%、1.26%、1.15%。结论所建立的方法结果准确,可用于儿感退热宁口服液中多成分的质量控制研究。

银翘散抗流感病毒有效部位群中的黄酮二糖苷

目的 对银翘散抗流感病毒作用的物质基础进行研究。方法 运用色谱技术进行分离 ,波谱等方法鉴定化合物的结构。结果 从银翘散抗流感病毒有效部位群中分离得到 4种黄酮二糖苷成分 ,鉴定为异甘草素 -2′-O-芹糖(1→ 2 ) -葡萄糖苷 ( )、异甘草素 -4′-O-芹糖 (1→ 2 ) -葡萄糖苷 ( )、异甘草素 -4 -O-芹糖 (1→ 2 ) -葡萄糖苷 ( )、甘草素 -4′-O-芹糖 (1→ 2 ) -葡萄糖苷 ( )。结论 异甘草素 -2′-O-芹糖 (1→ 2 )

咳露口服液指纹图谱的建立及6种成分的含量测定

目的 建立咳露口服液的指纹图谱及多成分质量控制方法。方法 用UPLC与“2012版中药指纹图谱相似度评价系统”建立咳露口服液的指纹图谱方法并进行相似度评价,同时测定6种成分。结果 建立了UPLC测定10批咳露口服液指纹图谱方法,在250 nm处共标记出25个共有峰,指认出4个共有峰,354 nm处标定出19个共有峰,指认出5个共有峰,与对照图谱的相似度> 0.99,10批次咳露口服液芹糖异甘草苷、异甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草酸铵含量范围分别为25.057~29.652、26.404~32.072、824.457~1 291.929、319.541~557.251、4.243~15.839、250.566~479.037μg·mL^(-1)。结论 建立的咳露口服液UPLC指纹图谱及多成分测定方法操作简单,结果可靠,可为后期咳露口服液药效物质研究奠定基础。

一测多评法测定甘草浸膏中5种有效成分的方法评价

目的通过一测多评法同时测定甘草浸膏中甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素和甘草酸铵5种有效成分的含量。方法采用高效液相色谱法对甘草浸膏中甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素和甘草酸铵5种成分采用同一色谱条件进行分析:ChromCore AR-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃。以甘草酸铵为内标,计算其他4种成分的相对校正因子,并对不同仪器系统和色谱柱、不同体积流量、不同柱温、不同进样量进行了耐用性考察。最后用该一测多评法测定了甘草浸膏中5种有效成分的含量。结果在上述色谱条件下,5种成分在其线性范围内线性关系良好(r≥0.9999),平均加样回收率为92.39%~103.03%,RSD为1.45%~2.90%,RAD<2.0%。结论本研究所建立的一测多评法可同时测定甘草浸膏中甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素和甘草酸铵5种有效成分的含量,该测定含量的方法准确可行,与外标法结果相当。

反相高效液相色谱法测定桔梗中3种三萜皂苷类化合物的含量

目的建立RP-HPLC法同时测定桔梗中去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E和桔梗皂苷D3的含量。方法以Hypersil-ODS（4.6 mm×250 mm,5μm）为色谱柱,流动相为乙腈（A）-水（B）,梯度洗脱,流速为0.8 mL.min-1,检测波长210 nm,温度为室温。结果去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E和桔梗皂苷D3分别在4.16083.2、10.75215.0、4.08081.6μg.mL-1与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为96.5%、97.0%和97.3%,RSD分别为1.2%、1.0%和1.3%。结论该方法快速稳定且分离度好,为桔梗的质量控制提供可借鉴的分析方法。

HPLC法同时测定白芍、甘草药对提取物中9种有效成分

目的建立反向高效液相色谱法,同时测定白芍甘草药对提取物中芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、异甘草素9种成分。方法采用Dikma Technologies-C18(200mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱,体积流量1.0mL/min,检测波长为267nm(0～13min)、258 nm(13～17min)、230 nm(17～27min)、276 nm(27～42min)、360 nm(42～46 min)、276nm(46～50min)、230nm(50～53min)、275nm(53～55min)、250nm(55～90min),柱温30℃。结果在色谱条件下,芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、异甘草素的进样量分别在0.004 476～0.044 76μg,0.014 67～0.146 7μg,0.004 975～0.049 75μg,0.001 031～0.010 31μg,0.005 813～0.058 13μg,0.001 744～0.017 44μg,0.000 982～0.009 82μg,0.018 20～0.182 0μg,0.000 098～0.000 98μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系;加样回收率(n=5)均在96.3%～103.4%,RSD均小于2.5%。结论本法快速、准确,重复性好,可更好地控制白芍炙甘草药对提取物的质量。

白酒草属植物化学成分研究进展

综述了近年来白酒草属植物化学成分的研究概况,主要包括三萜及其皂苷类、二萜及其苷类、黄酮类、鞘脂、γ-吡喃酮类化合物等化学成分,该属植物所含三萜皂苷的结构特征以及天然产物研究中较为少见的芹糖的波谱特征。