基于高效液相色谱法的芹菜11种酚类化合物分析及应用

以10种芹菜(Apium graveolens L.)为试材,采用Venusil XBP Cl8(L)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.2%乙酸溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL/min;采用PDA检测器,检测波长为240 nm。建立了基于高效液相色谱(HPLC)同时测定芹菜中11种酚类化合物的方法,并对色谱柱的选择、流动相条件和梯度洗脱条件等进行优化。结果表明,11种酚类物质在0.5~10.0μg/mL范围内线性关系良好,相关系数均≥0.990。在芹菜样品中进行加标水平为0.2、0.4、1.0 mg/kg的回收试验,回收率为71.90%~134.00%,相对标准偏差(RSD)为0.30%~4.00%。检出限(LOD)与定量限(LOQ)分别为0.07~0.29 mg/kg、0.20~0.84 mg/kg。各活性成分在24 h内稳定性良好,相对标准偏差均小于3.00%。该方法成功应用于10种芹菜中11种酚类化合物含量的测定,结合聚类分析发现不同品种的芹菜酚类组分存在相似性,但其含量存在品种间差异。该方法灵敏度高、精密度好,可为芹菜中11种酚类化合物含量的分析提供技术支持。

基于RAPD分子标记芹菜品种亲缘关系分析研究

[目的]研究RAPD分子标记芹菜品种亲缘关系分析方法。[方法]以来自中国不同地区40种不同品种的芹菜为试材,对RAPD技术在鉴定芹菜品种中的科学性进行验证与分析。[结果]13种不同长度引物扩增的不同品种芹菜DNA的谱带清晰度以及数量等有明显区别,在相似系数为0.61时,可将所有测试芹菜品种划分为4类。[结论]RAPD技术是适用于分析芹菜品种亲缘关系的简易与理想的DNA分子标记技术,能很好的区分芹菜品种间亲缘关系的远近。

芹菜水焯工艺的优化

以芹菜(Apium graveolens)为研究对象,对自来水、1%乙酸溶液、10 g/L食盐溶液和10 g/L小苏打溶液4种水焯介质进行了研究;在单因素试验的基础上,通过L9(34)正交设计探讨了芹菜水焯的工艺条件。结果表明,乙酸溶液可作为芹菜的水焯介质;芹菜水焯的最佳条件为乙酸体积分数0.02%,料液比1∶4(m/V,g∶mL),在100℃水焯3 min。在此条件下,水焯芹菜的干物质溶出率为0.41%。水焯后芹菜可用于加工各种菜肴。

空间搭载对芹菜幼苗生理特性的影响

以空间搭载的芹菜(Apium graveolens L.var.dulce DC.)种子为试验材料,研究了芹菜幼苗期丙二醛(MDA)、叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白质、脯氨酸(Pro)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性等生理指标的变化。结果表明,空间搭载的处理1、2、4叶片MDA含量有所增加,处理2、4与对照相比差异极显著(P<0.01);叶绿素a、叶绿素b和叶绿素(a+b)含量都高于对照,叶绿素a含量受空间射线影响较为明显;可溶性糖、脯氨酸含量均与对照差异不显著(P>0.05);处理1、2、4叶片的可溶性蛋白质含量低于对照;处理2、3、4叶片的SOD、POD、CAT活性较对照均有所增加。

外源NO供体SNP对冬季温室芹菜生长及硝酸盐含量的影响

在冬季温室条件下,分别对种子萌发期、幼苗期和快速生长期的芹菜(Apium graveolens L.)喷施0、20、50、100、200μmol/L的外源一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)溶液,测定种子萌发率、单株株高和重量、根系发育以及叶片中叶绿素、硝酸盐和亚硝酸盐含量等指标。结果表明,喷施SNP 100μmol/L处理可促进芹菜种子萌发,加快幼苗期植株生长,提高幼苗生长量和叶片叶绿素含量;在快速生长期喷施SNP,除200μmol/L处理显著降低了植株株高和叶绿素含量外,其他浓度处理对生长量和叶绿素含量未产生显著影响;低浓度SNP增加了芹菜的侧根数目,改变了根系结构;利用HLPC法测定芹菜叶片中硝酸盐和亚硝酸盐含量的结果显示,外源SNP不会对芹菜叶片中硝酸盐和亚硝酸盐的累积产生显著影响。NO对芹菜生长发育的影响具有阶段特异性和组织特异性,适合于在其形态建成的早期应用;NO作为一种含氮的信号分子,不会改变芹菜与硝酸盐含量相关的食用品质。

海水胁迫对芹菜种子萌发的影响

以芹菜(Apium graveolens L.)种子为研究材料,研究了不同盐度的海水对芹菜种子萌发的影响.结果表明,不同品种芹菜种子对海水胁迫的耐受力不同.有的品种在3‰以下的海水盐度中有促进萌发的效果,有的品种则在1‰的海水中就有明显的抑制作用,在高盐度海水中,芹菜种子所有萌发指标均随海水盐度的升高而下降.综合考虑所有指标,在所试验的芹菜种子中,津南实芹和皇妃西芹种子较为耐盐,OASIS种子的耐盐性最差.

超声波辅助提取芹菜香豆素工艺的优化

为获取芹菜香豆素的最佳提取工艺,采用超声波辅助提取芹菜香豆素,通过单因素试验及正交试验优化确定出最佳提取工艺为料液比1∶17(m/V,g∶mL)、超声温度60℃、超声时间40 min。此工艺条件下芹菜香豆素提取率为0.73%。

芹菜光响应转录因子AgHY5的克隆及不同光质下表达模式分析

HY5(elongated hypocotyl 5)转录因子能促进植物光形态建成和次生代谢产物黄酮类化合物的合成。为深入研究AgHY5在紫色芹菜(Apium graveolens)光形态建成、花青素生物合成中的作用,本文通过克隆得到AgHY5的CDS序列并进行生物信息学分析,同时分析AgHY5的组织表达特异性及不同光质下的表达规律。结果表明,AgHY5完整CDS序列共474 bp,编码氨基酸157 aa,蛋白分子量为17.33 kDa,等电点(pI)为10.47,有1个bZIP-HY5-like保守域,属于亲水性蛋白。进化上,芹菜AgHY5与胡萝卜DcHY5蛋白进化关系最近。不同光质下,复合光红:蓝=3:1(3R1B)条件下芹菜株高、单株重最大,2R2B处理的芹菜茎最粗;单色蓝光(B)条件下紫色芹菜叶柄的花青素含量最高。荧光定量PCR结果表明,AgHY5在紫色芹菜叶柄中的表达量最高,叶片中最低;在不同光质条件下,AgHY5在单色蓝光下表达水平最高,且花青素含量与基因表达量的相关系数为0.358。本研究结果为提升紫色芹菜品质、探究AgHY5转录因子在芹菜中的功能以及对花青素合成及调控机制提供研究基础。

北京地区芹菜细菌性软腐病菌鉴定及其致病力分析

对从北京地区芹菜软腐组织中分离到的37株细菌性软腐病菌株,进行了微生物碳源利用(BiologTM)、生化特性、特异性PCR、ITS-RFLP带型以及基于16S rDNA完整序列遗传关系分析。结果如下:菌株革兰氏染色阴性、具周生鞭毛;可在5%和7%NaCl及28℃和37℃条件下生长;可分解柠檬酸盐及液化明胶;Biolog分析将这些菌株均鉴定为Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum(Pcc)。生化特性分析发现,其中36株菌株能利用D-山梨醇、D-阿拉伯糖醇、异麦芽酮糖和α-甲基葡萄糖苷,与对照菌株P.carotovorum subsp.odoriferum(Pco)S7一致;另外1株菌株Q34不能利用上述糖醇,与对照菌株P.carotovorum subsp.brasilience(Pcb)BC1和P.carotovorum subsp.carotovorum(Pcc)ECC71表现一致。利用pel(pectate lyase)基因特异性引物Y1/Y2在所有的37株菌株中均扩增出预期片段(434 bp),表明其基因组中均含有果胶酶基因。Pcb特异性PCR引物BR1f/L1r仅在Q34菌株与Pcb BC1中扩增出预期片段(322 bp),而Pcc特异性PCR引物EXPCCF/EXPCCR则在除Pcb BC1外所有菌株中均扩增出预期片段(550 bp)。Rsa I酶切16S-23S rDNA ITS片段结果显示,Q34酶切带型与Pcb BC1相同,其余36株带型与Pcc ECC71和Pco S7相同。基于16S rDNA基因完整序列,以Dickeya dadantii菌株582为外群,该37株菌株与已发表的Pectobacterium菌株系统发育树聚类分析结果表明,Q34与已发表的其他Pcb菌株形成了明显的Pcb类群,其余36株菌株则与已发表的其他Pco菌株形成了明显的Pco类群。综合多种鉴定结果,36株被鉴定为Pco,Q34被鉴定为Pcb。菌株致病力测试结果显示,36株Pco菌株中仅Q47表现为低等的致病力,其余24株和11株分别表现为中等和高等致病力;Pcb菌株Q34则表现出中等致病力。

芹菜bZIP转录因子基因AgbZIP16的逆境响应分析

以‘六合黄心芹’和‘文图拉’2个芹菜(Apium graveolens)品种为试验材料,从中克隆得到一个编码bZIP转录因子的基因AgbZIP16。序列分析表明2个芹菜品种中AgbZIP16基因的核苷酸序列相同,包含一个长度为1221bp的开放阅读框(ORF),编码406个氨基酸。序列多重比对及进化树分析表明,bZIP转录因子在植物中具有较高的保守性且在同科植物的进化中比较保守,AgbZIP16与同属伞形科的胡萝卜(Daucus carota)bZIP转录因子进化关系最近。蛋白质理化性质分析表明AgbZIP16蛋白的分子质量为43.12 kDa,理论等电点(pI)为6.33,属于亲水性蛋白。AgbZIP16蛋白的二级结构预测显示该蛋白中包含多个α螺旋和无规则卷曲。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)结果表明,AgbZIP16基因在芹菜根中表达量最高,在叶柄中最低,呈现显著的组织特异性,同时对高温、低温、干旱和盐胁迫均有响应。‘六合黄心芹’中AgbZIP16的表达水平在逆境处理后均下调,分别在高温、低温、干旱处理24 h和盐处理1 h时达到最低值。‘文图拉’中AgbZIP16的表达水平在高温处理4 h时显著高于对照,为对照的4.92倍;低温、干旱及盐处理下其表达量整体呈现先上升后下降的趋势,在盐处理24 h和干旱处理8 h时表达量显著上调。结果显示多种非生物胁迫可诱导AgbZIP16基因的表达发生变化,且其在不同芹菜品种中的表达响应具有显著差异。本文研究结果将为进一步开展芹菜bZIP类转录因子的逆境调控研究提供参考。

利用SSR标记鉴定芹菜新品种‘HBN-01’和‘HBN-02’的种子纯度

为了快速鉴定两个杂交芹菜品种‘HBN-01’以及‘HBN-02’种子纯度情况,本研究以杂交F1代及其父母本为材料,采用CTAB(Cetyltrimethylammonium bromide)快速提取法提取DNA,基于SSR(Simple sequence repeat)分子标记技术筛选出合适引物,对芹菜杂交品种进行种子纯度鉴定。结果发现,从候选78对引物中,共筛选出2组引物(celerySSR-25和celerySSR-61),可以使芹菜品种‘HBN-01’和‘HBN-02’及其亲本的带型具有互补多态性。两组特异性引物可相互验证两个杂交品种的种子纯度情况。应用该方法对芹菜品种‘HBN-01’和‘HBN-02’种子纯度检测结果显示,‘HBN-01’品种纯度为93.33%;‘HBN-02’品种纯度为99.00%。因此通过SSR分子标记技术,可在室内快速准确鉴定出芹菜杂交品种‘HBN-01’和‘HBN-02’的种子纯合情况,为今后芹菜品种纯度的鉴定以及芹菜的育种筛选提供便利以及技术支持。