改良的L-15培养基对鳞翅目昆虫细胞生长和芹菜夜蛾核型多角体病毒增殖的影响

4种鳞翅目昆虫细胞系SL-ZSU-1、TnH5、Sf9和Ha．AM1都不能在L-15＋5％FBS或L-15＋350mg／L脯氨酸＋5％FBS（L-15-P，pH6．5）的培养基中生长，但是都可以在L-15＋3g／L水解乳蛋白＋3g／L酵母提取物＋1g／L葡萄糖＋5％FBS（L-15-LYG）、L．15＋350mg／L脯氨酸＋1g／L葡萄糖＋5％FBS（L-15-PG）、L-15＋1g／L葡萄糖＋5％FBSa（L-15-G，pH6．5）的培养基中生长。细胞从TNM-FH＋5％FBS（pH6．5）培养基中转入上述培养基后，适应期的长短相差较大。转入L-15-LYG中的细胞没有明显的适应期；转入L-15-PG中的细胞需1个月左右才能正常传代；转入L-15-G中的细胞需45～60d才能正常传代。L-15-LYG替代TNM-FH对4种昆虫细胞的形态、大小、最大生长密度和群体培增时间没有显著影响，对芹菜夜蛾核型多角体病毒AfaMNPV胞外病毒粒子的滴度没有明显的变化，但多角体的产量显著下降。

芹菜夜蛾核型多角体病毒毒力的生物测定

利用芹菜夜蛾核型多角体病毒室内感染２龄小菜蛾、棉铃虫和甜菜夜蛾，测得ＬＣ５０分别为２．４７×１０６、７．９６×１０５和２．２２×１０５ＰＩＢ／ｍｌ。以４．２２×１０７和４．２２×１０６ＰＩＢ／ｍｌ两种浓度感染小菜蛾、棉铃虫和甜菜夜蛾等２龄幼虫，测得ＬＴ５０，小菜蛾分别为６．１５和７．３２天，棉铃虫分别为８．２０和１１．３７天，甜菜夜蛾分别为５．５３和７．２０天。致死时间均随感染浓度增加而减少。

芹菜夜蛾NPV离体复制的研究

芹菜夜蛾ＮＰＶ能够在小菜蛾细胞系中有效地复制增殖。受感染细胞呈典型细胞病理变化。病毒在细胞核中复制装配，病毒感染率为８５％，多角体产量为５８８×１０６ＰＩＢｓ／ｍｌ。病毒增殖动力学显示，病毒感染细胞７２ｈ，胞外病毒达最大滴度，ＴＣＩＤ５０值为１．９×１０８ＴＣＩＤ５０／ｍｌ。

芹菜夜蛾核型多角体病毒的空斑纯化及克隆株的生物测定

利用空斑技术从芹菜夜蛾核型多角体病毒分离筛选了一毒力较强的SfaMNPV D克隆株。SfaMNPV D克隆株感染 5B1细胞 ,72h胞外病毒达最大滴度 ,组织培养半感染剂量为 3 .89×1 0 8TCID50 /ml,多角体产量达 4.0× 1 0 7PIBs/ml;生物测定结果表明 ,SfaMNPV D克隆株感染 3龄棉铃虫幼虫的LC50 为 7.1 4× 1 0 5PIBs/ml,原毒株的LC50 为 4.81× 1 0 6PIBs/ml。SfaMNPV D病毒DNA经几种限制性内切酶消化 ,各片段积加测得基因组DNA分子量为 1 1 3 .78kb .

芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA片段的克隆与鉴定

实验提取芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA,5种限制性内切酶消化,并对EcoRⅠ酶切片段进行分子克隆.结果表明,芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株分子量为113.78 kb;实验成功克隆出10个病毒DNAEcoRⅠ酶切片段.上述结果为芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株的分子生物学分析提供了基础材料.

芹菜夜蛾核型多角体病毒的毒力测定

sfaMNPV是新近从美国引进的一株杆状病毒，它能感染多种鳞翅目昆虫．本实验成功地利用它感染了小菜蛾、棉铃虫和甜菜夜蛾三种昆虫的幼虫，扩大了它的宿主范围．并测定了它对这三种昆虫的毒力．结果表明，SfaMNPV不仅能感染这三种昆虫，且能在这三种昆虫幼虫体内大量增殖，能作为这三种昆虫的生物杀虫剂使用．

芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株某些理化性质的研究

DNA of Syngrapha falcifera nuclear polyhedrosis virus D-clone (Sfa-D clone) was extracted and digested by three kinds of restriction endonuclease. We calculated its molecular weight and measure its melting temperature, G+C%. virus particle and polyhedrin were purified. The structural polypeptides and polyhedrin are analysed by SDS-PAGE.

一种适合粉纹夜蛾5B1细胞生长的无血清培养基的研究

报道了一种适合粉纹夜蛾 ( 5B1 )细胞生长的无血清培养基 (简称为 SFM) .该培养基以 Tc-1 0 0基础培养基为基础 ,补加一定量的水解乳蛋白和酵母抽提物 ,并加入适量的微量元素、维生素、脂类复合物等 ,5B1细胞已在该 SFM中传代 1 8代 ,研究结果表明 :该培养基能支持 5B1细胞的生长和芹菜夜蛾核型多角体病毒 ( Sfa MNPV)

2种昆虫病毒混合悬液对菜粉蝶的增效作用

在温度为20～22℃的实验室条件下,用AfMNPV和PrGV的混合病毒悬液感染3龄期菜粉蝶幼虫,可有效降低2种病毒的用量,并显示出良好的增效作用,PrGV和AfMNPV毒力倍数分别为单剂的600倍和400倍以上.不同浓度混合病毒悬液的LT50分别比AfMNPV和PrGV单剂的LT50缩短1.10～2.06 d和0.40～1.93 d.用PrGV病毒悬液感染4龄期菜粉蝶幼虫,其LT50比3龄期增加3.43～6.06 d.

SfaMNPV-D克隆株感染小菜蛾的生物测定

芹菜夜蛾核型多角体病毒-D克隆株感染2龄和3龄小菜蛾幼虫,测得LC50分别为2.01×105和2.82×107PIBs/lml,相同浓度的病毒感染小菜蛾,致死率与幼虫虫龄呈负相关。

几种荧光增白剂对SfaMNPV的增效作用

利用化学增效因子提高杆状病毒的毒力,是扩大其实用性的重要途径.笔者以棉铃虫Helicoverpa armigera 3龄幼虫为供试虫,测试了几种荧光增白剂对芹菜夜蛾核型多角体病毒Syngrapha falcifera multiple nuclear polyhedrosis virus,SfaMNPV 包含体(OB)、多角体来源病毒粒子(PDV)毒力的增效作用.

CSA对SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡的影响

检测线粒体膜通透性转运孔(MPT)的开放抑制剂环孢菌素A(CSA)对芹菜夜蛾核型多角体病毒(Syngrapha falcifera multiplenuclear polyhedrosis virus,SfaMNPV)诱导诱导斜纹夜蛾(Spodoptera litura Cells,SL-1)细胞凋亡的影响。用不同浓度CSA和SfaMNPV单独或联合处理SL-1细胞,通过细胞形态学观察、DNA凝胶电泳法、PI染色流式细胞仪鉴定细胞凋亡,应用罗丹明123(Rh123)染色流式细胞仪测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)。CSA明显抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡,CSA还抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞线粒体膜电位(ΔΨm)下降。CSA抑制了SfaMNPV诱导SL-1细胞的ΔΨm下降,可能是亲环素-D(CyP-D)与CSA的结合导致MPT的关闭,从而抑制细胞凋亡。