枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2电击转化体系的建立

【目的】建立枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株ZT4-2的高效电击转化体系。【方法】带有荧光蛋白标记的穿梭质粒pGFP78,通过电击转化法将其转入枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2。【结果】菌株培养阶段、感受态细胞浓度、感受态细胞量、质粒体积量、转化电压等条件的不同,会对电击转化效率造成影响。其中试验条件:制备感受态细胞的菌株培养阶段的OD_(600 nm)值=1.0,重悬菌体时每100mL起始菌液加入600μL的40%PEG6000;电击转化体系中,感受态细胞量200μL,质粒体积10μL,转化电压2.5kV。最高转化效率可达6823.67CFU/μg。【结论】建立了枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2的电击转化体系,电击转化效率较高。

类芽孢杆菌TX-4菌株对根结线虫的生防活性

采用类芽孢杆菌属TX-4菌株发酵提取液的不同浓度处理南方根结线虫2龄幼虫(J2)和卵。结果表明,TX-4发酵液的不同浓度提取液对线虫卵有显著的抑制作用,对J2幼虫有显著的致死作用。线虫卵的抑制率和J2幼虫的致死率,随着浸渍时间的加长和提取液浓度的升高而加大。用高浓度(10倍稀释液)提取液浸泡根结线虫卵2 d,对卵的孵化抑制率达70.4%。应用不同浓度的TX-4菌株发酵提取液或TX-4菌株细胞悬浮液防治接种J2(1000头/盆)的盆栽试验表明,两种处理均显著(P<0.01)减少番茄根瘤指数和线虫种群数量。

地衣芽孢杆菌NK-27菌株β-甘露糖苷酶的产酶条件及粗酶性质

地衣芽孢杆菌 NK-2 7菌株可以产生胞外β-甘露聚糖酶和胞内β-甘露糖苷酶 .β-甘露糖苷酶活力主要集中于细胞匀浆液中 .以 2 .0 %魔芋粉、1 .0 % ( NH4) 2 SO4为碳、氮源地衣芽孢杆菌 NK-2 7菌株经 30℃振荡培养 2 0～2 4 h产生 β-甘露糖苷酶酶活力最高 .该酶于 30～ 4 0℃、p H6 .0时酶活力最高 ,在 30～ 4 0℃、p H5 .4～ 7.

吡虫啉等11种农药对枯草芽孢杆菌B36菌株可湿性粉剂防治番茄灰霉病效果的影响

生物农药受环境影响较大已是学界的共识,这也是生物农药药效不稳定的主要原因。通过研究吡虫啉等11种番茄保护地常用农药对枯草芽孢杆菌B36菌株可湿性粉剂防治番茄灰霉病效果的影响,结果表明:1.8%阿维菌素乳油与B36可湿性粉剂混用可以明显提高B36可湿性粉剂防治番茄灰霉病的药效,其预防效果与治疗效果分别提高2.59百分点与5.84百分点。80%代森锰锌可湿性粉剂与B36可湿性粉剂混用降低了B36可湿性粉剂防治番茄灰霉病的药效,其预防效果与治疗效果分别降低1.77百分点与5.28百分点。其余9种农药对枯草芽孢杆菌B36菌株可湿性粉剂防治番茄灰霉病存在一定影响,但均不显著。

海洋多黏类芽孢杆菌L_1-9菌株抗菌蛋白的分离纯化及其抗菌作用

通过硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow柱层析、Sephadex G-200柱层析,以小麦蠕孢病菌和金黄色葡萄球菌为指示菌采用抑菌活性追踪和SDS-PAGE跟踪检测,从分离自连云港海域、对多种病原真菌具有抑菌作用的多黏类芽孢杆菌L1-9菌株发酵液中分离纯化得到一种对金黄色葡萄球菌和小麦蠕孢病菌的菌丝生长及孢子萌发具有抑制作用的抗菌蛋白,分子质量约31kD。

多粘类芽孢杆菌L_1-9菌株对番茄早疫病的抑菌防病作用

L1-9菌株是从连云港海域海泥中分离获得的1株多粘类芽孢杆菌。采用平板对峙法和打孔法测定L1-9菌株及其发酵液和无菌发酵液对番茄早疫病菌的抑制作用,结果表明:L1-9菌株和无菌发酵液对番茄早疫病菌菌丝生长有明显的抑制作用,培养4d的抑菌带宽度分别达到17.6mm和15.8mm,L1-9菌株的发酵液和无菌发酵液能明显降低早疫病菌的孢子萌发率并抑制芽管的伸长,发酵液的抑制作用高于无菌发酵液。采用离体叶片法和盆栽法测定该菌株的室内防病效果,结果表明:L1-9菌株的发酵液和无菌发酵液对番茄早疫病具有较好的防治效果,发酵液的防病效果高于无菌发酵液,其离体叶片法的保护效果和治疗效果分别达到79.28%和67.20%。

芽孢杆菌L15菌株发酵培养条件的优化

芽孢杆菌L15菌株能有效降低刺参Apostichopus japonicas养殖水中的化学耗氧量(COD)和氨氮(NH+4-N)含量,促进刺参生长,为大量发酵培养L15菌株并降低培养成本,以豆粕、麦麸、玉米酒糟、棉籽粕为碳、氮源,对发酵培养L15菌株的最佳碳、氮源及其配比和最佳发酵条件(如装液量、接种量、转速等)进行了初步优化研究。结果表明:培养芽胞杆菌L15菌株的最佳碳、氮源为麦麸和豆粕,最佳添加量分别为3、2 g/L;最佳发酵培养条件为装液量1/3、接种量1%、转速160 r/min;在最佳培养基和最适培养条件下,发酵培养的L15菌株细菌数量可达1011cfu/m L,与用2216E培养基培养的L15菌株相比,在实验室条件下,对海参底泥COD的去除率虽无明显变化,但培养成本却降低了91%。研究表明,用豆泊和麦麸作为培养基培养L15菌株具有可行性,不仅细菌数量达标,且培养成本显著降低。

芽孢杆菌H-1菌株的固定化及降解动力学研究

采用海藻酸钠-海藻酸钙法对芽孢杆菌H-1菌株进行包埋实验,测试各固定化因素对凝胶微球物理性能的影响,得到各因素合适的取值范围。以石油降解率为试验指标对固定化因素进行4因素3水平正交试验,结果显示菌株的最佳固定化条件为海藻酸钠浓度7%、菌悬液添加量75%、CaCl2浓度2%、交联时间24 h。对比固定化菌株与游离菌株的降解效果,结果显示固定化菌株的降解效率大于游离菌株。对固定化菌株的降解动力学进行研究,结果表明当石油浓度较低时,固定化菌株的降解动力学方程符合Monod方程的线性简化形式,方程的半饱和常数K S=52.33 mg/L,最大反应速率v max=44.05 d-1。当原油浓度较高时,其降解速率大于方程的v max。

芽孢杆菌B_(47)菌株对番茄青枯病的防治作用

用不同接种方法测定番茄内生芽孢杆菌B47菌株对番茄青枯病的室内防效,结果表明,接种B47菌17d后再接种茄青枯雷尔氏菌的植株能较好地防治番茄青枯病,防治效果为81.25%;B47菌和茄青枯雷尔氏菌同时接种的植株对该病的防效较低,仅为16.67%。B47菌株与根围链霉菌St103菌株混合施用室内对番茄青枯病的防效为62.52%,田间防效为81.82%。

苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis LSZ9408菌株发酵特性的研究

本文研究了苏云金芽孢杆菌 LSZ94 0 8菌株的发酵特性 ,2 4 h菌体浓度达最大 ,2 8- 40 h菌体浓度稳定 ,4 0 h后菌体浓度下降 ,发酵液 p H值先降后升 ,最高达 p H7.8,2 0 h达到碳氮源利用高峰 ,2 8h后氮含量回升 ,糖含量基本不变。

化学农药与芽孢杆菌M3、S11菌株对西芹黄萎病的防治效果

利用化学药剂与生防菌结合,对由尖孢镰刀菌芹菜专化型引起的西芹黄萎病进行综合防治研究。结果表明:苗期使用50%多菌灵可湿性粉剂(WP)、50%福美双·多菌灵WP(活根菌灭)或40%噁霉灵WP(噁霉敌)灌根均能显著消除育苗基质中的病原菌孢子,孢子下降率达99.00%以上;大田继续使用上述3种化学药剂或改用生防菌芽孢杆菌S11和M3,都能够显著降低西芹黄萎病发病率,防治效果最高为85.98%;其中持续单独使用50%多菌灵WP或苗期使用50%多菌灵WP、大田改用生防菌芽孢杆菌对西芹的生长没有不良影响。

简单芽孢杆菌P10菌株对马铃薯晚疫病菌的防控作用

由致病疫霉引起的马铃薯晚疫病是马铃薯的一种毁灭性病害,且防治困难,利用益生菌实施生物防治成为研究的热点。为了明确多功能简单芽孢杆菌P10菌株对马铃薯晚疫病菌的抑制作用和防病效果,进而为深入研究和科学应用提供依据,以P10菌株活菌体、发酵菌液、无菌滤液为试材,采用对峙培养和打孔法测定了其对晚疫病致病疫霉菌丝的抑制作用,利用离体叶片和盆栽植株攻毒法测定了发酵菌液和无菌滤液的防病效果。结果表明:P10菌株活菌体和发酵菌液均能抑制马铃薯晚疫病致病疫霉菌丝的生长,使菌丝体膨大畸形,相对抑制率分别为66.7%和77.8%。P10菌株发酵菌液和无菌滤液对马铃薯离体叶片晚疫病菌的防效分别为57.2%和49.4%。盆栽试验中,接种疫霉菌孢子囊悬液前12 h喷施P10菌株发酵菌液以及接种病菌前后各喷施1次P10菌株发酵菌液的防效分别为73.9%和71.5%,接种病菌后再喷施P10菌株发酵菌液的治疗效果为54.8%,在接种病菌前喷施1次和接种前后各喷1次P10菌株无菌滤液的防效分别为60.3%和57.9%。简单芽孢杆菌P10菌株对马铃薯晚疫病病菌具有抑制作用,活菌体和发酵菌液的防效优于无菌滤液,预防效果优于治疗效果。

海洋多粘类芽孢杆菌L_1-9菌株对黄瓜的促生作用和诱导抗性研究

以黄瓜种子为试材,采用盆栽法研究了L1-9菌株发酵液浸泡黄瓜种子后,对黄瓜幼苗的根长、须根数、黄瓜枯萎病发生的影响,并测定了黄瓜根组织的过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)和多酚氧化酶(PPO)4种防御酶的酶活性变化。结果表明:L1-9菌株发酵液浸泡黄瓜种子,可促进黄瓜须根的增加和根伸长,对黄瓜枯萎病具有明显的防治效果;浸种处理后黄瓜幼苗根部PAL、POD、PPO、SOD 4种酶活性明显高于对照,4种酶活性高峰时期不同,表明L1-9菌株发酵液浸泡种子能够明显诱导黄瓜对枯萎病的抗性。

一株稻田土壤梭状芽孢杆菌的分离及其固氮产氢能力研究

为研究水稻土壤中协同固氮产氢菌的固氮产氢特性,拓展协同固氮产氢菌菌种资源,利用厌氧微生物富集培养、亨盖特厌氧滚管等技术,从华南稻田土壤中筛选到一株同时具有产氢和固氮能力的菌株BZ-1.经形态学观察及16S rRNA基因序列系统发育分析,鉴定菌株BZ-1属于梭状芽孢杆菌属(Clostridium sp.).通过测定产氢量、生物量、发酵产物及固氮酶酶活等,对菌株BZ-1的产氢能力及协同固氮产氢特性进行分析.结果表明:菌株BZ-1发酵34.55 mmol/L葡萄糖可产生42.19 mmol/L H_(2),主要副产物为丁酸(15.96 mmol/L)、乙酸(7.14 mmol/L)和乳酸(5.09 mmol/L);菌株BZ-1具有固氮酶活性,能够以N_(2)为唯一氮源进行生长;菌株BZ-1固氮产氢时,相比于添加7 mmol/L氯化铵的试验组,产氢量提高了14.71%,最大生物量降低了33.33%,乙酸产量提升了61.49%.研究显示,菌株BZ-1在协同固氮产氢条件下固氮能力的提升、生物量的降低以及核心碳代谢途径的改变可能是其产氢量提升的原因.固氮产氢菌株BZ-1的获得将为提高土壤肥力以及缓解铅、镉等重金属对农作物的胁迫作用提供新的思路.

豆豉中抗氧化芽孢杆菌的多样性分析和鉴定

从豆豉中分离筛选具有抗氧化能力的芽孢杆菌菌株，以豆粕为原料，以抗氧化性测试为筛选体系，筛选优良菌株并鉴定，了解菌株的抗氧化特性并为功能性成分的开发提供菌株资源。对菌株发酵豆粕上清液，使用DPPH·清除率作为初筛方法获得12株菌株，其清除率在86．2％～96．6％，使用·OH清除率等6种抗氧化评价方法进行复筛并测定多肽浓度，结果显示各抗氧化性测试方法间相关性不明显，仅有总抗氧化力与·OH清除率显著正相关，与·O2^-清除率极显著正相关。多肽浓度与各抗氧化性测试方法间无显著正相关，与脂质过氧化抑制率呈极显著负相关，提示12株菌株产生的抗氧化成分在类型和机理可能存在较高的多样性。将菌株发酵上清液密封后在50℃保存14d，抗氧化力均呈下降趋势，HFBL261菌株抗氧化力残留最高，对其表型形状和16S rDNA序列进行测定，鉴定为Bacillus subtilis。

与水稻互作的枯草芽孢杆菌OKB105菌株胞内全蛋白双向电泳条件的优化

用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)OKB105菌株菌悬液处理水稻种子及幼苗,发现OKB105菌株能够显著促进水稻生长。为了研究枯草芽孢杆菌的促生机制,建立了水稻与OKB105菌株的互作体系,并对互作后的OKB105菌株胞内全蛋白的双向电泳条件进行了优化。结果表明:分离胶浓度为10%,等电聚焦(IEF)程序中最高电压8 000 V,聚焦60 000 Vh且增加低电压慢速除盐步骤能够提高双向电泳图谱质量,为蛋白质组学水平上研究水稻与枯草芽孢杆菌的互作奠定了良好的基础。

海洋侧孢短芽孢杆菌(AMCC 100018)对设施黄瓜的应用效应研究

在绿源有机肥中添加不同比例的海洋侧孢短芽孢杆菌菌株(AMCC 100018),制成生物有机肥作为基肥施用在设施黄瓜上,同时以单施绿源有机肥为对照,研究了不同处理对黄瓜生长、品质、产量及土壤化学性状的影响。试验结果表明,海洋侧孢短芽孢杆菌菌剂与生物有机肥按1∶250施用,即海洋侧孢短芽孢杆菌菌剂用量6.67 kg/hm2,生物有机肥施用量1 665 kg/hm2,可有效促进黄瓜生长,显著改善黄瓜果实的营养品质。

抗番茄灰霉病菌的内生短短芽孢杆菌W4菌株发酵条件优化

为提高内生短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)W4菌株发酵液对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑菌活性,采用单因素试验与正交试验设计相结合,优化发酵培养基及发酵条件。结果表明,最佳发酵培养基为蛋白胨2.0%、果糖1.0%、NaCl 0.25%;最佳发酵条件为初始pH 8.0、接种种龄20 h、接种量5%、装液量50 mL(250 mL三角瓶)、发酵温度35℃、摇床转速150 r·min^(-1)、发酵时间24 h。产生的发酵液稀释25倍对番茄灰霉病菌的抑制率达92.8%,比未经优化得到的发酵液提高26.9个百分点。通过培养基和发酵条件优化,显著提高了短短芽孢杆菌W4发酵液活性,为进一步提取分离抗番茄灰霉病菌的活性成分奠定了基础。

细链格孢菌拮抗细菌枯草芽孢杆菌XL12菌株发酵产抗菌蛋白条件研究

为了提高细链格孢菌[Alternaria alternate（Fr）Keissler]拮抗细菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）XL12菌株的发酵产抗菌蛋白量,采用单因素法对XL12菌株的培养条件进行了优化,最终确定XL12最适宜的发酵条件为：基础培养基碳源和氮源（摩尔比）的比例为30∶1,接种量为0.5%,配制后灭菌前,培养液的pH调节在6.95~7.05,发酵温度为30~35℃,220 r.min-1摇床振荡培养72 h,用70%硫酸铵对XL12菌株发酵液上清液进行盐析,可以沉淀最多的抗菌蛋白。

枯草芽孢杆菌WR菌株对番茄灰霉病的生防潜力

为评估WR菌株对番茄灰霉病的生防潜力,测定了WR对番茄灰霉病菌的离体和活体活性。平板对峙培养和发酵液带毒培养试验表明,WR对番茄灰霉菌落生长的拮抗率达98.2%,WR发酵上清液的30倍稀释液对灰霉菌落生长的抑制率达94.5%。喷施带菌发酵液及其50倍稀释液,对采后番茄果实灰霉病发生的保护作用和治疗作用均达100%,果面光洁;而对照果实上灰霉菌生长旺盛,菌落平均直径1.10~1.13 cm,病害周围果实软化,碰触有臭味汁液流出。WR发酵上清液经11种不同性质的树脂吸附后的残液抑菌活性在2.2%~70.7%,表明发酵液抑菌活性成分丰富,D201和001×7均可作为活性成分富集树脂。经16S rDNA核苷酸序列鉴定,WR为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),具有防治番茄灰霉病的潜力。