解淀粉芽孢杆菌B1619对番茄的促生作用

解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens B1619是一株对设施番茄土传病害具有很好防治效果的生防菌株。为了明确其对番茄的促生作用,本研究通过室内盆栽试验研究了不同稀释倍数的生防菌B1619发酵上清液对番茄种子萌发和幼苗生长的影响;测定了喷施B1619菌液后番茄体内叶绿素、胡萝卜素和根系活力的变化;运用液质联用法检测了生防菌B1619上清液中促生相关物质（生长素、细胞分裂素、赤霉素、脱落酸和亚精胺）的含量。结果表明,生防菌B1619不同浓度的上清稀释液对番茄种子萌发和幼苗生长均有一定的促进作用,其中以100倍稀释液（4.8×10~7 cfu/mL）促生作用最大;用生防菌B1619不同浓度的上清稀释液对番茄喷施后,番茄植株的叶绿体色素、胡萝卜素和根系活力均有不同程度的增加,其中以100倍稀释液各生理指标活性增加最大（分别增加47.92%、38.37%和49.75%）;生防菌B1619上清液中生长素（IAA）、细胞分裂素（CTK）、赤霉素（GA3）、脱落酸（ABA）和亚精胺（Spd）的含量分别为1.90、1.30、0.0544、1.94和1.22 mg/L。本研究结果证实了解淀粉芽孢杆菌生防菌株B1619对番茄生长具有显著促生作用,且促生物质主要存在于上清液中。

枯草芽孢杆菌B034拮抗蛋白的分离纯化及特性分析

枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｂ０３４分离自水稻叶面，对水稻白叶枯病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液以７０％饱和度硫酸铵沉淀所得的拮抗物粗提液对热稳定，对胰蛋白酶不敏感，对蛋白酶Ｋ、链霉蛋白酶Ｅ部分敏感，对氯仿部分敏感，其作用的活性ｐＨ范围低至４，高至１２以上，比较耐碱性。粗提液经ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ柱层析、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｃｅｌ柱层析和ＨＰＬＣ的Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ＨＲ１０／３０柱层析，得到二个拮抗活性峰：Ｐ１和Ｐ２。Ｐ２经ＳＤＳＰＡＧＥ和ＰＡＧＥＩＥＦ电泳显示为单一蛋白带，分子量５０３ｋＤ，等电点６２５。

解淀粉芽孢杆菌B1619脂肽类抗生素的分离鉴定及其对番茄枯萎病菌的抑制作用

【目的】从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)生防菌株B1619发酵液上清中分离脂肽类抗生素,分析其抑菌活性相关成分,为应用解淀粉芽孢杆菌B1619菌株防控番茄枯萎病提供依据。【方法】利用特异性引物对B1619中3种脂肽类抗生素合成相关基因sfp、ituA和fenB进行检测;通过盐酸沉淀、甲醇抽提法等方法提取脂肽类抗生素粗提物;用Supelclean^(TM) LC^(-1)8柱及PHASE HF-NH2柱对3种脂肽类抗生素粗提物进行分离;通过MALDI-TOF-MS和HPLC分析、鉴定3种脂肽类抗生素;采用平板对峙培养分别测定3种脂肽类抗生素粗提物对番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici)的抑菌活性。【结果】从解淀粉芽孢杆菌B1619的基因组DNA中扩增sfp、ituA和fenB等脂肽类抗生素合成基因,扩增产物经克隆、测序分析,表明B1619菌株中含有这3个基因。通过HPLC分析,发现60%甲醇洗脱液分离物分别在12、16.5、18 min处出现相应峰值,保留时间与bacillomycin L标准品一致,分泌量为18.5 mg·L^(-1);70%甲醇洗脱液分离物分别在22、34、37、51及53 min处出现相应峰值,保留时间与fengycins标准品一致,分泌量为5.1 mg·L^(-1);100%甲醇洗脱液分离物分别在27、37、41、51及53 min处出现相应峰值,保留时间与surfactins标准品一致,分泌量为74.3 mg·L^(-1)。经液质联用进一步验证分析3种脂肽类抗生素的质子化峰值,60%甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 043.4、1 057.5和1 071.4 Da,是C13—C15的bacillomycin L;70%甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 463.9、1 477.9、1 491.9和1 505.9Da,是C15—C17的fengycins;100%甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 008.6、1 022.7和1 036.7 Da,是C13—C15的surfactins。平板对峙法试验结果表明1 mg·m L^(-1) bacillomycin L和fengycins对番茄枯萎病菌有较强的抑菌效果,而1 mg·m L^(-1)surfactins对番茄枯萎病菌的抑菌活性较弱,再将surfactins的浓度提高至3和6 mg·m L^(-1),发现其抑菌效果没有明显变化。【结论】B1619菌株分泌3种脂肽类抗生素,其中对番茄枯萎病菌生长起重要抑制作用的抗生素是bacillomycin L和fengycins,surfactins对番茄枯萎病菌的抑制活性较弱。

枯草芽孢杆菌B115抗菌蛋白的分离纯化及部分性质

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B115分离自水产养殖池塘,对鱼类细菌性败血症致病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液用浓盐酸沉淀,乙醇抽提所得的拮抗物粗提液对热不稳定,4℃保存不能超过两周,-18℃保存不能超过45d,对胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K部分敏感,对氯仿敏感,其作用活性pH范围较广,对pH不敏感。粗提液经CM柱离子交换层析和P-60柱层析,得到一个拮抗活性峰P2。粗提物经丙酮分级沉淀及高压液相色谱分离,得到较纯的LP,经质谱仪测定分子量为803.6D。1L发酵的细菌培养液可得到约1mg LP纯品。

巨大芽孢杆菌B196菌株发酵滤液的抑菌谱及其稳定性

分别以菌丝生长速率法和抑菌圈法测定了巨大芽孢杆菌B196菌株发酵滤液对18种植物病原真菌和7种细菌的抑制作用,发现该滤液抑菌谱较广,对供试的所有真菌均有抑制作用,对其中8种真菌的抑菌率在80%以上;对6种供试细菌有抑制作用,其中对水稻细菌性条斑病菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径达到27.67 mm。以水稻纹枯病菌为指示菌,测定了B196菌株发酵滤液的酸碱稳定性、热稳定性、蛋白酶稳定性及紫外线稳定性。结果表明,发酵滤液在pH 2～8条件下抑菌活性没有明显变化;经121℃处理20 min,抑菌活性为原有活性78.43%;对胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K均稳定,但对木瓜蛋白酶敏感;对紫外线稳定,在处理4 h后,抑菌率在80%以上。

解淀粉芽孢杆菌B1619对设施蔬菜根结线虫病的防治效果

通过设施大棚药效试验,探究解淀粉芽孢杆菌B1619对设施蔬菜根结线虫病的防治效果;通过室内毒力试验,测定解淀粉芽孢杆菌B1619对蔬菜根结线虫的毒杀效果。设施大棚药效试验结果表明,一般情况下,沟施的田间防效高于穴施;当施用菌粉量较少时,穴施田间防效高于沟施;设施番茄、黄瓜沟施解淀粉芽孢杆菌B1619量为16 g/株时,其防效分别为69.12%、87.77%。室内毒力测定试验结果表明,40%甲基异柳磷乳油对2龄线虫的EC_(50)(24 h)为85.252 1 mg/L,EC_(50)(48 h)为77.704 7 mg/L;解淀粉芽孢杆菌B1619发酵液对2龄线虫的EC_(50)(24 h)为12.056 0 CFU/m L,EC_(50)(48 h)为12.906 6 CFU/m L;解淀粉芽孢杆菌B1619粗提物对2龄线虫的EC_(50)(24h)为稀释9.324 6倍,EC_(50)(48 h)为稀释9.960 4倍。室内外试验结果均表明,解淀粉芽孢杆菌B1619对设施蔬菜根结线虫病有明显的防治效果。

吡虫啉等11种农药对枯草芽孢杆菌B36菌株可湿性粉剂防治番茄灰霉病效果的影响

生物农药受环境影响较大已是学界的共识,这也是生物农药药效不稳定的主要原因。通过研究吡虫啉等11种番茄保护地常用农药对枯草芽孢杆菌B36菌株可湿性粉剂防治番茄灰霉病效果的影响,结果表明:1.8%阿维菌素乳油与B36可湿性粉剂混用可以明显提高B36可湿性粉剂防治番茄灰霉病的药效,其预防效果与治疗效果分别提高2.59百分点与5.84百分点。80%代森锰锌可湿性粉剂与B36可湿性粉剂混用降低了B36可湿性粉剂防治番茄灰霉病的药效,其预防效果与治疗效果分别降低1.77百分点与5.28百分点。其余9种农药对枯草芽孢杆菌B36菌株可湿性粉剂防治番茄灰霉病存在一定影响,但均不显著。

培养条件对枯草芽孢杆菌B68芽孢产量的影响

为了提高枯草芽孢杆菌B68芽孢形成率及芽孢数量,研究了营养条件、初始pH值、溶氧水平对其芽孢产量的影响。结果表明:芽孢形成的最适培养基组成为(g/L):葡萄糖10g,大豆饼粉10g,NaCl 5g,MnSO4.H2O 0.6g;最佳初始pH值7.0;最佳装瓶量为250ml三角瓶装100ml培养液。在此条件培养下,于150r/min、28℃恒温培养72h后,芽孢数量最高可达到1.60×1014cfu/ml,芽孢形成率可达到88.92%。

解淀粉芽孢杆菌B1619对加工番茄幼苗促生及培育壮苗的影响

【目的】研究解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens B1619对加工番茄幼苗促生和苗期病害防控的综合作用,为培育壮苗,提供绿色的管理技术。【方法】采用室内穴盘育苗试验,分别用基质拌药和苗期喷雾法,研究解淀粉芽孢杆菌B1619对加工番茄幼苗生长的促进作用,以及对苗期病害的预防作用,研究其促生和防病的效果。【结果】各处理的出苗率达到稳定状态,呈现出现先抑制后促进的生长态势。1∶150出苗率最好、1∶100次之,1∶200出苗率较差,拌土法比喷雾法对番茄株高的促生作用更强。以1∶150拌土对番茄茎粗的促进作用最强。不同拌土量处理的叶绿素含量与对照之间具有极显著性差异,叶绿素含量比对照增加7.68%~10.20%,拌土法对幼苗猝倒病具有较强的预防作用,1∶150和1∶200拌土发病率只有0.00~0.08%。【结论】解淀粉芽孢杆菌B1619能够改善加工番茄育苗穴盘的土壤生态环境,施用后土壤蓬松,对番茄根系和幼苗的生物量比对照有显著性增加;叶片颜色较深,叶绿素含量增加。能够提高番茄免疫力,增强抗病性,对加工番茄幼苗猝倒病具有较强的预防作用。

枯草芽孢杆菌B67对黄瓜幼苗生长发育的影响

为明确枯草芽孢杆菌B67对黄瓜幼苗生长发育的影响,采用水培法,测定了不同浓度枯草芽孢杆菌对黄瓜苗期地上部(平均直径、茎长、干质量、鲜质量)和地下部(根长、根表面积、根体积、根平均直径、须根数、根鲜质量和干质量)生长及根冠比的影响。结果表明,20%枯草芽孢杆菌B67菌液处理2次的黄瓜幼苗长势良好,处理后21 d平均直径4.88 mm,株高11.15 cm,根长21.65 cm,根冠比0.94,与各处理结果差异显著。不同浓度B67菌液对黄瓜苗期促生作用呈正态分布,浓度为20%枯草芽孢杆菌B67菌液,施药2次(间隔期7 d)促生效果最佳,为指导B67菌液在肥料中添加及创制新型农药提供了理论依据。

复合肥和解淀粉芽孢杆菌B9601-Y2对云南松苗木生长的影响

采用L9(34)正交试验设计进行云南松苗木培育的施复合肥和解淀粉芽孢杆菌菌株B9601-Y2(Y2菌株)浸种2因素3水平的试验,分别在苗龄60、130和200 d时测定苗木生长量及生物量,探究施复合肥和Y2菌株对此阶段云南松苗木生长的影响。结果表明,3个苗龄阶段苗高最高的是施复合肥44 g·m-2与Y2菌株6.4×105CFU·mL-1浸种的组合,分别达4.66、6.90和9.48 cm。影响地径和苗高的关键因子是施肥,实际综合的因素水平最优组合为44 g·m-2复合肥和6.4×105CFU·mL-1Y2菌株浸种的组合。方差分析结果表明,施复合肥和Y2菌株浸种的交互作用显著地影响苗木地径的生长(P=0.015-0.020<0.05),施肥对130和200 d的苗高具有极显著的差异影响(P≈0.000<0.01)。

枯草芽孢杆菌B21抗菌蛋白的分离纯化及特性研究

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）B21对番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers.）有较强的抑制作用,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白。为明确该抗菌蛋白的理化性质,利用饱和硫酸铵沉淀法得到拮抗粗提蛋白,所获粗提蛋白不耐高温,对胰蛋白酶和蛋白酶K部分敏感,对链霉蛋白酶不敏感而对氯仿敏感,作用活性pH值范围在5~11之间。经过Sephacryl S-200 HR凝胶过滤柱层析和DEAE Fast Flow离子交换层析等方法从B21的发酵液中纯化了抗菌蛋白,通过SDS-PAGE电泳分析,确定该蛋白质的分子量为43 kDa。

枯草芽孢杆菌B_2发酵工艺及其质量检测方法研究

研究了枯草芽孢杆菌B2从种子发酵液到发酵罐的放大培养,通过正交优化试验筛选枯草芽孢杆菌B2发酵的优化组合、种子罐和发酵罐的发酵时间及发酵液的质量检测方法.结果表明:枯草芽孢杆菌B2的最佳发酵组合为接种量10%,pH 7.5,通气量1 000 L.h-1,转速200 r.min-1;种子罐的发酵时间为20 h;发酵罐最适放罐时间为36 h.发酵液质量检测以活菌量为主要指标,辅助比浊法检测.

芽孢杆菌B_(15)胞外蛋白酶和淀粉酶的酶学性质研究

为探索芽孢杆菌B15胞外蛋白酶和淀粉酶在饲用酶制剂方面的应用,试验对其产酶情况及胞外酶的酶学性质进行了研究。结果显示,该菌株产蛋白酶和淀粉酶的最高酶活性分别为(181.9±3.5)U/mL和(50.2±1.6)U/mL。蛋白酶和淀粉酶的最适作用温度范围分别为40℃～50℃和40℃～70℃,最适作用pH值为7和5～7。蛋白酶和淀粉酶经40℃～50℃热处理,以及在pH值为5～9的缓冲液中较稳定。蛋白酶被EDTA所抑制,属金属蛋白酶,金属离子(10mmol/L)Mg2+和K+对其有激活作用,Fe2+有抑制作用,而Fe2+对淀粉酶有一定的激活作用。

芽孢杆菌B_(15)及其代谢产物对棉花枯萎病菌的抑菌效果

考察了芽孢杆菌B15菌株及其代谢产物对棉花枯萎病菌的抑菌效果及作用方式。结果表明,芽孢杆菌B15对棉花枯萎病菌有较强的抑菌作用,抑菌圈达30mm,尤其对病原菌孢子抑制作用较强。无菌发酵滤液对孢子萌发的抑制率为46%,处理孢子悬液6h可使54%的孢子致死。

枯草芽孢杆菌B25抗菌物质初步研究

枯草芽孢杆菌B25能够产生抗菌活性物质,对香蕉枯萎病具较好的抑菌效果。研究了抗菌活性物质产生的时间,以及对温度、pH值和蛋白酶(胰蛋白酶、蛋白酶K)的敏感性;并用10、30、50 ku的超滤管超滤。研究结果表明:抗菌物质是从对数期后期就开始产生的,稳定期活性上升到最大值并一直保持在这个水平;该活性物质对热稳定,可于100℃煮沸1 h而不失活;在酸性、中性及微碱性条件下相对稳定,在强碱性条件下不稳定;对蛋白酶K和胰蛋白酶敏感;10、30 ku的超滤管时超滤膜下面的滤过液无活性,50 ku超滤管时超滤膜下面的滤过液才有活性。

枯草芽孢杆菌B_2种子液发酵条件的研究

采用单因子、双因子及正交试验,对枯草芽孢杆菌B2的培养液组成(碳源、氮源、酵母膏、pH值)及培养条件(装液量与转速)进行了研究,结果表明:以葡萄糖1%,牛肉胨0.8%,酵母膏0.5%及pH 8制成的培养液,装液量100 mL/250 mL锥形瓶,转速140 r/min,培养B236 h为最佳培养条件,在此条件下,活菌数可达2.97×1010cfu/mL,分别是D培养液和NB培养液的2.05倍和52.36倍.

芽孢杆菌B_(15)的分子生物学鉴定及高产蛋白酶菌株选育

利用16S rDNA序列分析法,对分离自土壤产蛋白酶和淀粉酶及拮抗物质的芽孢杆菌B15进行菌种鉴定。通过序列比对及构建系统发育树,表明菌株B15与Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum AS43.3相似性达99%,鉴定为解淀粉芽孢杆菌植物亚种。菌株B15经过2次紫外线诱变,蛋白酶产量提高到初始菌株的147.1%。试验发现诱变株的淀粉酶产量与蛋白酶产量呈正相关。

芽孢杆菌B_(15)对棉花枯萎病菌的拮抗性能

考察B15菌株对棉花枯萎病菌———尖孢镰刀菌的抑制效果,并对B15的抗菌谱、菌种稳定性、在土壤中菌数及拮抗活性变化以及液体培养基进行研究。结果表明:芽孢杆菌B15对棉花枯萎病菌有较强的抑制作用,抑菌圈达30 mm。B15抗菌谱广,拮抗性能稳定,经转接传代10次后无明显衰退。在4℃、28℃、55℃的土壤中放置30 d,最高存活率达55.5%,拮抗性能与对照相当。加有黄豆粉的培养基有利于B15增殖和芽孢形成。研究结果表明:B15是一株极具开发潜力的生防菌株。

巨大芽孢杆菌B1301分泌物的抑菌作用及其特性的研究

从生姜块茎周围的土壤中筛选到一株巨大芽孢杆菌B1301,该菌株对多种农作物有害真菌有强烈的拮抗作用,抑菌物质是该菌分泌的一种蛋白质,分级盐析初步分离后,对这种蛋白质的特性进行了研究。结果表明:B1301菌株在LB中培养30h后抑菌蛋白浓度达到最高(基本稳定),抑菌蛋白对100℃以下的温度完全不敏感,而120℃5分钟后它将失活,对蛋白酶K敏感,抑菌谱显示,对棉花立枯病菌、小麦纹枯病菌、全蚀病菌、茄假单胞杆菌、枯萎病菌、黄萎病菌、白叶枯病菌、根瘤镰刀病菌都有较强的抑制作用。