芽胞杆菌CQBS03抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达

为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白,纸碟法检验融合蛋白对柑桔溃疡病菌Xanthomonas citri citri的抑制作用。结果显示,CQBS03菌株的TasA基因包含1个786 bp的完整开放阅读框(GenBank登录号为JQ309841),编码261个氨基酸残基;该序列与来源于解淀粉芽胞杆菌B.amyloliquefaciens的1个已知同源TasA基因序列FJ713580的相似性达99.75%。原核表达产物经SDS-PAGE分析,检测到约31 kD的融合蛋白;纯化后的融合蛋白对柑桔溃疡病菌有明显的抑制作用,72 h后抑菌圈直径达11.5 mm。研究表明TasA基因是生防菌芽胞杆菌CQBS03抑制柑桔溃疡病菌的功能基因之一,并且该基因对原核表达宿主没有抑制作用,具有较好的开发利用前景。

光照等条件对G03菌株繁殖及其ZwA合成的影响

以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt) G03菌株为对象,研究光照、碳源、氮源、无机盐、培养基初始pH和培养温度等条件对该菌株繁殖及其代谢产物杀虫晶体蛋白和Zwittermicin A(ZwA)活性的影响。结果表明,G03菌株发酵培养基的最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母粉,最适无机盐为氯化钠,最适培养温度为30℃,最适的初始pH为7～7. 5; ZwA的最适合成条件与之相同,但是其最适初始pH为8. 0;菌株在4 000lux下发酵40 h时繁殖量最大;杀虫晶体蛋白积累量在4 000 lux下发酵55 h时最大;黑暗条件下ZwA的积累量较2 000 lux光强下的大。