肉苁蓉多糖通过影响肠道菌群抑制Toll样受体4/核因子-κB途径改善小鼠糖尿病肾病

旨在探究肉苁蓉多糖(Cistanche deserticola polysaccharides,CDPs)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠模型的改善作用及其可能机制。通过高糖高脂饮食结合链霉佐菌素注射建立DN模型,将36只C57BL/6N雄性小鼠随机分组,实验组给予CDPs不同剂量处理,持续4周。检测小鼠的生理指标、肾功能、炎症因子和肠道菌群变化。结果显示,CDPs可显著改善DN小鼠的一般状态和肾脏病理结构,降低血糖、尿蛋白等指标,减少炎症因子的水平。此外,CDPs可影响肠道菌群平衡,通过增加有益菌相对丰度、降低潜在致病菌、改善肠道屏障功能。CDPs还可抑制Toll样受体4/核因子-κB信号通路的活化,减少脂多糖的释放。综上,CDPs通过影响肠道菌群和抑制炎症信号通路,对DN小鼠模型表现出改善作用,结果可为DN治疗提供新的思路。

草苁蓉多糖下调miR-302a-3p表达对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨草苁蓉多糖(boschniakia rossica polysaccharides,BRPS)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,不同剂量的BRPS处理H9c2细胞;酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性;流式细胞术检测凋亡率;qRT-PCR检测miR-302a-3p的表达量;anti-miR-NC、anti-miR-302a-3p分别转染至H9c2细胞后进行H/R处理,miR-NC、miR-302a-3p mimics分别转染至H9c2细胞后加入100 mg·L^(-1)BRPS处理24 h,进行H/R处理;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达;线软件预测和双荧光素酶报告实验检测miR-302a-3p和LRP8的靶向关系;Western blot检测低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)的表达量。结果BRPS降低H/R诱导的H9c2细胞中MDA的水平、miR-302a-3p的表达量、细胞凋亡率、Bax表达(P<0.05),提高SOD、GSH-Px、Bcl-2(P<0.05);转染anti-miR-302a-3p后,MDA的水平、细胞凋亡率、Bax表达下调(P<0.05),SOD、GSH-Px、Bcl-2上调(P<0.05);转染miR-302a-3p mimics后,MDA的水平、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px和Bcl-2降低(P<0.05)。miR-302a-3p靶向调节LRP8,且BRPS通过下调miR-302a-3p上调LRP8基因的表达。结论BRPS通过调节miR-302a-3p/LRP8轴减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

肉苁蓉多糖对便秘型肠易激综合征大鼠的影响

目的探讨肉苁蓉多糖(简称CDPS)对便秘型肠易激综合征(IBS-C)大鼠的影响。方法将SD大鼠分为对照组(20只)和造模组。造模组大鼠灌胃0~4℃生理盐水2 mL(每天1次,连续14 d)诱导IBS-C模型。将造模成功的大鼠分为模型组、阳性对照组(枸橼酸莫沙必利,1.35 mg/kg)和CDPS低、高剂量组(50、100 mg/kg),每组20只。各药物组大鼠灌胃相应药液,对照组和模型组大鼠灌胃等体积水,每次1次,持续28 d。检测各组大鼠的粪便含水量、血清5-羟色胺(5-HT)含量、炭末推进率,观察其结肠组织病理形态并检测结肠组织中神经生长因子(NGF)、原肌球蛋白受体激酶A(TrkA)mRNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠的粪便含水量和炭末推进率均显著降低(P<0.05),结肠组织黏膜肌层断裂,炎症细胞浸润和细胞水肿明显,血清5-HT含量和结肠组织中NGF、TrkA mRNA及蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各药物组大鼠的粪便含水量和炭末推进率均显著升高(P<0.05),结肠组织病理改变明显减轻,血清5-HT含量和结肠组织中NGF、TrkA mRNA及蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05),其中,阳性对照组和CDPS高剂量组的上述指标普遍接近于对照组(P>0.05)。结论CDPS可缓解IBS-C大鼠的症状,该作用可能与NGF/TrkA信号通路被抑制有关。

肉苁蓉多糖的巨噬细胞活化作用

目的观察肉苁蓉多糖(CDPS)对巨噬细胞的活化作用。方法采用中性红法测定吞噬活性;Griess试剂法测定NO释放量;L929细胞法及小鼠胸腺细胞法测定TNF-α及IL-1释放。结果CDPS在6.25～50mg.L-1剂量范围内可剂量依赖性地增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力和促进NO释放;在2.8～100mg.L-1剂量范围内可使正常和免疫抑制的RAW264.7细胞NO释放明显增加;在0.56～7.2mg.L-1或3.6～10mg.L-1范围促进RAW264.7细胞TNF-α或IL-1产生,均具有良好的量效关系。结论CDPS可明显提高巨噬细胞吞噬及分泌功能,活化巨噬细胞。肉苁蓉免疫增强作用可能与此有关。

草苁蓉多糖的抗肿瘤作用及免疫调节作用

目的:观察草苁蓉多糖对荷瘤小鼠免疫器官的调节作用及对免疫功能的影响。方法:接种肝癌细胞H22的荷瘤小鼠随机分为50、100、200和400 mg.kg-1.d-1草苁蓉多糖组、阴性对照组及阳性对照组(环磷酰胺组),按剂量给药。10 d后处死小鼠,分别称量脾重、胸腺重,检测荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数;采用MTT法测定NK细胞活性;淋巴细胞转化实验测定T淋巴细胞转化率(LTT);中性红比色法观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力;通过称量各小鼠实体瘤的重量,计算抑瘤率。结果:草苁蓉多糖能够显著抑制肿瘤生长,抑瘤率达38.86%;与阴性对照组比较,实验组荷瘤小鼠的脾脏指数显著提高(P<0.01),胸腺指数则有降低趋势,T淋巴细胞的转化率、NK细胞的活性、巨噬细胞的吞噬能力显著增强(P<0.01),与给药剂量存在正相关关系。结论:草苁蓉能抑制肿瘤生长,对小鼠免疫功能具有调节作用。

肉苁蓉多糖对东莨菪碱所致学习记忆障碍模型小鼠在突触可塑性方面的保护作用

目的研究肉苁蓉多糖(CDPS)对东莨菪碱所致学习记忆障碍小鼠在突触可塑性方面的改善作用。方法昆明小鼠随机分为6组,分别为东莨菪碱模型组、正常对照组、CDPS小剂量(25 mg·kg-1)组、CDPS中剂量(50 mg·kg-1)组、CDPS大剂量(100 mg·kg-1)组和阳性对照组。除正常对照组外,其他组小鼠口服给CDPS 6周,并于Morris水迷宫训练第4天前腹腔注射东莨菪碱4mg·kg-1,30 min后进行行为学指标测定,包括Morris水迷宫和跳台试验。处死取脑海马组织,运用Western blot技术及RT-PCR比较小鼠海马区GAP-43,SYP以及PSD-95的蛋白水平及基因水平的表达差异,并用透射电镜观察海马CA3区突触数量与相关结构的变化。结果 CDPS(25、50、100 mg·kg-1)组小鼠与正常对照组小鼠在水迷宫实验的潜伏期明显短于模型组小鼠,而且在Q3象限的时间明显大于模型组小鼠。CDPS(50、100mg·kg-1)组小鼠跳台实验中的错误次数与模型组小鼠相比减少。Western blot与RT-PCR实验结果显示,模型组小鼠海马区GAP-43、SYP的表达水平与正常对照组比较明显降低。CDPS(25、50、100 mg·kg-1)组小鼠海马区SYP的表达较模型组明显增高,CDPS(25、50 mg·kg-1)组小鼠海马区GAP-43的表达水平较模型组明显增高,PSD-95的表达在不同组中没有明显变化。最后,我们观察小鼠海马CA3区的超薄切片发现,CDPS可以使CA3区突触数量增多。结论东莨菪碱可以造成小鼠学习记忆障碍模型,并使小鼠海马区相关蛋白表达异常,由此引起突触可塑性的变化,进而导致学习记忆能力的改变。而CDPS能够提高SYP与GAP-43的表达,增多突触数量,使突触可塑性有所恢复,并且改善小鼠的学习记忆能力。

实验性衰老小鼠肺功能和超微结构的变化及肉苁蓉多糖的影响

目的 观察实验性衰老小鼠肺组织细胞超微结构的退行性改变和肉苁蓉多糖对其的影响。方法 使用臭氧(Ozone,O3 )连续吸入 4wk致肺衰老模型 ,应用肉苁蓉多糖5 0 ,10 0mg·kg-1·d-1灌服模型小鼠 6wk ,检测衰老小鼠的耐缺氧能力、肺和血清中超氧化物歧化酶 (SOD)活性、丙二醛 (MDA)含量 ,电镜下观察肺组织细胞器和超微结构的变化。结果 臭氧所致实验性衰老小鼠耐缺氧能力明显下降 ;肺和血清中SOD降低、MDA升高。与模型组比较 ,肉苁蓉多糖能明显延长衰老小鼠耐缺氧时间 (P <0 0 1) ,提高血清中SOD活力、降低MDA含量 (P <0 0 1) ,延缓衰老小鼠肺细胞线粒体、板层小体等超微结构的退变 (P <0 0 1)。结论 肉苁蓉多糖能明显延缓实验性衰老小鼠肺的生理性退化与细胞形态学退变。

肉苁蓉多糖对衰老小鼠肺蛋白含量与抗氧化功能关系的影响

使用D 半乳糖造成小鼠实验性衰老模型 ,观察肉苁蓉多糖对实验性衰老小鼠肺胶原蛋白、弹性蛋白含量的影响 ,对肺组织和红细胞中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)及丙二醛 (MDA)含量的影响。结果 灌服肉苁蓉多糖的衰老小鼠的肺组织及红细胞中SOD、GSH Px活力不同程度提高 ,肺及血浆中丙二醛含量有所降低。同时肺胶原蛋白含量减少 ,弹性蛋白含量增多。

肉苁蓉多糖对D-半乳糖所致急性衰老模型保护作用研究

目的通过体内及体外研究肉苁蓉多糖(CDPS)对D-半乳糖所致急性衰老模型的保护作用,并探讨其可能作用机制。方法(1)采用D-半乳糖建立急性衰老小鼠模型,采用Morris水迷宫实验,观察肉苁蓉多糖(25、50、100 mg·kg-1)对衰老所致小鼠学习记忆能力障碍的影响。(2)建立了PC12细胞衰老体外模型,在给予肉苁蓉多糖(150、200 mg·L^(-1))后,采用Western blot检测核蛋白中p-CREB蛋白的表达水平变化。ELISA试剂盒检测环腺苷酸(cA MP)、cA MP依赖蛋白激酶(PKA)和脑源性神经营养因子(BDNF)的含量。此外,在PKA阻断剂H89存在的情况下,检测以上各项指标的变化。(3)建立基于UPLC/Q Exactive质谱检测神经递质谷氨酸、多巴胺和去甲肾上腺素的方法,检测肉苁蓉多糖对于PC12细胞以上神经递质分泌影响。结果(1)体内实验Morris水迷宫实验中,肉苁蓉多糖明显改善D-半乳糖所致衰老模型小鼠学习记忆能力;(2)体外实验中,CDPS给药组作用24h后,可以剂量依赖性地提高细胞核内p-CREB水平(P<0.05),增加PKA及cA MP活性,提高BDNF水平(P<0.05)。阻断剂H-89干预0.5 h后,明显阻断肉苁蓉多糖的这种升高作用。(3)体外实验中,肉苁蓉多糖促进PC12细胞神经递质多巴胺、去甲肾上腺素和谷氨酸分泌。结论肉苁蓉多糖对衰老模型小鼠的学习记忆能力具有明显的改善作用,其机制可能与上调cA MP/PKA/CREB/BDNF信号通路,适度提高兴奋性神经递质有关。

肉苁蓉多糖对衰老大鼠肝线粒体保护作用的研究

目的观察肉苁蓉多糖对D-半乳糖致衰大鼠肝线粒体氧化损伤的保护作用。方法采用D-半乳糖所致衰老模型大鼠,灌服肉苁蓉多糖6 w,测定肝脏Ca2+-ATP酶活性、肝线粒体丙二醛(MDA)含量、磷脂酶A2(PLA2)活性、膜流动性及呼吸链复合体Ⅰ+Ⅲ、Ⅱ+Ⅲ活性。结果肉苁蓉多糖显著提高衰老模型大鼠肝脏Ca2+-ATP酶活性、肝线粒体膜流动性及呼吸链复合体Ⅰ+Ⅲ、Ⅱ+Ⅲ活性,显著降低肝线粒体MDA含量、PLA2活性。结论肉苁蓉多糖能提高衰老模型大鼠肝线粒体抗氧化能力,改善线粒体能量代谢,具有抗衰老作用。

肉苁蓉多糖对阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力及海马神经元Bcl-2和caspase-3表达的影响

目的观察肉苁蓉多糖对阿尔茨海默病(Alzheimer's diseases,AD)模型大鼠的学习记忆能力及脑内海马神经元Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法采用双侧海马注射Aβ25-35制备AD大鼠模型,采用Morris水迷宫检测肉苁蓉多糖对模型大鼠认知功能的的影响,通过病理形态观察肉苁蓉多糖对模型大鼠的脑保护作用。采用Western观察肉苁蓉多糖对模型大鼠海马神经元Bcl-2和Caspase-3的表达的影响。结果肉苁蓉多糖(20,40,80 mg/kg,ig 6d)能改善模型大鼠的学习记忆能力,减轻大鼠海马神经元的损伤,增强受损海马神经元Bcl-2的表达,抑制Caspase-3的表达。结论肉苁蓉多糖能通过增强Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达,抑制海马神经元的凋亡,改善AD大鼠学习记忆能力。

草苁蓉多糖的毒性实验研究

按照我国《食品安全性毒理学评价程序和方法》的要求,采用急性毒性实验(LD50)、最大耐受量测定、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验及小鼠精子畸变实验,研究了草苁蓉多糖急性毒性及遗传毒性作用.结果表明,草苁蓉多糖LD50值大于24g/kg,最大耐受量为30g/kg;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核数量、小鼠精子畸变数量与空白对照组比较无明显差异.草苁蓉多糖属一级无毒物,未见有致突变作用.

肉苁蓉多糖对THP-1细胞吞噬作用的影响及其机理研究

将单核细胞株THP-1按照随机数字表随机分为观察组和对照组两组,正常的观察组给予肉苁蓉多糖培养液,根据肉苁蓉多糖浓度不同又分为10、50、100μg/L组,对照组不添加肉苁蓉多糖培养液,实验组中的不同浓度组、对照组,每组各24例.比较各组THP-1细胞吞噬率、吞噬指数以及细胞因子分泌水平,以此研究肉苁蓉多糖对THP-1细胞吞噬作用的影响并探讨其发生机理.结果显示,观察组中10、50、100μg/L组单核巨噬细胞吞噬率分别为(17.42±3.19)%、(23.32±3.82)%、(29.41±4.11)%,均高于对照组的(9.34±1.26)%,比较差异有统计学意义(F=162.63,P<0.01);10、50、100μg/L组单核巨噬细胞吞噬指数分别为(0.45±0.13)、(0.67±0.19)、(0.82±0.21),均高于对照组的(0.22±0.09),比较差异有统计学意义(F=62.60,P<0.01);10、50、100μg/L组IFN-γ分别为(4.21±1.11)、(7.38±1.86)、(9.51±2.10)mg/L,均高于对照组(0.79±0.06)mg/L,比较差异有统计学意义(F=152.74,P<0.01);10、50、100μg/L组IL-1分别为(24.11±4.15)、(74.60±11.21)、(103.61±19.65)mg/L,均高于对照组(10.21±1.39)mg/L,比较差异有统计学意义(F=343.15,P<0.01),各指标进一步采用Newman-Keals法进行两两比较均有统计学意义(P<0.01).由此认为,肉苁蓉多糖可能通过增强THP-1细胞吞噬能力和促细胞因子释放发挥免疫调节功能.

肉苁蓉多糖对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及氧化应激影响的实验研究

目的观察肉苁蓉多糖(Cistanche Deserticola,CDPS)对阿尔茨海默病(Alzhemer’s disease,AD)模型大鼠学习记忆及氧化应激的影响,并探讨其可能治疗机制。方法采用Aβ1～40侧脑室注射复制AD大鼠模型,并随机分为正常组、假手术组、模型组、肉苁蓉多糖低中高剂量组(50,100,200mg/kg-1d-1),每日予以相应药物灌胃治疗后检测大鼠学习记忆能力及脑组织中自由基代谢指标(SOD、MDA),并检测NO和ROS的变化。结果肉苁蓉各剂量组均能显著降低大鼠实际逃避潜伏期(P<0.01),明显提高SOD活性,降低MDA含量(P<0.01);各剂量组均显著降低NO和ROS含量(P<0.01)。结论肉苁蓉多糖治疗AD的机制可能与提高抗氧化能力、加速自由基清除实现的。

肉苁蓉多糖药理作用研究概况

肉苁蓉为国家二级保护植物,含多种活性成分,多糖是其主要活性成分之一。本文综述了肉苁蓉多糖的免疫调节、抗衰老、改善脾虚、抗病毒抗肿瘤、促进造血等方面的药理作用及作用机制,以冀为其合理利用提供帮助。

肉苁蓉多糖对D-半乳糖致衰小鼠脑神经细胞的保护作用及机制

目的探讨肉苁蓉多糖对D-半乳糖致衰老小鼠脑神经细胞的保护作用及其机制。方法建立D-半乳糖致衰小鼠模型,观察肉苁蓉多糖对脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、神经细胞凋亡及DNA损伤和凋亡相关基因Bcl-2的表达情况。结果衰老小鼠脑神经细胞MDA含量、DNA损伤率和细胞凋亡率明显增加(P<0. 01),SOD活性、GSH-Px活力及Bcl-2基因表达明显降低(P<0. 05)。灌服肉苁蓉多糖可提高SOD活性、GSH-Px活力,降低MDA含量,增强神经细胞DNA损伤的修复能力,减少凋亡细胞数,增加Bcl-2基因表达。结论肉苁蓉多糖对D-半乳糖致衰小鼠脑神经细胞具有保护作用。

肉苁蓉多糖对骨髓抑制性贫血小鼠造血调控的实验研究

目的:观察肉苁蓉多糖对骨髓抑制贫血小鼠造血功能的影响,探讨其造血调控作用机制。方法:采用CO60照射和注射环磷酰胺复合制备贫血小鼠模型。应用流式细胞术(FCM)检测肉苁蓉多糖对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期的影响,采用造血祖细胞培养术观察三系造血祖细胞集落数。结果:低剂量和高剂量肉苁蓉多糖能明显促进骨髓G0/G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2/M期细胞的转化,G2/M期细胞比例明显升高,增殖指数(PI)也明显升高。给药组CFU-E,BFU-E,CFU-MeG与贫血对照组集落数有显著差异。结论:肉苁蓉多糖可能通过促使骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞细胞周期的转化,促进骨髓造血功能的恢复,并促进红系巨核系造血。

草苁蓉多糖对过氧化氢损伤HepG2细胞NF-κB表达的影响

目的探讨草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)损伤的Hep G2细胞核转录因子(NF)-κB表达的影响。方法以Hep G2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用蛋白印迹法检测NF-κB、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、血红素氧合酶(HO)-1、环氧化酶(COX)-2以及核因子-E2相关因子2(Nrf2)的蛋白表达。结果 H_2O_2损伤Hep G2细胞后,NF-κB p65和Nrf2蛋白水平升高,i NOS、HO-1、COX-2蛋白水平升高。BRPS处理可降低Hep G2细胞NF-κB p65水平,对Nrf2蛋白水平无显著影响。BRPS同时降低i NOS、HO-1蛋白水平,但对COX-2蛋白水平无影响。结论 BRPS降低H_2O_2损伤的Hep G2细胞i NOS、HO-1蛋白水平,这可能与降低NF-κB活化有关。

肉苁蓉多糖的促淋巴细胞增殖作用

目的研究肉苁蓉多糖(CDPS)对小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖。环磷酰胺(Cy)复制免疫功能低下的动物模型,分别测定正常及免疫低下动物脾脏、胸腺指数。胸腺细胞增殖法测定白细胞介素-2(IL-2)活性。结果CDPS对丝裂原(ConA及LPS)活化淋巴细胞及未活化正常细胞均有明显促增殖作用,并促进淋巴细胞IL-2的分泌。腹腔给药显示CDPS具明显提高正常及免疫低下小鼠的脾指数,对因Cy所致胸腺指数的降低也有显著的对抗作用。结论CDPS可显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,该作用可能与其促IL-2分泌有关。

肉苁蓉多糖含量测定

目的:建立肉苁蓉多糖的含量测定方法。方法:以精制肉苁蓉多糖测得肉苁蓉多糖对葡萄糖的换算因子,利用苯酚-硫酸法测定肉苁蓉多糖含量。结果:测得肉苁蓉生药中多糖含量12.0%,平均回收率为99.81%,RSD=2.67%(n=6)。结论:该方法简便,可行,可用于肉苁蓉多糖的含量测定。