陈建杰“苍菊清肝方”治疗非酒精性脂肪肝验案1则

上海市名中医陈建杰教授创制的"苍菊清肝方",获得国家发明专利。该方能有效改善非酒精性脂肪肝患者临床症状,调节脂质代谢,恢复肝功能,在非酒精性脂肪肝的治疗中发挥较好的作用。附验案1则以说明。

基于“肝脏-胆汁酸-肠道微生态”的苍菊清肝方治疗非酒精性脂肪肝的机制研究

目的:探索高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型小鼠的“肝脏-胆汁酸-肠道微生态轴”失衡的病理机制,验证苍菊清肝方对“肝脏-胆汁酸-肠道微生态轴”失衡的调节,进一步阐明苍菊方治疗NAFLD的机制。方法:32只雄性SPF级SD大鼠随机分为空白组(N,n=5)和高脂饮食组(HFD,n=27)。空白组5只给予普通饲料,高脂饲料组以高脂饲料(胆固醇1%,猪油10%,蔗糖20%)喂养,诱导NAFLD模型。饲养8周后,高脂饮食组造模成功的25只大鼠再随机分为模型组(HFDM,n=5)、益生菌组(YSJ,n=5)、苍菊方高剂量组(CJFH,n=5)、苍菊方中剂量组(CJFM,n=5)、苍菊方低剂量组(CJFL,n=5)。利用全自动生化仪检测各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)含量。HE染色观察大鼠肝组织病变程度以及脂质沉积情况。用Illumina高通量测序法,对大鼠粪便样本总DNA的16Sr RNA的V3~V4区进行基因测序以及生物信息学分析。结果:与空白组比较,模型组血清ALT、AST升高,TC、TG、LDL-C升高,HLD-C降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,益生菌组、苍菊方各剂量组大鼠血清ALT、AST、TC下降(P<0.05),苍菊方中高剂量组大鼠血清大鼠血清TG下降(P<0.05),益生菌组、苍菊方中高剂量组大鼠血清HLD-C升高,苍菊方高剂量组大鼠血清LDL-C下降(P<0.05)。HE染色显示,模型组大鼠肝脏中肝细胞出现弥漫性、大小不等的空泡,出现气球样变,汇管区炎症细胞浸润明显,肝细胞排列紊乱可见大量大小脂滴,颜色深。各给药组均能改善NAFLD大鼠肝细胞内损伤程度,存在部分散在的空泡,部分肝细胞恢复正常。苍菊方各剂量组肠道菌群与模型组有不同程度的差异,逐渐接近正常组状态。结论:苍菊方能降低大鼠血清中ALT、AST、TC、TG、LDL-C水平,升高大鼠血清中HDL-C水平,并能改善NAFLD大鼠病理状态以及脂质沉积状况。其主要通过改善群落物种数目,使高脂饮食喂养的NAFLD大鼠紊乱的肠道菌群组成和结构逐渐恢复正常,从而改善NAFLD。

苍菊清肝降脂方对蛋氨酸-胆碱缺乏诱导小鼠脂肪性肝炎的防护作用

目的:观察苍菊清肝降脂方对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)诱导的小鼠脂肪性肝炎的防护作用。方法:C57BL/6小鼠60只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组、苍菊清肝降脂方(苍菊方)高中低剂量组和多稀磷脂酰胆碱组,对照组小鼠给予蛋氨酸-胆碱充足(MCS)饲料,其他各组小鼠予MCD饲料,自由进食。对照组和模型组灌胃饮用水,其余各组分别灌胃相应治疗药物。2w末,采集小鼠血清、肝组织标本,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肝组织甘油三酯(TG)含量,观察肝组织HE染色及油红O染色。结果:与对照组小鼠比较,模型组小鼠ALT、AST、TG水平显著升高,经苍菊方干预的各组小鼠ALT、AST、TG水平均显著下降,且呈剂量依赖方式,其中高剂量苍菊方治疗疗效与多烯磷脂酰碱疗效组相近。模型组小鼠肝组织HE染色可见大量大泡性脂肪,肝细胞呈气球样变,油红O染色可见大量大小不等红色脂滴,部分融合成片,经用药干预,各组小鼠肝组织脂肪变性和肝脏炎症均明显改善。结论:苍菊清肝降脂方可明显改善MCD饮食诱导的脂肪性肝炎肝损伤程度。

苍菊清肝降脂方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织SIRT1、SIRT2和SIRT3表达的影响

目的观察苍菊清肝降脂方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)、SIRT2和SIRT3表达的影响。方法将40只SPF级雄性Wistar大鼠按照随机数字表分为4组,即正常组、模型组、苍菊清肝降脂方低剂量组及苍菊清肝降脂方高剂量组,每组各10只。正常组大鼠予普通饲料喂养;其余3组大鼠第1~2周予高脂低蛋白饲料,第3~4周予纯玉米粉饲料喂养,同时予40%四氯化碳橄榄油溶液1 m L/kg腹腔注射造模,每周2次。造模的同时,正常组及模型组大鼠分别予0.9%氯化钠注射液1 m L/100 g灌胃,苍菊清肝降脂方低剂量组及苍菊清肝降脂方高剂量组分别予相应浓度的苍菊清肝降脂方药液(每m L生药含量分别为0.45、0.90 g)1 m L/100 g灌胃,均每日1次,连续4周。4周后获取4组大鼠肝组织,分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法和蛋白质印迹(Western blot)法检测肝组织SIRT1、SIRT2和SIRT3 mRNA和蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肝组织SIRT1、SIRT2和SIRT3 mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05);与模型组比较,苍菊清肝降脂方低剂量组及苍菊清肝降脂方高剂量组大鼠肝组织SIRT1、SIRT2和SIRT3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.05),苍菊清肝降脂方低剂量组与苍菊清肝降脂方高剂量组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论苍菊清肝降脂方可显著增加NASH大鼠肝脏组织SIRT1、SIRT2和SIRT3 mRNA和蛋白表达。

苍菊清肝降脂方对蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的脂肪性肝炎小鼠肝组织SIRT3-FOXO3信号通路的影响

目的观察苍菊清肝降脂方对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的脂肪性肝炎小鼠肝组织SIRT3-FOXO3信号通路的影响。方法 C57BL/6小鼠60只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组、苍菊清肝降脂方高中低剂量组和易善复组,对照组给予蛋氨酸-胆碱充足(MCS)饲料,其他各组予MCD饲料,自由进食。同时用药各组分别灌胃相应药物,对照组和模型组灌胃饮用水。造模结束后,检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)含量,测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,提取小鼠肝组织总RNA和总蛋白,采用Real-time PCR和Western blot法分别检测SIRT3和FOXO3的基因和蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠血清TNF-α和IL-6含量明显升高,肝组织SOD活性下降、MDA含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,苍菊清肝降脂方干预各组TNF-α、IL-6和MDA水平下降,而SOD活性升高,且有剂量依赖趋势,苍菊清肝降脂方高剂量组和易善复组效果相当。基因和蛋白检测显示,对照组SIRT3、FOXO3基因和蛋白水平高表达,模型组二者表达明显下调,经苍菊清肝降脂方高中低剂量和易善复干预后,SIRT3、FOXO3表达上调。结论苍菊清肝降脂方可通过调节SIRT3-FOXO3信号通路改善MCD饮食诱导的脂肪性肝炎肝损伤。

苍菊清肝降脂方对脂肪肝大鼠肝组织脂肪沉积、氧化应激和脂质过氧化的影响

[目的]:研究苍菊清肝降脂方对脂肪肝大鼠肝组织脂肪沉积、氧化应激和脂质过氧化的影响。[方法]采用雄性Wistar大鼠予以CCl4联合高脂低蛋白饮食复制脂肪肝模型,大鼠随机分成正常组、模型组和中药干预组。实验结束处死大鼠,肝组织行油红O染色,并检测肝组织甘油三酯、SOD、GSH和MDA等指标。[结果]油红O染色发现中药干预组肝细胞脂肪变性明显减轻,尤其以大剂量组减轻程度更为明显,同时大鼠肝组织中TG含量较模型组均显著下降(小剂量组P<0.05,大剂量组P<0.01),大剂量组降低程度显著优于小剂量组(大剂量组与小剂量组比较P<0.05)。大鼠肝组织中SOD活性和GSH含量较模型组均明显升高,MDA含量则显著下降(小剂量组P<0.05,大剂量组P<0.01);大剂量组对SOD活力和MDA含量的改善程度显著优于小剂量组(大剂量组与小剂量组比较P<0.05),但大剂量组和小剂量组GSH含量差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]苍菊清肝降脂方显著降低脂肪肝大鼠肝组织脂肪沉积,并能显著改善氧化应激和脂质过氧化的作用。

苍菊清肝降脂方对大鼠脂肪肝保护作用的研究

[目的]研究苍菊清肝降脂方对大鼠脂肪肝的保护作用。[方法]雄性Wistar大鼠40只,随机分正常组、模型组、低剂量组、高剂量组。模型组、低剂量和高剂量组以40%CCl4橄榄油溶液1ml/kg体质量腹腔注射,2次/周,共4周。模型组、低剂量和高剂量组在第1、2周给予高脂低蛋白饲料,第3、4周予纯玉米粉饲料。自造模之日起,按照1ml/100g大鼠体重给予低剂量和高剂量中药灌胃。实验结束后大鼠经下腔静脉采血并分离血清,统一于肝脏左叶切取组织,于10%中性福尔马林固定。检测血清ALT、AST、GGT活性,肝组织行HE染色。[结果]模型组大鼠血清ALT、AST和GGT均较正常组显著增高(P<0.01);经苍菊清肝降脂方中药干预,ALT、AST和GGT均显著下降(P<0.05),其中高剂量组ALT和AST下降幅度均优于低剂量组(P<0.05),而低剂量组和高剂量组GGT下降幅度无统计学意义(P>0.05)。HE染色可见模型组大鼠小叶结构紊乱,肝细胞胞质疏松,肝细胞变性,胞浆内见大量脂肪空泡。苍菊清肝降脂方干预组可见大鼠肝细胞损伤及脂肪变性程度明显减轻,肝小叶结构比较清晰,肝细胞胞浆内脂肪空泡与模型组相比有显著差异,尤其以高剂量组改善程度更为明显。[结论]苍菊清肝降脂方对大鼠脂肪肝具有良好的保护作用。