固定化苏云金杆菌以色列变种控制水中红虫的研究

采用聚乙烯醇 (PVA)加少量海藻酸钠及活性炭的方法固定一株对红虫具有高效毒力的苏云金杆菌以色列变种 (B .t .i) .结果表明 ,控制质量分数分别为 1 0 %PVA、1 %海藻酸钠和 2 0 %活性炭 ,采用 4 %CaCl2 的饱和硼酸溶液 (pH为 6 7)作为交联剂且交联时间为 2 4h时 ,制得的凝胶颗粒机械强度好 ,操作简单 ,制作成本低 .B .t.i固定化微球缓慢释放 。

苏云金杆菌以色列变种乳剂对嗜人按蚊和中华按蚊幼虫毒效的现场研究

目的 研究苏云金杆菌以色列变种（Bti）乳剂现场杀灭嗜人按蚊和中华按蚊幼虫的效果。方法 采用生物测定方法，分别确定Bti乳剂对嗜人按蚊和中华按蚊幼虫的LC50和LC95。通过现场试验，观察不同剂量组Bti乳剂对嗜人按蚊和中华按蚊幼虫的即效与持效。结果 Bti乳剂对嗜人按蚊（广西分离株）和中华按蚊（江苏分离株）Ⅲ龄幼虫的24hLC50分别为1．14μmol／L和0．15μmol／L，LC95依次为3．91μmol／L和0．46μmol／L。现场试验：对于嗜人按蚊，施药后第1、2、3d，1．5ml／m^2剂量组的平均幼虫死亡率依次为98．0％、96．0％、18．4％；3．0ml／m^2剂量组的平均幼虫死亡率分别为1000A、97．2％、90．8％。对于中华按蚊，施药后第1、2、3d，1．0ml／m^2剂量组的平均幼虫死亡率分别为98．4％、89．60A、67．6％；2．0ml／m^2剂量组平均幼虫死亡率依次为100％、99．2％、86．0％。结论Bti乳剂施药剂量1．0～3．0ml／m^2，能有效控制单季稻田按蚊幼虫孳生，持效为2～3d。

苏云金杆菌以色列变种防治水处理中摇蚊幼虫研究

研究了苏云金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis var.israelensis de Barjac,简称B.t.i)用于摇蚊幼虫(即红虫)防治的菌种发酵条件.结果表明,发酵时间为36 h,温度为30℃,摇床转速为250 rpm,三角瓶培养基量为50 mL时,B.t.i对红虫的毒力最强.

溶源菌苏云金杆菌以色列变种

苏云金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis vat.israelensis H14)经热处理灭活游离噬菌体后的培养物,经紫外线(UV)和丝裂霉素(Mitomycin)诱导,得到三株烈性噬菌体,並分离到一株自发突变的烈性噬菌体。这四株噬菌斑形态不同的噬菌体,对紫外线的敏感性和在20种血清型的32个菌株中的寄主范围各不相同,证明它们是四种不同类型的噬菌体。由于它们都是从苏云金杆菌以色列变种1897菌株中获得的,因此说明该菌株可能是多价溶源菌。

苏云金杆菌以色列变种漂浮块剂防制城市小型滋生地中致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫效果评价

目的：观察苏云金杆菌以色列变种漂浮块剂的稳定性及防制蚊幼虫效果。方法：生物测定及小型滋生地现场试验。结果：该块剂在水中可持续漂浮１４天，且不出现松散现象。其对致倦库蚊的ＬＤ５０为０．４２７８ｍｇ／ｍｌ；现场试验结果显示：在３．４ｍ２水池中，用５、１０、２０ｇ／ｍ２剂量，２４小时时致倦库蚊幼虫下降率分别为９４．５％、９１．８％和１００％，持效分别为１１、１３、１７天。相同剂量２４小时白纹伊蚊幼虫死亡率均为１００％，持效分别为６、８。

苏云金杆菌以色列变种现场防制埃及伊蚊的二年观察

苏云金杆菌以色列变种(简称 BTI)是1977年 GOLd berg 等从以色列蚊虫孳生水塘泥土中分离发现的新变种,由于它杀蚊谱广,毒效高,对人畜安全,无污染环境以及容易生产等优点,因而在医学昆虫的防治方面,巳广泛用于蚊虫的防制。

苏云金杆菌以色列变种缓释片剂现场控制白纹伊蚊效果分析

目的 观察苏云金杆菌以色列变种(B.t.i.H14)缓释片剂现场控制白纹伊蚊效果。方法 在防制区所有室外积水容器投放B.t.i.H14缓释片剂,每个容器投放1—2片,每月投放1次。结果 防制区投药后1天,幼虫死亡率达100％;投药后10天,容器指数从防制前的68.25降至2.54,下降达96.28％;防制后60天,容器指数仍可控制在4.35,比防制前下降93.63％;成蚊密度在投药后20天开始明显下降,由防制前的24只/人工小时降到8只/人工小时,下降达66.64％,防制后30天,成蚊密度已降至2只/人工小时,下降达91.67％,至防制后60天,成蚊密度仍能控制在2只/人工小时的较低水平。结论 应用B.t.i.H_(14)缓释片剂现场控制白纹伊蚊具有较好的持效控制效果。

两种苏云金杆菌以色列变种制剂对刺扰伊蚊的毒效及非靶大无脊椎动物的安全性

在实验室内,苏云金杆菌以色列变种Sandoz株(SAN 402 SC 98)对埃及伊蚊和刺犹伊蚊幼虫的毒效高出Abbott ABG 6388株几倍。野外应用SAN 402 SC 98以0.25升/公顷和ABG 61881升/公顷杀灭刺扰伊蛟幼虫,48小时后死亡率达到97％以上,有不多于24小时的残留活性。Hyallela azteca,和4种水生甲虫饲养在100ppm的SAN 402 SC 98,菌液中,无异常现象。该浓度是杀灭三龄刺扰伊蚊幼虫24小时LC_(50)值得1,449倍。

苏云金杆菌以色列变种漂浮块剂现场灭致乏库蚊效果

应用湖北省医学科学院寄生虫病防治研究所研制的苏云金杆菌以色列变种（Bti）漂浮块剂在现场进行了灭致乏库蚊的效果评价，室内生物测定结果表明：Bti漂浮块剂对致乏库蚊LD50为0.5207g／ml，效价为233IU／ml，在0．4～0．8m2现场水缸中，用10g／m2的剂量，第一次投药持续10天出现2龄幼虫，第二次投药特效可保持11天，因此每10天投一次药可有效控制水缸中蚊幼虫孳生。

苏云金杆菌以色列变种对伊蚊库蚊和按蚊幼虫毒效的实验观察

目的研究苏云金杆菌以色列变种(Bti)可湿性粉剂对伊蚊、库蚊和按蚊幼虫的毒杀效果。方法采用生物测定法,测定Bti可湿性粉剂对白纹伊蚊幼虫、淡色库蚊幼虫和中华按蚊幼虫的毒杀效果,计算半数致死浓度(LC50)。结果 Bti可湿性粉剂对Ⅲ龄白纹伊蚊幼虫、淡色库蚊幼虫和中华按蚊幼虫的LC50分别为0.104、0.160μg/ml和0.324μg/ml,效价分别为0.125、0.192 IU/ml和0.389 IU/ml;连续接触中华按蚊Ⅲ龄幼虫1、2 d和3 d的LC50分别为0.324、0.092μg/ml和0.032μg/ml,效价分别为0.389、0.110 IU/ml和0.038 IU/ml;对中华按蚊Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ龄和Ⅳ龄幼虫的LC50分别为0.024、0.137、0.324μg/ml和0.450μg/ml,效价分别为0.029、0.164、0.389 IU/ml和0.540 IU/ml。结论 Bti对3种蚊虫幼虫均有较好的毒杀效果,但对伊蚊和库蚊幼虫效果更好,且幼虫虫龄越小,毒杀效果越好。

苏云金芽孢杆菌以色列变种的两种漂浮颗粒剂灭中华按蚊幼虫效果比较

用美国Ｂａｃｔｉｍｏｓ可湿性粉剂（Ｂｔｉ－１８９７）和国产Ｂｔ－１８７乳剂生产的两种漂浮颗粒剂灭中华按蚊幼虫的结果表明：后者对中华按蚊幼虫的效价（１２０ＩＴＵ／ｍｇ）比前者（３７０ＩＴＵ／ｍｇ）低，但制成颗粒剂后（效价２２０ＩＴＵ／ｍｇ）比前者（效价１３０ＩＴＵ／ｍｇ）高。稻田应用０．８１ｇ／ｍ２剂量Ｂｔ－１８７漂浮颗粒剂控制中华按蚊幼虫，持效可达１６天，Ｂａｃｔｉｍｏｓ漂浮颗粒剂为１３天。

苏云金芽孢杆菌以色列变种发泡块剂灭白纹伊蚊幼虫的效果研究

目的：比较苏云金芽孢杆菌Bti－951发泡块剂（由本所研制）和Bti－Ft发泡块剂（德国提供）灭白纹伊蚊效果。方法：模拟现场试验和现场试验。结果：室内生物测定，Bti－951发泡块剂LD50为0.2365μg／ml；Bti－Ft发泡块剂LD50为0．0903μg／ml。在3．4～3．7m2现场水池中，两种发泡块剂使用剂量为0．5、1．0、1．5g／m2，制剂24小时灭蚊效果均达100％；当剂量为1．5g／m2时，Bti-951发泡块剂持效15天，Bti－Ft可达20天。结论：该剂型运用于小型水体，便于贮存、携带和使用，比乳剂、粉剂持效更长。

苏云金杆菌以色列亚种几丁质酶基因的克隆及序列分析

从苏云金芽孢杆菌以色列亚种 (Bacillusthuringiensissubspisraelensis)中提取基因组DNA ,通过合成 1对特异性引物 ,用touchdownPCR的方法扩增几丁质酶ichi基因序列 (GenBank登录号 :AF5 2 6 379)。ichi序列全长为 2 5 70bp ,含有 1个 2 0 6 7bp的开放阅读框 (ORF) ,编码 6 88个氨基酸 ,推测分子量为 75 79kDa ,等电点pI=5 90的几丁质酶前体。序列和结构比较分析表明 :Ichi氨基酸序列与蜡状芽孢杆菌 (Bacilluscereus) 2 8 9几丁质酶CW、蜡状芽孢杆菌CH几丁质酶B及苏云金芽孢杆菌墨西哥亚种几丁质酶的同源性分别为 97 2 4 %、97 18%、97 6 3% ,而与苏云金芽孢杆菌巴基斯坦亚种的同源性只有 6 3 0 7%。Ichi编码区由分泌信号肽 (46AA)、催化区 (10 5AA)、粘蛋白Ⅲ型同源区 (74AA)及几丁质结合区 (40AA)组成。

苏云金芽孢杆菌以色列亚种对花翅摇蚊作用特性研究

为探索对深圳水源红虫污染进行微生物防治的可行性 ,首次用Bacillusthuringiensissubsp .israelensis,简称Bti (苏云金芽孢杆菌以色列亚种 )对花翅摇蚊 (Chironomuskiiensistokunaga)的作用特性进行研究。生物测定表明 ,BtiIPS82和 1 87对花翅摇蚊 3龄幼虫的LC50 ( 2 4h)分别为 2 4 2和 32 6mg L。对标准菌株IPS82进行的发酵研究表明 ,发酵过程中的菌体密度、芽孢形成和溶解氧变化、对花翅摇蚊的毒力之间具有密切联系。IPS82发酵液应用的环境因素中 ,日光照的影响最大 ,可使其毒力半衰期从 2 1d缩短至 1 0d ;环境温度在 1 5℃～ 30℃内变化 ,Bti使蚊幼虫的致死率都保持在 5 0 %左右。当环境温度 35℃时 ,Bti使蚊幼虫的致死率再提高 1 6% ;环境pH偏离 7～ 1 1时 ,IPS82的毒力从 66 7%下降至40 %左右 ,环境pH3时其毒力下降至 1 6% ;在一定的幼虫密度 (低于 30条 1 0 0mL)范围内IPS82发酵液的毒力稳定 ,但幼虫密度高于 30条 1 0 0mL时毒力呈下降趋势。本研究结果表明 :在一定条件下 ,Bti对花翅摇蚊防治具有良好的应用潜力。

苏云金杆菌以色列亚种晶体蛋白CryIVD基因的克隆及表达产物的效果测定

目的 克隆、表达苏云金杆菌以色列亚种晶体蛋白CryIVD基因并测定其杀蚊毒效。 方法 采用PCR技术 ,扩增得到CryIVD基因片段 ;通过双酶切及连接反应 ,将该基因克隆入大肠杆菌质粒 pUC18构建重组克隆及表达载体 ;转化E .coliDH5α,提取重组质粒进行酶切鉴定及DNA序列测定 ;以IPTG诱导表达CryIVD蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物并进行杀蚊毒效测定。 结果 CryIVD基因成功克隆并在宿主菌中正确表达 ,表达产物对蚊幼的杀灭毒效测定显示其对淡色库蚊Ⅱ～Ⅲ龄健康幼虫的LC50 为 2 .3 8× 10 6 cells ml,对白纹伊蚊健康幼虫的LC50 为 1.6× 10 7cells ml。 结论 CryIVD基因被成功克隆和表达 ,且其表达产物有明显杀蚊幼活性。

苏云金杆菌以色列亚种杀蚊蛋白Cyt1Aa在离中不粘柄菌中的表达

在蚊幼虫生活水域里的离中不粘柄菌(Asticcacaulis excentricus,Ae)中已成功表达苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,Bti)杀蚊蛋白基因cry11Aa的基础上,将另一Bti杀蚊蛋白基因cyt1Aa转化入Ae中表达。构建并转化了分别单独含有cyt1Aa基因、及同时含有cry11Aa基因的表达质粒pSODCyt20和pSODCryCyt20,蛋白免疫杂交检测相应的Ae重组子分别表达产生了Cyt1Aa和Cry11Aa蛋白。为了探究Ae(pSODCryCyt20)重组子不能表达cyt1Aa的原因,提取了重组子总RNA、并与同是革兰氏染色阴性的大肠杆菌的总RNA比较,结果显示两者RNA系统显著不同,推测Ae中多个外源基因的表达,可能要求每个基因必需一个启动子。