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基于Bt毒素的杀虫蛋白理性设计与创新应用策略 被引量:1
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作者 徐重新 金嘉凤 +5 位作者 孙晓明 沈成 张霄 陈澄宇 刘贤金 刘媛 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期96-125,共30页
Bt毒素是源于苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)的具有特殊杀虫功能的大分子蛋白,其制剂和转基因作物已广泛用于害虫防治,产生了巨大的经济和社会生态效益。围绕Bt毒素挖掘和提升其应用价值是持续研究的热点,特别是随着Bt毒素结构... Bt毒素是源于苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)的具有特殊杀虫功能的大分子蛋白,其制剂和转基因作物已广泛用于害虫防治,产生了巨大的经济和社会生态效益。围绕Bt毒素挖掘和提升其应用价值是持续研究的热点,特别是随着Bt毒素结构功能和作用机制日趋明晰,为其功能修饰和创新应用创造了条件,相关研究蓬勃发展,成效显著。大量研究表明,采用定点突变、结构域替换或融合以及抗独特型抗体模拟等策略,是理性设计活性更高、稳定性更强、杀虫谱更广、非靶标生物安全性更高甚至是可用于害虫抗药性治理的有别于母体Bt毒素的突变体、结构杂合体乃至功能效应物抗体等新型杀虫蛋白的有效手段;此外,采用催化毒素活化、驱动毒素靶向受体结合、促进毒素表达以及同源或异源杀虫材料复配或共表达的协同促效等创新增效策略,也是助推Bt毒素应用价值的重要手段。本文总结了Bt毒素结构功能和作用机制,梳理了基于Bt毒素功能修饰的突变体、结构杂合体以及功能效应物抗体等新型杀虫蛋白理性设计和基于Bt毒素功能增效的创新应用策略等相关研究进展,并结合作者团队在模拟Bt毒素杀虫功能效应物抗体靶向设计研发方面的最新成果,探讨了基于Bt毒素的杀虫蛋白理性设计与创新应用策略未来发展动向及潜在可行捷径,为相关研究提供较为全面的最新有价值的文献资料和启发思路。 展开更多
关键词 BT毒素 苏云金芽孢杆菌 蛋白 定点突变 抗独特型抗体 蛋白融合表达 增效物
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苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因的克隆及表达分析 被引量:16
2
作者 蔡启良 刘子铎 +2 位作者 孙明 魏芳 喻子牛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期579-582,共4页
选择本实验室分离的苏云金芽胞杆菌李氏亚种 (subsp .Leesis)菌株YBT 833、鲇泽亚种 (subsp .Aizawai)菌株YBT 1416和库斯塔克亚种 (subsp .Kurstaki)菌株YBT 15 35为出发菌株 ,以营养期杀虫蛋白基因PCR扩增的特异片段为探针 ,进行总DN... 选择本实验室分离的苏云金芽胞杆菌李氏亚种 (subsp .Leesis)菌株YBT 833、鲇泽亚种 (subsp .Aizawai)菌株YBT 1416和库斯塔克亚种 (subsp .Kurstaki)菌株YBT 15 35为出发菌株 ,以营养期杀虫蛋白基因PCR扩增的特异片段为探针 ,进行总DNA酶切片段的Southern杂交定位。结果显示 3株菌株的营养期杀虫蛋白基因 ,均位于经XbaI完全消化的 4~ 5kb大小的DNA片段上。将该区域DNA片段回收后克隆到pUC19载体 ,建立了 3个较基因组文库小的亚基因组文库。通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定分别得到 3个相应的营养期杀虫蛋白基因vip83、vip14和vip15 ,并对其测序。DNA序列比较发现基因vip83与已知营养期杀虫蛋白基因存在 5个差异碱基。将vip83、vip14基因亚克隆到苏云金芽胞杆菌 大肠杆菌穿梭载体pHT315 ,分别得到重组质粒pBMB890 1和pBMB890 2。将它们电转化到vip- 的B .t.受体菌BMB171和 4Q7,获得了相应的工程菌BMB890 1 171,BMB890 2 171,BMB890 1 4Q7和BMB890 2 4Q7。SDS PAGE电泳检测均有 88kD大小的蛋白表达。生物测定结果亦表明了 ,营养期杀虫蛋白Vip83和Vip14对鳞翅目棉铃虫、小菜蛾和甜菜夜蛾的三龄幼虫均有一定的杀虫活性 ;其中对小菜蛾的毒力最高 ,LC50 值分别为 2 8.6 ,31.6 ,45 .4和 37.6 μL mL。该结? 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 营养期 蛋白 基因克隆 表达分析 棉铃 小菜蛾 甜菜夜蛾
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苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白基因vip3A的研究 被引量:18
3
作者 刘荣梅 张杰 +1 位作者 高继国 宋福平 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第9期39-42,共4页
根据已知vip3A基因序列设计一对特异性引物VIP3/VIP5,对218株Bt菌株进行PCR鉴定,有51株含有vip3A类基因,其中12株为不同亚种的标准菌株,有4株标准菌株不含有该基因。从Bt C9菌株中分离克隆了vip—C9基因,并插入表达载体pET—21b... 根据已知vip3A基因序列设计一对特异性引物VIP3/VIP5,对218株Bt菌株进行PCR鉴定,有51株含有vip3A类基因,其中12株为不同亚种的标准菌株,有4株标准菌株不含有该基因。从Bt C9菌株中分离克隆了vip—C9基因,并插入表达载体pET—21b,转化大肠杆菌BL21,诱导表达出分子量88.6kDa的可溶性蛋白,表达产物对甜菜夜蛾和棉铃虫具有较高的杀虫活性,LC50分别为0.42ng/mg和25.95ng/mg,对小菜蛾活性较低。构建了缺失蛋白Vip—C9—N(N端去除39个氨基酸组成的信号肽序列),杀虫活性测定结果表明其对甜菜夜蛾的活性显著降低,说明N端39个氨基酸对甜菜夜蛾的活性是必需的。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 苏云金芽孢杆菌 活性 营养期蛋白 BT菌株 棉铃 小菜蛾 基因 IP3 标准菌株
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苏云金芽孢杆菌4.0718菌株的杀虫晶体蛋白基因分析 被引量:9
4
作者 丁学知 刘全兰 +2 位作者 莫湘涛 高必达 夏立秋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期413-417,共5页
In this study, we rapidly identified Bacillus thuringiensis 4.0718 strain that harbored the known cry1 and cry2 type genes by a PCR strategy. Three pairs of universal oligonucleotide primers were designed to detect al... In this study, we rapidly identified Bacillus thuringiensis 4.0718 strain that harbored the known cry1 and cry2 type genes by a PCR strategy. Three pairs of universal oligonucleotide primers were designed to detect all known cry1, cry2 and cry3 type gene sequences. Then the DNA of the positive strain 4.0718 was probed with a set of specific primers. One feacture of this screening method was that each gene was expected to produce a PCR product having a precise molecular weight. PCR products having different sizes probably represented the gene was a potentially novel gene. Differentiations among these genes was determined on the basis of the electrophoresis patterns of PCR products. Finally, five cry1 type genes (cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1Cb, a novel cry4.5 type genes) and one cry2Ac type gene had been detected from Bacillus thuringiensis 4.0718 strain. 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 4.0718菌株 晶体蛋白基因 CRY基因 PCR
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因导入大豆的研究 被引量:31
5
作者 苏彦辉 王慧丽 +2 位作者 俞梅敏 吕德扬 郭三堆 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第10期1046-1051,共6页
用苏云金芽孢杆菌(BacillusthuringiensisBerliner)杀虫晶体蛋白(Bt)基因和葡糖苷酸酶(GUS)基因通过基因枪轰击和根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)介导转入大豆(Glycinemax(L.)Merr.),诱导大豆转基因植株... 用苏云金芽孢杆菌(BacillusthuringiensisBerliner)杀虫晶体蛋白(Bt)基因和葡糖苷酸酶(GUS)基因通过基因枪轰击和根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)介导转入大豆(Glycinemax(L.)Merr.),诱导大豆转基因植株再生。大豆主栽品种“中黄4号”和品系8502未成熟子叶有较强体细胞胚分化能力。体细胞胚的脱水处理显著促进“中黄4号”体细胞胚的萌发。未成熟子叶的预培养有利于根癌土壤杆菌感染子叶外植体体细胞胚的分化。基因型和受体的选择,转基因体系的改进,体细胞胚的脱水处理等是提高大豆转基因效率的重要因素。 展开更多
关键词 BT基因 GUS基因 基因枪轰击 大豆 晶体蛋白
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苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因克隆及油菜叶绿体遗传转化研究 被引量:30
6
作者 侯丙凯 陈正华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期39-40,共2页
关键词 苏云金芽孢杆菌 油菜 晶体蛋白基因 叶绿体转化
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苏云金杆菌Kurstaki HD-1亚种的一个杀虫蛋白基因毒性区的核苷酸序列 被引量:9
7
作者 乔利亚 田颖川 莽克强 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第5期383-386,共4页
为了更好地利用苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,以下简称 B.t)这个生物杀虫剂并培育抗虫转基因植物,80年代以来各国科学家们纷纷加强了对 B.t 杀虫蛋白基因的结构和功能方面的研究。到目前为止已有42种以上的 B.t 杀虫蛋白基因... 为了更好地利用苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,以下简称 B.t)这个生物杀虫剂并培育抗虫转基因植物,80年代以来各国科学家们纷纷加强了对 B.t 杀虫蛋白基因的结构和功能方面的研究。到目前为止已有42种以上的 B.t 杀虫蛋白基因(或称为晶体蛋白基因)得到克隆并进行了 DNA 展开更多
关键词 苏云金杆菌 蛋白基因 毒性区
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苏云金芽胞杆菌杀线虫伴胞晶体蛋白基因cry6Aa的克隆与表达 被引量:7
8
作者 余子全 白培胜 +2 位作者 郭素霞 喻子牛 孙明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期865-868,共4页
通过对晶体蛋白N-末端氨基酸测序,设计简并探针,从对根结线虫高毒力苏云金芽胞杆菌YBT-1518菌株中克隆到1个含有杀线虫晶体蛋白基因的片段。序列测定表明该序列含有两个ORF(orf1和orf2),其中orf1与基因cry6Aa1同源性为98%,已在GenBank... 通过对晶体蛋白N-末端氨基酸测序,设计简并探针,从对根结线虫高毒力苏云金芽胞杆菌YBT-1518菌株中克隆到1个含有杀线虫晶体蛋白基因的片段。序列测定表明该序列含有两个ORF(orf1和orf2),其中orf1与基因cry6Aa1同源性为98%,已在GenBank上登录(Acc.NO.AF499736),并被命名为cry6Aa2。将克隆的该片段克隆到穿梭载体pHT304上,并转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171,重组菌株可形成米粒状伴胞晶体。生物测定表明,表达的毒素蛋白对北方根结线虫的LC50为9.47μg/mL,毒力与出发菌株(10.74μg/mL)相当。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 线 cry6Aa2基因 基因克隆 表达
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3A在鳞翅目特异菌株中的表达及杀虫特性 被引量:10
9
作者 乐超银 刘子铎 +2 位作者 曾晓慧 邵宗泽 喻子牛 《微生物学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期139-142,共4页
将对鞘翅目昆虫有特异毒性的苏云金芽孢杆菌cry3A基因电转化到只对鳞翅目昆虫有毒性的苏云金芽孢杆菌野生型菌株YBT8031中,获得转化了BMBY001。SDSPAGE分析及镜检结果表明,cry3A基因可在该菌株中高效表达,但出发菌株中原有的cry1Ab、cry... 将对鞘翅目昆虫有特异毒性的苏云金芽孢杆菌cry3A基因电转化到只对鳞翅目昆虫有毒性的苏云金芽孢杆菌野生型菌株YBT8031中,获得转化了BMBY001。SDSPAGE分析及镜检结果表明,cry3A基因可在该菌株中高效表达,但出发菌株中原有的cry1Ab、cry1Ac及cry2的表达则受到不同程度的影响。生物测定结果显示,转化子BMBY001对柳蓝叶甲(鞘翅目)具有较高毒力,LC50为0413μL/mL(浸叶法),对小菜蛾(鳞翅目)的毒力比野生受体菌YBT8031有所降低,LC50值为3319μL/mL。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry3A基因 基因表达 活性
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的启动子及其转录调控 被引量:8
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作者 程萍 王清锋 喻子牛 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期130-134,共5页
苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)是一种G+土壤杆菌,其之所以能成为世界上生产量最大的生物杀虫剂,是因为它能在细胞生长过程中,产生大量、高效的杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crys... 苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)是一种G+土壤杆菌,其之所以能成为世界上生产量最大的生物杀虫剂,是因为它能在细胞生长过程中,产生大量、高效的杀虫晶体蛋白(Insecticidal CrystalProteins, ICPs... 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 晶体蛋白 基因 启动子
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苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白基因资源的研究进展 被引量:5
11
作者 谭芙蓉 王利刚 +2 位作者 王金斌 蒋玲曦 唐雪明 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期135-139,共5页
介绍了苏云金芽胞杆菌的一般特性、分类鉴定与分布以及其杀虫晶体蛋白基因的分类、在苏云金芽胞杆菌中的定位及鉴定方法,并对苏云金芽胞杆菌及其基因资源的应用前景作了展望。
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白基因 分类 鉴定 分布
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苏云金杆菌4.0718质粒上杀虫晶体蛋白基因的PCR分析 被引量:4
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作者 夏立秋 张何 +2 位作者 刘全兰 陈宇 莫湘涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第2期35-37,46,共4页
苏云金杆菌 (BacillusThuringiensis) 4 .0 718由本实验室选育是对鳞翅目 (Lepidopteran)昆虫有高毒性的菌株。采用SDS温和提取方法提取此菌株的质粒 ,电泳纯化后获得了其 4种不同分子量的质粒P1,P2 ,P3,P4。利用序列分析软件对已知的c... 苏云金杆菌 (BacillusThuringiensis) 4 .0 718由本实验室选育是对鳞翅目 (Lepidopteran)昆虫有高毒性的菌株。采用SDS温和提取方法提取此菌株的质粒 ,电泳纯化后获得了其 4种不同分子量的质粒P1,P2 ,P3,P4。利用序列分析软件对已知的cryI类型基因进行阵列比较 ,根据其高度保守区域设计了 1对通用引物 ,对cryI类型基因的扩增产物为 2 77bp左右的片段 ,用此引物对Bacillusthuringiensis 4.0 718的 4种不同质粒进行了PCR分析 ,发现质粒P1,P2 ,P3扩增阳性 ,都产生了 2 77bp的扩增片段 ,而质粒P4没有扩增产物 ,这为进一步的基因定位打下了基础。 展开更多
关键词 苏云金杆菌4.0718 质粒 晶体蛋白 PCR分析 cryⅠ基因
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苏云金芽胞杆菌YBT-1520杀虫晶体蛋白基因的属性 被引量:6
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作者 孙明 刘子铎 喻子牛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期365-371,共7页
通过Southern杂交发现高毒力苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)YBT 1 52 0菌株含有两个杀虫晶体蛋白基因片段 ,其 5’ 末端所在HindⅢ片段分别为 6 8kb和 4 6kb ,它们对应的基因分别命名为cry2 1 8和cry4 6。经PCR鉴定 ,该菌含有c... 通过Southern杂交发现高毒力苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)YBT 1 52 0菌株含有两个杀虫晶体蛋白基因片段 ,其 5’ 末端所在HindⅢ片段分别为 6 8kb和 4 6kb ,它们对应的基因分别命名为cry2 1 8和cry4 6。经PCR鉴定 ,该菌含有cry1Aa、cry1Ab和cry1Ac基因 ,以及cry2基因 ,其中cry2 1 8属于cry1Ac。分析了cry2 1 8基因 41 90bp的核苷酸序列 ,在杀虫晶体蛋白基因分类系统中被命名为cry1Ac1 0。结合Southern杂交和PCR结果可判断 3个cry1A基因的拷贝数不同 ,其中cry1Ac拷贝数最高 ,YBT 1 52 0菌株与其它库斯塔克亚种的杀虫晶体蛋白基因所在限制性内切酶位置明显不同。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白基因 cry218基因
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苏云金芽孢杆菌杀线虫晶体蛋白的相关基因 被引量:5
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作者 罗兰 谢丙炎 +1 位作者 戴小枫 杨之为 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2005年第1期49-51,共3页
本文从苏云金杆菌对线虫活性的发现、编码毒蛋白的基因、毒蛋白的种类大小及苏云金杆菌对线虫的作用机理 4个方面进行了综述 。
关键词 苏云金芽孢杆菌 基因 线蛋白 作用机理
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苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因特性分析 被引量:7
15
作者 蔡启良 刘子铎 喻子牛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期598-603,共6页
营养期杀虫蛋白是在苏云金芽胞杆菌营养期中发现的一种非晶体状胞外杀虫蛋白 .通过Southern杂交的基因定位实验 ,证实了营养期杀虫蛋白基因并非位于染色体和环型质粒上 ;在 2 0个不同血清型的 2 3种菌株中 ,营养期杀虫蛋白基因的存在率... 营养期杀虫蛋白是在苏云金芽胞杆菌营养期中发现的一种非晶体状胞外杀虫蛋白 .通过Southern杂交的基因定位实验 ,证实了营养期杀虫蛋白基因并非位于染色体和环型质粒上 ;在 2 0个不同血清型的 2 3种菌株中 ,营养期杀虫蛋白基因的存在率为 5 6 5 % (13 2 3) .同时对随机选择的 3个不同亚种菌株进行基因克隆和序列分析 ,表明其基因具有相当高的同源性 .运用生物信息技术 ,对营养期杀虫蛋白多肽进行了功能结构域比对分析 ,发现这 789多肽蛋白的N端 31至 15 0残基之间存在一种趋化信号传导因子相似序列 ,C端 5 36至 6 6 6残基之间则存在着纤维素结合结构域相似肽 .上述结果提示 ,营养期杀虫蛋白基因在苏云金芽胞杆菌天然菌株中高度保守并较为广泛分布 ,其编码蛋白的特殊结构提示了营养期杀虫蛋白潜在的功能特性 ,为进一步研究营养期杀虫蛋白奠定了基础 . 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 营养期蛋白 基因克隆与序列分析
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苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因vip3A在枯草芽胞杆菌中的表达 被引量:2
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作者 邱思鑫 范晓静 +2 位作者 洪鹏翔 关雄 胡方平 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期508-516,共9页
枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis常被用于表达杀虫和抗菌蛋白。为了探讨苏云金芽胞杆菌B.thuringiensis营养期杀虫蛋白基因(vip3A)在枯草芽胞杆菌中的表达情况,促进杀虫防病工程菌构建,将枯草芽胞杆菌168菌株核糖体小亚基S4蛋白基因的启... 枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis常被用于表达杀虫和抗菌蛋白。为了探讨苏云金芽胞杆菌B.thuringiensis营养期杀虫蛋白基因(vip3A)在枯草芽胞杆菌中的表达情况,促进杀虫防病工程菌构建,将枯草芽胞杆菌168菌株核糖体小亚基S4蛋白基因的启动子与苏云金芽胞杆菌WB7菌株vip3A基因的编码序列连接,插入大肠杆菌Escherichia coli与枯草芽胞杆菌穿梭载体pAD123,得到重组原核表达质粒pADpvip,将重组质粒转化枯草芽胞杆菌标准菌株168和分离自辣椒体内的生防内生枯草芽胞杆菌BS-2菌株中,获得工程菌株。SDS-PAGE分析表明在枯草芽胞杆菌168菌株的部分工程菌株中有约88kDa大小的VIP条带,而BS-2的工程菌株中未见相应的条带,表明Vip3A蛋白仅在168菌株中表达。生物测定表明有5株168的工程菌株(168vip1-4,6)表现较高的杀虫活性,工程菌株发酵稀释液(约107CFU/mL)处理的小白菜叶片饲喂斜纹夜蛾2龄幼虫72h的杀虫效果可达87.64%~92.13%,但vip3A基因转入内生枯草芽胞杆菌BS-2中不表现杀虫作用。毒力测定表明168vip2菌株对斜纹夜蛾2龄幼虫72h的LC50为0.0194mL/mL。这些结果为进一步研究基因在枯草芽胞杆菌中的表达构建杀虫防病工程菌打下了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 枯草芽胞杆菌 营养期蛋白 异源表达 活性
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利用PCR技术直接鉴定苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因型的快速方法 被引量:3
17
作者 刘子铎 林黎阳 +2 位作者 孙明 陈亚华 喻子牛 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期5-8,共4页
根据PCR程序中热变性温度可使菌体裂解,释放出DNA的原理,利用苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白不同基因型的特异混合引物,对苏云金芽孢杆菌营养体直接进行PCR分析。根据不同基因型的特异扩增产物片段的分子量大小便可直接确定该苏云金芽... 根据PCR程序中热变性温度可使菌体裂解,释放出DNA的原理,利用苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白不同基因型的特异混合引物,对苏云金芽孢杆菌营养体直接进行PCR分析。根据不同基因型的特异扩增产物片段的分子量大小便可直接确定该苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的基因型。本文对本室筛选天然菌株和苏云金芽孢杆菌克隆菌株分别进行了cryl基因的PCR分析。表明,该法结果可靠快速易行,在方法学上,为苏云金芽孢杆菌菌株鉴定、新菌株的筛选和基因型分析提供了极大的方便。 展开更多
关键词 微生物农药 苏云金杆菌 晶体蛋白 基因
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苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的分类 被引量:15
18
作者 鲁松清 孙明 喻子牛 《生物工程进展》 CSCD 1998年第5期57-62,共6页
1989年Hofte和Whiteley根据氨基酸序列的同源性和杀虫谱双重标准将苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因划分为5类14亚类。根据双重标准出现的问题和冲突,给分类带来了困扰,为此1995年,只根据氨基酸序列的同源性... 1989年Hofte和Whiteley根据氨基酸序列的同源性和杀虫谱双重标准将苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因划分为5类14亚类。根据双重标准出现的问题和冲突,给分类带来了困扰,为此1995年,只根据氨基酸序列的同源性进行分类。现已将基因分为21群,44亚群,64类,116个亚类。本文介绍了纳入新系统的条件、分类原则、命名方法、定名步骤和分类中值得注意的问题。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白 基因分类
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转苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因抗虫水稻的GUS和PCR辅助选择 被引量:2
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作者 蔡平钟 宁素华 +6 位作者 向跃武 张志雄 钟万芳 吴洁 阎文昭 张志勇 何俊蓉 《西南农业学报》 CSCD 2001年第4期1-4,共4页
报道了转基因抗虫水稻克螟稻 1号 (Ts 9)与非转基因恢复系川恢 94 9、H97810 17及保持系 2 12B等杂交F3 代的GUS和PCR检测。GUS检测的结果 ,Ts 9与非转基因川恢 94 9、H97810 17杂交F3 代有较多的GUS阳性植株。GUS阴性植株与阳性... 报道了转基因抗虫水稻克螟稻 1号 (Ts 9)与非转基因恢复系川恢 94 9、H97810 17及保持系 2 12B等杂交F3 代的GUS和PCR检测。GUS检测的结果 ,Ts 9与非转基因川恢 94 9、H97810 17杂交F3 代有较多的GUS阳性植株。GUS阴性植株与阳性植株的分离比约为 2∶1。用设计合成的一对引物进行PCR扩增的结果 ,大部分GUS检测呈阳性的植株及一个保持系 2 12B与Ts 9杂交F3 代植株获得了大小约 12 0 0bp的PCR产物 ,即cryIA (b)基因片段。试验结果表明PCR是比GUS叶片染色法更为灵敏、准确、方便的检测方法。 展开更多
关键词 基因 水稻 GUS PCR 螟稻1号 苏云金杆菌 晶体蛋白基因
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苏云金杆菌营养期蛋白杀虫活性及Vip3A-LS1基因克隆 被引量:2
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作者 陆秀君 郝会海 +2 位作者 宋萍 杜克久 李国勋 《农药学学报》 CAS CSCD 2007年第1期54-58,共5页
对营养期高活性杀虫菌株进行筛选,得到高效菌株BtLS1,对其营养期杀虫蛋白活性及发酵特性进行了系统研究,克隆了该菌株的vip3A新基因。测定了31株vip3A基因阳性菌株营养期杀虫蛋白的活性,发现BtLS1和BtLS8菌株对甜菜夜蛾Spodopteraexigu... 对营养期高活性杀虫菌株进行筛选,得到高效菌株BtLS1,对其营养期杀虫蛋白活性及发酵特性进行了系统研究,克隆了该菌株的vip3A新基因。测定了31株vip3A基因阳性菌株营养期杀虫蛋白的活性,发现BtLS1和BtLS8菌株对甜菜夜蛾Spodopteraexigua生长的抑制作用明显高于其他菌株。进一步研究表明,BtLS1菌株营养期杀虫蛋白对初孵和2龄甜菜夜蛾幼虫的体重增长抑制率分别为95.3%±2.1%和90.7%±6.6%;对棉铃虫Helicoverpaarmigera初孵幼虫的校正死亡率为22.1%,对2龄幼虫的体重增长抑制率为78.7%±6.6%。发酵液中以胞内可溶性物质为主。设计vip3A全长基因特异引物PCR扩增,插入质粒pBluescriptSK(+),克隆测序证实该菌株中存在vip3A新基因,命名为Vip3A-LS1,GenBank登录号为DQ016968。按该序列推断的蛋白与同类蛋白的8个氨基酸之间存在差异。 展开更多
关键词 苏云金杆菌 营养期蛋白 活性 Vip3A—LS1基因克隆
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