超滤膜法浓缩新型苏云金杆菌(Bt)杀虫剂

本文研究了用超滤膜方法浓缩新型苏云金杆菌杀虫剂，简称“新型Ｂｔ”，并对几种不同材料的超滤膜的污染程度以及污染后膜的最佳清洗方法作了初步实验，结果表明：采用Ｐ（进）＝０．１５ＭＰａ，Ｐ（出）＝０．０５ＭＰａ，操作条件效果比较好，反洗方法简单易行，能达到最佳清洗效果。而在工业化生产中，采用膜器件进出口互换的运行方法，可得到较高平均通量。

微生物杀虫剂——苏云金杆菌(Bt)

苏云金杆菌（B．t）是一种细菌杀虫剂，是由昆虫病原细菌苏云金杆菌（Bacillus thurgiensis）的发酵产物加工的制剂。此菌1911年因贝利纳（E．Berliner）发现于德国苏云金地区而得名，属芽孢杆菌，革兰氏染色阳性，横裂繁殖。

苏云金杆菌UV-17新细菌杀虫剂的研究与应用——第2报 苏云金杆菌UV-17制剂与Bt乳剂防治玉米螟药效比较试验

本文报告了苏云金杆菌UV-17新细菌杀虫剂与Bt乳剂防治玉米螟效果的田间试验结果。表明UV-17防效高于Bt乳剂,数理统计,差异显著、极显著(P<0.05、0.01)。

害虫对苏云金杆菌(Bt)杀虫剂的抗性

苏云金杆菌(Bt)杀虫剂是至今应用最成功也最广泛的微生物杀虫剂,本文叙述了印度谷螟、小菜蛾和家蝇等害虫对Bt剂的抗性和抗性产生的原因,从而提出了克服抗性的策略。

苏云金芽孢杆菌BT蛋白动物安全性试验

目的:明确高剂量条件下苏云金芽孢杆菌发酵液中BT蛋白对哺乳动物的生物安全性。方法:健康小鼠随机分为4组,每组10只;实验组分别按0.2 mL/kg、0.6 mL/kg、1.0 mL/kg灌服Bt发酵上清液,每天一次,连续给药7天;空白对照组正常饲养,不灌胃。结果:实验组与对照组血常规、血液生化分析等检测数据差异不显著;灌胃后解剖小鼠,无明显可见的病理变化;取心、肝、脾、肺、肾做组织切片,通过显微镜观测仍未见病理变化。结论:小鼠能够耐受高剂量苏云金芽孢杆菌发酵液中的BT蛋白。

微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bt)的研究现状及应用

苏云金杆菌又称苏云金芽胞杆菌,简称Bt。苏云金杆菌的发现,为人们利用微生物消灭植物病虫害提供了美好的前景。化学杀虫剂的长期使用对生态环境产生了严重的破坏,而害虫种群的抗药性也日益提高,因此生物杀虫剂因为其＂绿色环保＂的特点日益引起人们的广泛关注。现在,人们已经用发酵罐大规模地生产苏云金杆菌并制成粉剂或可湿剂、液剂,应用于农业,对100多种害虫有不同的致病和毒杀作用。

苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达

将全长３．５ｋｂ的Ｂｔ基因３'端缺失，得到长为２．１ｋｂ、１．８ｋｂ的基因。分别将这３个长度 （１．８ｋｂ２．１ｋｂ、３．５ｋｂ）的基因置于水稻叶绿体ｐｓｂＡ基因的启动于和终止子调控之下，并与选择 标记基因ａａｄＡ（编码氨基糖苷－３'－腺苷酸转移酶，具壮观霉素抗性）表达盒相连５以烟草叶绿 体基因ｔｒｎＨ－ｐｓｂＡ－ｔｒｎＫ为同源片段，构建成叶绿体转化载体ｐＢＴ３、ｐＢＴ８和ｐＢＴ２２。用基因枪 把Ｂｔ基因导入烟草叶绿体中，以壮观霉素筛选，获得转化再生植株。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ检测 分析证明Ｂｔ基因已整合进入烟草叶绿体基因组中并得到表达。且子代呈现壮观霉素抗性，即 外源基因得到稳定的遗传。利用转基因植株叶片对棉铃虫进行杀虫实验，有些转化植株表现 出较强的抗虫性。总体上来说，转Ｂｔ全长基因的烟草植株，其杀虫效果最好，其余两种差异不 大。首次报道将Ｂｔ基因成功转入高等植物叶绿体并获得表达。

苏云金杆菌预处理小菜蛾对有机磷和氨基甲酸酯杀虫剂的增效作用

研究了小菜蛾Plutellaxylostella幼虫经苏云金杆菌Bacillusthuringiensis预处理后 ,对有机磷和氨基甲酸酯杀虫剂敏感性的变化以及预处理对小菜蛾幼虫体内乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶、谷胱甘肽S 转移酶和谷胱甘肽的含量的影响。结果表明 :苏云金杆菌预处理抗性小菜蛾幼虫后 ,其对甲胺磷、水胺硫磷和克百威的敏感性分别为未处理组的 6 74、 8 83和 8 5 0倍 ;处理敏感小菜蛾幼虫后则分别为未处理组的 2 96、 1 6 9和 3 88倍。苏云金杆菌预处理抗性小菜蛾 ,未处理组乙酰胆碱酯酶的Km 和Vmax值分别为预处理组的 1 86和 1 5 6倍 ,所使用的 6种杀虫剂对乙酰胆碱酯酶的Ki值 ,处理组为未处理组的 1 80～ 2 6 6倍 ,苏云金杆菌预处理抗性小菜蛾对羧酸酯酶的Km、Ki 影响不大 ,但能显著地抑制羧酸酯酶和谷胱甘肽S 转移酶的活性并导致谷胱甘肽含量下降 (对照分别为处理的 2 0 2、 1 76和 1 6 6倍 )。苏云金杆菌预处理敏感小菜蛾 ,对乙酰胆碱酯酶的Km 、Vmax、Ki 值和羧酸酯酶的Km 、Ki 值以及谷胱甘肽含量影响不大 ,但能显著地抑制羧酸酯酶和谷胱甘肽S 转移酶的活性 (对照分别为处理的 1 5 4和 1 6 4倍 )。

杀鞘翅目苏云金芽孢杆菌新菌株及其杀虫剂的研究

从中国土壤中分离出２ 株杀鞘翅目昆虫的苏云金芽孢杆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＹＭ０３ 及ＳＨＱ１１１０ 。ＹＭ０３ 的血清型为Ｈ８ａ８ｂ ，ＳＨＱ１１１０ 的Ｈ 血清型未知。二菌株皆产近菱形的薄扁伴孢晶体，分别含６８ ～７０ｋＤ 和６５ｋＤ 的晶体蛋白质。毒力生物测定证明对柳蓝叶甲（ Ｐｌａｇｉｏｄｅｒａ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒａ） 及马铃薯甲虫（ Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ） 有高毒效。发酵性能良好。ＹＭ０３ 粉剂田间防治马铃薯甲虫有高效。稀释４００ 倍喷雾，防治效果达９４６ ％ 。

微生物转化污泥制备苏云金杆菌生物杀虫剂

以城市污水处理厂的污泥为原料,探索了微生物转化污泥制备苏云金杆菌生物杀虫剂的可行性,并与常规培养基的发酵进程进行了对比.主要考察了苏云金杆菌的代谢特征、菌体形态与杀虫晶体蛋白产量.研究表明:无需任何预处理工序,污泥所含营养成分即可基本满足苏云金杆菌生长需求,且增殖较快,24h即可达活菌数与活芽孢数的最大值:9.48×108CFU.mL-1和8.51×108CFU.mL-1,比常规培养基提前12h,数量分别提高17%和21%;36h SEM表征显示,污泥中晶体与芽孢大部分游离,且晶体较大,呈规则的菱形,而常规培养基中苏云金杆菌的代谢进程相对滞后,且晶体较小;至发酵终点污泥中杀虫晶体蛋白含量为2.80 mg.mL-1,亦略高于常规培养基.采用污泥发酵制备苏云金杆菌生物杀虫剂大大降低了生产成本,且发酵性能优良,为污泥处置开辟了崭新途径.

抗光肩星天牛苏云金芽胞杆菌Bt886菌株的分离及对毒蛋白编码基因的初步鉴定

从拟谷盗虫尸中分离到一株对鞘翅目害虫光肩星天牛幼虫毒杀作用明显的Bt菌株Bt886。幼虫死亡率高达 6 0 % ,存活者生长明显受到抑制。经过晶体形态特征和杀虫谱分析 ,初步确认该菌株属于cry3类。比较cry3类基因的保守序列 ,利用一对cry3特异引物成功地从Bt886菌株中克隆到了一段基因片段并克隆至pGEM -T载体上。测序分析发现该片段与cry3Aa1基因具有很高的同源性 ,确定来自毒蛋白编码基因。Southern杂交分析表明该基因位于该菌株的质粒上。

化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响

研究了 7种常用化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响及作用 ,结果表明 ,常用浓度下 ,2 .5 %溴氰菊酯乳油、4 8%毒死蜱乳油对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体无影响 ,可与苏云金杆菌制剂事先做成混剂 ;4 .5 %高效氯氰菊酯乳油、2 .5 %高效氯氟氰菊酯乳油、2 0 %灭多威和 4 0 %辛硫磷在短时期内对芽孢及伴胞晶体无明显影响 ,可与苏云金杆菌制剂现混现用 ;80 %敌敌畏乳油(5 0 0倍稀释 )对苏云金杆菌伴胞晶体有明显损伤作用 。

苏云金杆菌与化学杀虫剂的联合作用测定

采用生物测定方法 ,测定苏云金杆菌与沙蚕毒素、苯甲酰脲等 5类化学杀虫剂混用对小菜蛾的毒力。结果表明 ,Bt与抑太保、杀虫单复配具有明显增效作用 ,共毒系数为 2 4 9.5和 2 37.2 ;与氯氰菊酯和阿维菌素间表现为增效和相加作用 ;与敌百虫混配则表现为拮抗作用。与杀虫单不同比例混配联合作用效果不同 ,共毒系数为 155.6～ 186 .5。

苏云金芽孢杆菌生物杀虫剂发酵生产的影响因素及其工艺选择

化学杀虫剂的长期使用给生态环境造成了严重破坏,也使害虫种群的抗药性日益提高,生物杀虫剂以其"绿色环保"的特点引起人们的广泛关注。其中,苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)制剂是目前世界上产量最大、应用最广的生物杀虫剂。它对鳞翅目、双翅目、鞘翅目、螨类等许多有害昆虫有毒杀作用,而对人类、动物和农作物无害。长期以来,人们一直致力于苏云金芽孢杆菌发酵过程的研究,以期获得高毒效的生物杀虫剂产品。本文首先对苏云金芽孢杆菌发酵生产的各种影响因素进行了综合分析,将影响因素分为培养条件和培养基组分两类,得出最佳培养条件为温度:(30±1)℃,pH:7.0±0.1,搅拌速度:400～600r·min-1,通气量:1∶0.6～1.2(发酵培养基体积与每分钟通入空气的体积之比),接种时间:对数期初;最佳培养基配比为碳氮比:8～10∶1,无机盐含量:KH2PO4或K2HPO4为0.075%～0.2%;MgSO4·7H2O为0.075%～0.3%;CaCO3为0.075%～0.15%;MnSO4·H2O、FeSO4·7H2O各为0.002%。其次,对当前研究与工业化生产中的各种发酵工艺进行了评述,总结了现有发酵工艺的优缺点。在现有研究基础上,降低培养基原料成本、改进发酵工艺和采用基因学手段构建高效工程菌株将成为未来研究热点。

粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌的增效特性及对Bt毒蛋白的降解活化作用

以小菜蛾Plutella xylostella为试虫,采用生物测定方法测定了粘虫颗粒体病毒（Pseudaletia unipuncta granulosis virus,PuGV-Ps）对苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）的增效作用。结果表明：不同配伍PuGV-Ps和Bt间的共毒系数在105.3至195.0之间,PuGV-Ps对Bt毒力具有增强作用,其中以Bt∶PuGV-Ps为4∶1增效作用最明显,72hLC50为0.039mg/mL。不同温度和pH值都影响PuGV-Ps对Bt的增效作用,16℃-20℃增效程度明显高于24℃-32℃,而碱性条件下（pH8-9）增效作用更显著。PuGV-Ps对Bt的增效作用因小菜蛾龄期不同而变化,2、3龄幼虫死亡率较单独使用Bt分别提高了50%和30.31%,而作用于低龄（1龄）和高龄（4龄）幼虫时对Bt的增效作用不显著。PuGV-Ps饲喂2h后再接毒Bt,小菜蛾死亡率明显提高,48h死亡率达66.67%,较直接饲喂Bt＋PuGV-Ps处理死亡率提高了53.87%,差异极显著。SDS-PAGE表明PuGV-Ps具有碱性蛋白酶的活性,离体条件下能促进δ-内毒素酶解为47kD,60kD和61kD的毒性肽。

利用玉米浸泡液制备苏云金杆菌生物杀虫剂

以玉米淀粉生产过程中的浸泡液作为原料培养基,在5L发酵罐中培养苏云金杆菌生物杀虫剂,并以常规黄豆粉培养基为对照,考察了苏云金杆菌在玉米浸泡液中的生长代谢状况(包括菌体形态、菌数增长与芽孢形成)以及48h发酵液的生物毒效.研究表明,无需添加其它成分及前处理,玉米浸泡液所含营养成分即可满足苏云金杆菌生长需求,其培养的总活菌数及芽孢数在27h可达最大值1.51×109CFU.mL-1和1.41×109CFU.mL-1,分别比常规培养基高出59%和85%,芽孢形成与晶体释放提前约9～12h;36h扫描电镜(SEM)观察表明,发酵36h浸泡液中大部分芽孢囊已经自溶,游离出卵圆形芽孢与菱形的晶体;而此时常规培养基正处于芽孢形成后期,只有极少数的游离晶体与芽孢;48h发酵终点的生物毒效结果显示,以浸泡液为培养基的苏云金杆菌发酵液毒效(891.51IU.μL-1)比常规培养基高89%.本试验为浸泡液的再利用提供了一条崭新的途径,同时降低了杀虫剂的生产成本.

苏云金杆菌内外毒素混合杀虫剂的毒理学研究

对苏云金杆菌内外毒素混合杀虫剂的毒性进行了较系统的研究。结果表明：该杀虫剂的经口、经皮急性毒性低，其ＬＤ（５０）均大于５０００ｍｇ／ｋｇ，无明显皮肤致敏、致突变、致畸、蓄积性和生殖毒性。有轻度的皮肤刺激作用，剂量达到１０ｍｇ／ｋｇ时呈现出免疫毒性作用。建议在农药的毒理学安全性评价程序中，增设免疫毒性的评价方法。

玉米浸泡液制备苏云金杆菌生物杀虫剂的影响因素研究

以玉米淀粉生产过程中的浸泡液为培养基,摇瓶发酵培养苏云金杆菌生物杀虫剂,通过一系列单因子试验,考察了不同培养条件(种子液的种龄、接种量、浸泡液的含固率、初始pH值、摇床转速、发酵温度及发酵时间)对苏云金杆菌在玉米浸泡液中的生长(菌数增长与芽孢形成)以及发酵液的生物毒效的影响。研究表明,在最佳摇瓶培养条件(种子液种龄10 h,接种量2%,浸泡液含固量3%,初始pH值7.0～7.5,摇床转速200 r/min,发酵温度30℃)下发酵48 h,活菌数和活芽孢数分别可达到7.9×108CFU/mL和5.5×108CFU/mL,毒力效价为698.0 IU/μL。本试验可为生物农药的工业化生产提供实用参数。

新型苏云金杆菌(Bt)防治美国白蛾药效试验

该文应用新型苏云金杆菌（Ｂｔ）分别于室内和室外对防治美国白蛾Ｈｙｐｈａｎｔｒｉ－ａ Ｃｕｎｅａ（Ｄｒｕｒｙ）进行了药效试验。幼虫１～２ 龄时应用浓度为１０００～１２００倍液；３～４ 龄时为８００～１０００倍液；５龄以上应为５００～８００