苏云金杆菌WG-001工程菌发酵培养基的筛选

探讨了BtWG001工程菌以农副产品为主要碳、氮源的利用情况,为该菌株发酵培养基的筛选提供了广谱的原料资源。利用高速上升浓度加倍法进行了发酵培养基的优选,获得一个优良配方。发酵水平达到4024IU/μL,0.39%,与对照配方(2800IU/μL,0.26%)相比,分别提高44%,50%。证明该方法为一种筛选Bt发酵培养基配方的新模型。

苏云金芽孢杆菌工程菌伴孢晶体的形态发生

苏云金芽孢杆菌在有帮助蛋白存在的情况下杀虫晶体蛋白获得了超量表达。通过透射电镜观察了Cry1Ac超量表达工程菌伴孢晶体的形态发生以及不同芽孢发育时期的晶体形态变化。结果表明 ,该工程菌的伴孢晶体在细胞不对称分裂的隔膜形成前就已出现 ,而且晶体发生的部位与芽孢无关。但晶体在形成初期往往靠近母细胞膜。观察结果还表明 ,大量表达的晶体蛋白不能马上参与到晶体合成 ,晶体形成的最佳时期是芽孢皮层形成期。母细胞大量液泡的产生与消失可能与晶体形成有关。此外 ,在超量表达工程菌中 ,Cry1Ac蛋白能在一个细胞内形成多个伴孢晶体 。

松叶面抗虫共生工程菌的构建

将来自Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki的杀虫基因cryIAc通过综合质粒载体pEG601,整合到松树共生细菌B.cereus(Bc752)的染色体上,得到的工程菌对马尾松毛虫幼虫有明显的杀虫活性。此综合质粒含有能在营养期表达BtcryIAc基因的强启动子、cryIAc杀虫基因、四环素抗性标记基因tetr、8.0kb的EcoRI-NcoⅠB.cereus(O147)染色体片段。将综合质粒通过电击导入Bc752中,综合质粒与Bc752染色体发生同源重组,将BtcryIAc基因整合到Bc752的染色体上。通过对转化子的DNA酶切分析、PCR扩增、SDS-PAGE凝胶电泳检测、Westernblot、电镜观察、毒力测定,结果表明BtcryIAc基因已经整合到松树共生细菌Bc752的染色体上,并可高效表达。

苏云金芽胞杆菌工程菌WG-001可湿性粉剂的增效化合物筛选

为了筛选出对苏云金芽胞杆菌具有增效作用的无机化合物,并确定其最佳使用浓度,于苏云金芽胞杆菌工程菌WG-001可湿性粉剂(B tWG-001 WP)中添加MgC l2、CaC l2、NaHCO3、MgSO4、NaH2PO4、Na2CO3、Na2HPO4、KH2PO4等8种化合物,测定其对小菜蛾的毒力。结果显示,添加0.4%MgC l2、0.2%CaC l2、0.4%MgSO4、0.2%Na2CO3时,共毒因子分别为4 6.7 5、3 6.2 7、41.51、31.03,均大于20,而添加另外4种化合物,共毒因子均低于20;添加0.4%MgC l2、0.2%CaC l2、0.4%MgSO4、0.2%Na2CO3,增效比最大,分别为1.46、1.33、1.34、1.29。田间试验结果显示,BtWG-001 WP中添加0.4%MgSO4稀释500倍施用时,药后7天对小菜蛾的田间平均防效最高,为80.51%,且与其它处理差异显著。表明添加0.4%MgSO4可显著提高B t对小菜蛾的田间防效。

Bt工程菌高性能载体研究进展

近30年来,以苏云金杆菌为基础利用ICPs基因构建性能优良的重组菌株和生产遗传重组杀虫剂成为生物农药公司的主要目标。生物工程杀虫剂相继商品化,用于防治重要经济作物的害虫。为了增强工程菌的杀虫效果,研究者在构建高性能载体方面开展了大量研究并取得显著进展。文章对该领域研究进展做一简要综述。

Bt工程菌WG-001与化学杀虫剂复配最佳配方筛选及田间防效研究

为了延缓小菜蛾Plutella xylostella(L.)抗药性的产生和发展,筛选Bt工程菌WG-001与化学杀虫剂的最佳复配配方,本研究采用浸叶法分别测定了Bt工程菌WG-001与茚虫威、丁醚脲和巴丹复配对小菜蛾的增效作用。结果表明,当Bt工程菌WG-001与茚虫威以有效成分之比为100.10∶0.72复配时,增效作用最强,共毒系数为178.05。而Bt工程菌WG-001分别与丁醚脲和巴丹复配表现相加或拮抗作用。田间试验结果表明,Bt工程菌WG-001与茚虫威以100.10∶0.72的有效成分之比进行复配后,药后7d,500倍液对小菜蛾的平均防效为84.88%,显著优于Bt工程菌WG-001和茚虫威单用的平均防效。

苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌杀蚊作用以及工程菌改造研究进展

苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌是应用最广泛的杀蚊幼虫的细菌，但还存在很多不足。苏云金芽孢杆菌产生两类杀蚊幼虫晶体蛋白，即内毒素晶体蛋白和溶细胞毒素，球形芽孢杆菌产生二元毒素和杀蚊毒素。研究不同毒素的不同杀蚊作用，以及通过DNA重组技术改造原有的菌种，扩大其杀蚊幼虫的活性和范围，有助于更有效地杀灭媒介蚊虫和防治疟疾。