聚羟基丙烯酸和4%中性缓冲甲醛对苏木精伊红染色及荧光原位杂交检测乳腺癌HER-2基因影响的比较

背景与目的：适当的组织固定、透明脱蜡是苏木精伊红（hematoxylineosin，HE）染色及荧光原位杂交（fluorescence加s／tuhybridization，FISH）检测乳腺癌HER．2基因一个重的步骤。该研究旨在对比环保固定液聚羟基丙烯酸和4％中性缓冲甲醛固定制作的组织切片HE染色优良率，荧光原位杂交检测两者固定制作的乳腺癌组织切片的HER-2基因扩增阳性率，探讨其替代传统固定液4％中性缓冲甲醛的可行性。方法：收集中山市博爱医院2011年3月一2015年1月门诊及住院部送检的乳腺癌69例、乳腺纤维腺瘤41例、子宫平滑肌瘤40例、宫颈组织25例、胎盘组织25例，各取材2块，每例标本的2块组织用抽签法随机分2组，一组采用4％中性缓冲甲醛固定制作HE切片200张，另一组采用聚羟基丙烯酸固定制作HE切片200张。依据切片染色情况判定切片等级，采用SPSS19．0比较两者HE染色优良率；两组乳腺浸润性导管癌组织再各制作切片69张，采用SPSS19．0比较FISH技术检测的HER．2基因扩增率。结果：①聚羟基丙烯酸、4％中性缓冲甲醛固定组组织切片HE染色优质片分别为155张、166张，优良片41张、33张，中等片3张、1张，差片1张、O张，染色优良率分别为98．0％、99．5％，两组间优良率差异无统计学意义（x2=1．33，P=-0．25）。②聚羟基丙烯酸、4％中性缓冲甲醛固定组组织切片FISH阳性率分别为26．09％、23．19％，两组间阳性率差异无统计学意义C=0．50，P〉0．05）。结论：聚羟基丙烯酸固定制作的组织切片HE染色效果及荧光原位杂交检测乳腺癌HER．2基因扩增效果跟传统固定液4％中性缓冲甲醛相比差异无统计学意义，符合环保求，有推广使用的可能。

苯酚在病理技术苏木精-伊红染色法中对病理切片质量的影响

目的探究苯酚在病理技术苏木精-伊红(HE)染色法中对病理切片质量的影响。方法选取2022年3月至2023年1月赣州市妇幼保健院纳入的80例实施病理诊断的患者作为研究对象,按照随机数字表法分为观察组与对照组,每组各40例。对照组病理切片采用常规HE染色,观察组病理切片在对照组的基础上联合苯酚染色。评估两组患者病理切片诊断准确率、病理切片质量。结果观察组病理切片诊断准确率为92.50%,高于对照组的病理切片诊断准确率(75.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.501,P=0.034)。观察组病理切片质量优良率为100.00%,高于对照组病理切片质量优良率(85.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.505,P=0.034)。结论苯酚应用于病理技术HE染色效果明显,可有效提高病理切片诊断准确率以及病理切片质量,为临床诊断和治疗相关疾病提供科学合理技术手段。

成年斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色

目的介绍斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红(HE)染色的方法。方法利用ThermoShandonExcelsior组织处理机、ThermoShandonHistocentre2型石蜡包埋机、ThermoShandonFinesse325型切片机、ThermoShandonVaristainGemini全自动染片机和ThermoShandonConsul全自动封片机制作成年斑马鱼石蜡连续切片并进行HE染色。结果利用上述方法获得清晰的成年斑马鱼石蜡连续HE染色切片。结论斑马鱼石蜡连续切片的制作和HE染色与哺乳类动物组织切片和染色在操作和某些工作参数上有所不同。

基于视觉模型的苏木精-伊红染色法染色病理切片骨小梁提取

为了提取HE染色骨组织切片的骨小梁，实现骨小梁面积定量检测，以极坐标扩散方式创建视觉模型，划分骨小梁与骨细胞、骨皮质的边界。提取背景某一像素的RGB值，把病理切片所有像素的RGB值对背景像素求取三维欧式距离，获得阈值，对图像二值化分割，通过区域填充获得骨小梁。结果表明视觉模型能较好地获得感兴趣区域的边界，计量的骨小梁面积精度高于常规软件，检测结果鲁棒性相对于常规软件提高了95％以上，人机交互少，降低了检测的盲目性，提高了检测速度。

采用组织芯片技术进行苏木精-伊红(HE)染色技术标准化的研究

目的研究苏木精-伊红(HE)染色技术的标准化。方法采用组织芯片技术制作60例人体不同组织和肿瘤组织的组织芯片,并进行HE染色试验。结果 70℃30min组织无掉片现象并且结构清晰,染色色彩鲜艳;苏木素染色4min各类组织中的细胞核清晰,核膜、染色质清晰可见,胞浆红色鲜艳;伊红染色3min伊红染色深浅适中,颜色清晰艳丽,颜色层次分明,与蓝色的细胞核对比突出。结论 70℃烤片30min,苏木素染色4min,伊红染色3min的HE染色程序比较合适于大部分组织的染色。

全自动苏木精-伊红染色染封一体机使用对比分析

为进一步改善常规苏木精-伊红染色法（HE）染色质量,提高工作效率,结合公立医院改革要求,调整医疗服务价格,规定只有“全自动染色封片一体机”才能收费（15元/张）,考虑到人力成本以及经济效益等方面因素,各单位都开始使用全自动染封一体机,目前市面上全自动染封一体机品牌和型号众多,现挑选市面上主流的三个品牌的全自动染色封片一体机,就其基本情况及机器的优缺点进行对比分析如下。

文昌鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色

目的介绍文昌鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红(HE)染色的方法。方法利用Leica EG1150分体式石蜡包埋机;Leica VT1000S手动轮转切片机;Leica HI1210摊片机;Leica HI1220烘片机制作文昌鱼石蜡连续切片并进行HE染色。依据对脱水和透明过程中文昌鱼外观的变化以及镜下切片结果的反复比较,总结出各个步骤的时间参数。结果利用上述方法获得清晰的文昌鱼石蜡连续HE染色切片,我们选择了头部、胸部、腹部、尾部四个有代表性的文昌鱼断面,在片中可以清楚地分辨脊索、神经管、鳃、卵巢、肌节、肠等结构。结论本文成功建立文昌鱼石蜡连续切片的制作和HE染色方法,并为研究脊椎动物的起源提供基础资料。

苏木精-伊红染色制作骨骼肌组织教学切片的方法优化

目的优化骨骼肌教学切片的制作方法,以期提高制片效率与切片质量。方法石蜡包埋、苏木精-伊红染色,比较不同物种之间骨骼肌组织以及不用厚度的骨骼肌组织切片横纹结构的差别。结果人与狗的骨骼肌肌原纤维及横纹结构典型,厚度4~5μm 的切片中肌原纤维及横纹结构较其他厚度更易分辨。结论狗的骨骼肌更适合替代人的骨骼肌用于组织教学切片的制作,4~5μm 的切片厚度易于显示横纹结构。

冰冻切片苏木精-伊红染色进行性快速染色法研究

冰冻切片在临床工作中,主要用于手术过程中对送检标本的及时诊断。这就要求病理医师在最短的时间内为术者提供送检标本病变的信息。术者据此为患者的治疗决定最佳的方案或术式,以达到治疗的最佳效果,减轻患者的痛苦。这样在冰冻切片检诊过程中,分秒必争地缩短冰冻切片镜检标本的制作（染色）时间,就成为重要的环节。

冰冻切片和苏木精-伊红染色在大鼠脑组织中的应用

冰冻切片制作过程较石蜡切片快捷、简便,大多数组织只需简单处理,在-20益或所需温度的条件下使组织快速冷却到一定硬度,就可以进行切片,因而临床上多用于手术中的快速病理诊断[1],具有简单快速、组织变化小、对组织中的抗原活性和酶类能较好保存等优点而广泛应用于科学研究和临床诊断上[2]。

全自动苏木精-伊红染色,助力肿瘤诊断病理学

日前，在北京召开的罗氏诊断常规染色平台研讨会上，中国医学科学院肿瘤医院吕宁教授担任会议主席，首都医科大学附属北京朝阳医院病理科金木兰教授及其他病理专家就常规病理工作中组织污染、制片过程中脱水环节问题、自动染色机的使用及特殊染色在肿瘤诊断中的应用进行了专题报告，为病理实验室自动化、规范化管理，以及肿瘤防治提供了新思路。

大鼠阴道细胞涂片技术及其HE染色方法的研究

目的:探索制备大鼠阴道细胞涂片的最佳方法,为实验中判断雌性大鼠的动情周期提供参考。方法:60只SD雌性大鼠,随机分为6组,每组10只,分别用不同方法制备阴道细胞涂片,共10 d。空白组正常饲养;常规棉签组10cm无菌棉签用生理盐水浸湿插入大鼠阴道内(深度约1 cm),单向旋转3圈,蘸取脱落细胞,逆向均匀地涂在载玻片上;自制棉签组自制无菌棉签(较常规棉签头外径小),操作同常规棉签组;20μl移液枪组、40μl移液枪组、80μl移液枪组分别采用20μl、40μl和80μl 3种不同刻度的移液枪,吸取20μl、40μl和80μl生理盐水打入大鼠阴道内(深度约1 cm),反复吹打3次,吸出阴道液均匀地涂在载玻片上。涂片晾干后,经苏木精-伊红染色(HE染色),在显微镜下分别观察HE染色前后阴道涂片细胞分布情况,并记录每只大鼠的动情周期变化,比较不同制备方法对大鼠动情周期的影响。同时,每日尾静脉采血对大鼠血清性激素水平进行连续性检测,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中促卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平连续变化情况,共10 d。结果:棉签插入阴道滞涩,采集阴道细胞量少,细胞分布不均匀,呈“条带”样排列;染色后,细胞脱落明显,易脱片,细胞较少,可勉强判断动情周期;常规棉签与自制棉签比较,镜下观察结果相似,常规棉签采集阴道细胞较多。移液枪插入阴道顺畅,采集细胞量多,随着吸取生理盐水量的增加,细胞分布表现为由密集重叠到相对均匀;染色后,细胞较多,细胞形态清晰,动情周期易辨。尤以80μl移液枪为宜。棉签法长时间刺激会导致大鼠动情周期紊乱,主要表现为动情周期延长;移液枪冲洗法对大鼠动情周期影响较小,移液枪组与常规棉签组动情周期紊乱率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。棉签组血清中FSH、E2水平变化无周期性、规律性变化,第5天、第6天、第8天与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);80μl移液枪组大鼠血清中FSH、E2水平呈周期性变化,较有规律,与空白组水平变化趋势相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究阴道涂片的制备方法中80μl移液枪组最佳,对大鼠动情周期变化影响较小,性激素水平变化趋势与空白组大鼠相近,即用80μl移液枪冲洗涂片法观察大鼠动情周期清晰易辨,影响较小。

不同类型返蓝液在苏木精-伊红切片中的应用及对切片褪色的影响研究

目的探讨不同类型返蓝液在苏木精-伊红(HE)切片中的应用对比及对切片褪色的分析。方法选择2021年10月至2022年3月期间南平市第二医院病理科选取的30个阑尾蜡块,20个乙状结肠癌蜡块、23个扁桃体蜡块,20个胃黏膜活检蜡块,总共93个蜡块。93个蜡块均行制备HE切片,每个蜡块连续切片均切3张同样厚度切片,分别分到3组中,每组都含以上93个蜡块中的1张同等厚度的切片。对照1组采用饱和碳酸锂返蓝,对照2组采用稀氨水返蓝,观察组采用EDTA返蓝,比较3组HE染色情况、HE切片褪色情况。结果3组在组织结构、细胞核形态、细胞质染色情况、细胞核染色及核质对比评分存在差异(P<0.05)。观察组组织结构、细胞核形态、细胞质染色情况、细胞核染色及核质对比评分分别高于对照1组和对照2组(P<0.05)。3组在染色后的第30天、第90天、第180天、第270天、第360天、第390天切片褪色情况评分存在差异(P<0.05)。观察组在染色后的第30天、第90天、第180天、第270天、第360天、第390天切片褪色情况评分分别高于对照1组和对照2组(P<0.05)。结论不同类型返蓝液用于HE切片中均可获得良好的染色情况,但是EDTA返蓝染色质量好对切片褪色影响较小,方便后期复片。

硬脑膜修复生物膜的大鼠原位脑植入局部神经毒性评价方法

目的采用大鼠原位脑植入模型评价硬脑膜修复生物膜的局部神经毒性,旨在建立脑部原位植入局部神经毒性评价方法。方法选择硬脑膜修复生物膜为研究对象,以上市同类产品为对照品,经大鼠原位脑植入,获取包含颅骨、硬脑膜、植入材料及其周围大脑组织的标本。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Fluoro-Jade C(FJC)特殊染色与胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光考察植入物周围脑组织的局部组织学反应、神经元降解退行性变与星形胶质细胞增生来综合评价植入物的潜在神经毒性风险。结果植入4周、13周、26周后,与对照品相比,供试品的局部组织学反应均为无刺激反应;FJC染色单位面积阳性细胞数量不存在显著性差异(P>0.05),提示供试品的神经元降解程度与对照组相比不存在显著性差异;GFAP染色单位面积阳性细胞数量不存在显著性差异(P>0.05),提示供试品的星形胶质细胞增生程度与对照组相比不存在显著性差异。结论可以采用HE染色、FJC特殊染色与GFAP免疫荧光染色联合评价硬脑膜修复生物膜经大鼠原位脑植入后的局部神经毒性。

气肿疽梭菌C54-1株的制备与检定

为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等方面进行了比较。实验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。16S rDNA鉴定为气肿疽梭菌,相似度为99.93%。在免疫原性检定中,使用致死剂量攻毒时,免疫组能够4/4被保护,证明该菌明矾苗免疫效果良好。使用商品化梭菌培养基对于该菌培养进行了比对,证实商品化培养基替代厌气肉肝汤的可能性。本研究为气肿疽梭菌的制备和检定提供参考依据,并使用不同培养基进行比对研究,为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。

环保透明脱蜡液Van-Clear与传统试剂在组织处理后HE染色及FISH法检测乳腺癌HER2基因中的比较

目的比较环保透明脱蜡液Van-Clear和二甲苯透明脱蜡制作的组织切片苏木精-伊红(HE)染色优良率,对比荧光原位杂交(FISH)法检测2种透明脱蜡液制作的乳腺癌组织切片的人类表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增阳性率,探讨Van-Clear替代二甲苯的可行性。方法收集中山市博爱医院2013年2月~2015年12月门诊及住院部送检的乳腺浸润性导管癌标本89例、乳腺增生标本125例、子宫平滑肌瘤标本193例、子宫平滑肌肉瘤标本12例、肺癌穿刺标本16例、绒毛标本139例,同一病变部位切取2个样本,用抽签法随机分为2组,命名为A、B组。A组采用二甲苯透明脱蜡制作切片574张;B采用Van-Clear透明脱蜡制作切片574张。依据切片染色情况判定切片等级,采用SPSS20.0软件比较A、B组切片HE染色优良率;A、B组中乳腺浸润性导管癌标本再各制作切片89张,采用SPSS 20.0软件比较FISH法检测的HER2基因扩增的差异。结果 (1)生物显微镜下,A、B两组切片HE染色结果细胞轮廓清晰、透明度好,细胞核与细胞质蓝红相映、色彩鲜艳,核质对比明显,核膜及核染色质颗粒清晰可见、分辨良好,分裂象染色体呈现黑蓝色,各种成分层次分明。(2)A、B两组切片HE染色优良片分别为570张、572张,中等、差片4张、2张。染色优良率分别为99.30%、99.65%,两组间染色优良率差异无统计学意义(χ2=0.50,P>0.05)。(3)荧光显微镜下,A、B两组切片乳腺浸润性导管癌HER2双探针FISH检测结果组织轮廓和背景均清晰,探针定位准确,可见耀眼的红/绿荧光信号。(4)A、B两组切片检测乳腺浸润性导管癌HER2基因,FISH阳性率分别为24.72%、26.97%,两组间阳性率差异无统计学意义(χ2=0.50,P>0.05),且FISH结果符合率为97.75%。结论环保透明脱蜡液Van-Clear有替代传统试剂二甲苯应用于组织切片HE染色及FISH法检测乳腺癌HER2基因的潜在可能。

两种染色法判定左前臂骨缺损修复骨组织的成熟度

背景:苏木精-伊红染色和Masson染色是常用的两种评价骨组织修复程度的方法,但上述两种方法能否有效地评价骨缺损修复过程中骨组织成熟度,目前尚缺乏相关研究。目的:比较Masson染色和苏木精-伊红染色两种方法判定骨组织成熟度的敏感性。方法:构建新西兰白兔15mm桡骨缺损的动物模型,植入丝素蛋白/羟基磷灰石/骨髓基质干细胞的组织工程化骨,分别于术后第4,8,12周随机选取6只动物摄X射线平片,随后处死取材,进行大体标本观察、Masson染色及苏木精-伊红染色组织学观察。结果与结论:X射线片与大体标本可见兔桡骨缺损逐渐修复,新生骨走向成熟骨。术后4周,苏木精-伊红染色在材料与骨的结合部及中间的材料上均形成大量新生软骨,有类骨样组织形成及有少量编织骨出现;Masson染色主要表现为绿色,可见到少许红染。术后8周,苏木精-伊红染色出现更多的新生骨组织,并更趋于成熟,出现了成熟的骨细胞及大量编织骨,有血管形成;Masson染色主要表现为红-绿相间。12周时,苏木精-伊红染色新生骨逐渐改建,形成髓腔,有大量板层骨相互融合成片;Masson染色主要表现为红色。说明Masson染色结合苏木精-伊红染色能较好判定新生骨走向成熟骨的过程,但在判定骨质成熟度时Masson染色较苏木精-伊红染色更直观。

抗原热修复退色法在HE切片改做免疫组化染色中的探索

HE染色与免疫组化染色在病理诊断中处于重要的地位，是目前病理科较常用的常规方法。在实际病理诊断工作中，经常遇到HE染色的会诊组织切片和细胞涂片，而无相应的组织蜡块或多余的细胞涂片白片，为进一步明确诊断只能在原HE染片上做免疫组化染色，此时需将HE染片退去HE染色，改做免疫组化染色。目前，采用抗原热修复法退色尚未见文献报道，我们通过探索、实验及临床应用发现其效果良好，现报道如下。

酒蒸王不留行工艺优化及其对脂溢性皮炎的药效评价

目的:优化酒蒸王不留行炮制工艺,初步研究酒蒸王不留行治疗脂溢性皮炎的作用机制。方法:建立王不留行黄酮苷和刺桐碱的高效液相色谱(HPLC)检测方法,使用响应曲面法考察料液比、闷润时间、蒸制时间对酒蒸王不留行的影响,优化炮制工艺。建立脂溢性皮炎大鼠模型,通过观察苏木精-伊红(HE)染色病理切片和检测大鼠血清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)含量,探讨酒蒸王不留行治疗脂溢性皮炎的可能机制。结果:经响应曲面试验,最优酒蒸王不留行炮制工艺为:料液比25 kg/100 kg(辅料/药材),闷润时间2.4 h,蒸制时间2.4 h。药效方面:同模型组大鼠比较,阳性药物组和酒蒸组大鼠皮损评分差异有统计学意义(P<0.01)。HE染色病理切片发现,酒蒸王不留行可以修复并改善脂溢性皮炎模型表皮层和真皮层的细胞坏死,亦可以减缓由脂溢性皮炎引起的淋巴细胞浸润以及结缔组织增生的症状,阳性药物组在治疗时会引起表皮层增厚。此外,阳性药物组和酒蒸组均能提高模型大鼠血清中IL-2、IFN-γ水平的同时,降低血清中IL-4、IL-10的水平。结论:确定了酒蒸王不留行的最佳炮制工艺,且酒蒸王不留行能在一定程度上缓解脂溢性皮炎,其机制可能是通过影响辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)平衡实现的。