微波二次固定提高肿瘤组织冰冻切片及苏木素-伊红染色质量的研究

冰冻切片质量的好坏直接关系到能否准确及时地作出病理诊断,以指导手术治疗方式,近年来,国内外学者对如何提高冻冻切片及染色质量做了大量工作,但仍然存在着组织结构被冰晶破坏,对比染色差,细胞核着色不清晰等缺点,我们应用微波加热固定液对组织块进行预固定,切片后再次固定的“二次固定技术”处理肿瘤组织,获得了比单纯脱脂固定切片更好的效果.1 材料与方法1.1 材料 选用我院1994～1995年外科送检需要急诊冰冻的乳腺、胃、肠、卵巢、甲状腺及脑等处的肿瘤组织,取材2cm×1.5cm×0.5cm数块.YWY781A型医用微波炉为浙江临安爱迪电子仪器厂产品,有8个功率选择开关,最大输出功率为500W.1.2 方法(1)将肿瘤组织分为不处理和处理组,处理组分别用生理盐水,10%甲醛和Bouin液在80℃恒温水浴固定5min,用微波2档(输出功率250W)固定1min.(2)将上述肿瘤组织用恒冷切片机切成5μm厚的冰冻切片数张,贴片稍于后分成不固定组和固定组,固定组分别用酒精-冰醋酸-甲醛固定液(AAF).

苏木素-伊红制作过程中的常见问题及分析

病理制片技术是病理学的重要组成部分，切片质量的好坏直接影响正确的病理诊断。然而，病理诊断的准确率不仅对相关科室，甚至对医院整体的医疗水平造成极大的影响。在常规苏木素．伊红（HE）染色制作过程中，本研究针对固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封固、核对等步骤中易出现的问题进行分析。

骨组织的石蜡切片及苏木素-伊红染色方法的改进

在常规的病理技术工作中，骨、牙齿及其他钙化组织的石蜡切片及苏木素-伊红（HE）染色难度最大，硬骨组织所含的钙主要为磷酸钙和碳酸钙等，其与黏合质结合甚牢。在制作切片前，必须脱钙才能切片，通常遇到脱钙液对骨组织渗透力不强，脱钙不彻底，致使骨组织硬，切片时刀片容易产生缺口，制片不成型，厚薄不均，即使勉强切出片，质量也很差，染色容易脱片。并且随着患者的年龄增高，钙盐相对增多，

苏木素-伊红染色切片褪色的解决办法

苏木素-伊红（hematoxylineosin staining,HE）染色法是石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木素染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

冬季苏木素-伊红染色常见问题与处理

苏木素-伊红（HE）染色制片是病理科工作中的一项最基本、最重要的技术。由于HE染色制片是多步骤、多因素决定的方法,因此在制片过程中存在很多影响因素,尤其是在冬季室温较低的情况下,常会出现不理想的染色结果。本文就冬季HE染色制片过程中需注意的问题进行分析和讨论如下。

酸脱钙组织苏木素-伊红染色前处理改良方案

目的研究牙、骨等硬组织酸脱钙标本苏木素-伊红(HE)染色前处理方法,改善硬组织因酸脱钙后pH变化而引起的切片质量欠佳及HE染色组织结构不清的现象。方法 20例含硬组织的口腔病理标本硝酸脱钙后分别进行常规处理、浓氨水浸泡处理、饱和碳酸锂溶液浸泡处理,比较不同处理方法下切片质量及HE染色效果。结果与常规处理相比,饱和碳酸锂溶液处理标本切片完整,苏木素着色强、胞核染色清晰,胞浆染色鲜艳。结论酸脱钙标本在脱水包埋之前,经饱和碳酸锂溶液浸泡处理能中和脱钙组织酸性环境,切片质量及HE染色效果较好,适用于口腔病理酸脱钙组织样本的苏木素-伊红染色前处理。

巴氏染色与苏木素-伊红染色在液基细胞涂片中应用研究

我院2005年7月开始引进和应用液基薄层细胞制片（TCT）技术，采用新柏液基薄层细胞检测，为了比较苏木素-伊红（HE）染色法与巴氏染色法在液基细胞中的区别，

苏木素-伊红组织染色在全自动组织切片染色机中的使用技巧

随着医学病理技术的快速发展，全自动组织切片染色机以其卓越的性能和良好的处理效果，逐渐被各级医院病理科接受并使用。我科自2007年底引进Lecia ST5030自动染色机及其附件，经过4年的使用颇有心得，现就Lecia组织切片染色机进行苏木素-伊红（HE）染色的使用技巧介绍如下。

联合运用瑞氏和苏木素-伊红染色法在浆膜腔积液脱落细胞学中的价值评价

目的:评价浆膜腔积液脱落细胞学中联合运用瑞氏和苏木素-伊红染色法的应用价值。方法:通过对2608例浆膜腔积液涂片(其中胸腔积液1874例、腹腔积液629例、心包积液105例)联合运用瑞氏(Wright)和苏木素-伊红(HE)染色法,对脱落细胞学检查进行综合分析。结果;HE和Wright两种染色法比较P>0.05差异无统计学意义,联合HE及Wright染色法与单一染色法比较P<0.05差异有统计学意义;联合应用HE和Wright染色法敏感性81.8%(551/674)。结论:浆膜腔液脱落细胞检查中联合运用瑞氏和苏本素-伊红染色法可提高诊断的敏感性及阳性检出率;同时可互补单一染色法在细胞学诊断中的局限性,值得在基层医院推广应用。

苏木素-伊红染色中常见问题原因分析

苏木素-伊红染色（HE染色）是病理切片的一种常规染色方法,操作方法简单,但在染色过程中易受组织固定、脱水、温度等因素的影响,导致染色质量下降.笔者就染色中常出现问题的原因进行了分析,以提高病理切片染色质量.

二次分化法在苏木素-伊红染色中的应用及探讨

一张优质的切片要求切片完整,厚薄均匀,无刀痕,无皱褶,还要求染色清晰,核质分明,对比度好。在苏木素-伊红（HE）染色中,分化是关键,笔者对2万余张常规组织切片进行了深染重退对比染色;发现经2次或2次以上分化组织染色的切片,无论是色彩鲜艳度、细胞清晰度,还是核质对比度，都优于1次分化染出的组织切片，具体方法如下。

苏木素-伊红染色细胞核发灰的补救方法

病理技术工作主要是利用技术手段为病理诊断提供必要条件，而一张优质的病理切片，细胞核和细胞质的对比染色必须是清晰的，在日常病理外检工作中，有时一些人为因素，比如脱水时间不够，固定不及时，会出现细胞核发灰现象，即细胞核内染色质和核仁不清，给诊断带来一定的困难，苏木素．伊红（HE）染色是最经典的常规染色方法，笔者主要针对脱水浸蜡时间不够，引起细胞核发灰，进行实践探索，并找到一种行之有效的补救方法。

基于苏木素-伊红组织病理图像的计算机辅助的乳腺癌预后

定量分析苏木素-伊红(H&E)染色组织病理图像作为一个新兴领域得到越来越多的关注。本文综述了计算机辅助的图像分析方法在乳腺癌预后中的应用。首先简述了乳腺癌基于H&E组织病理图像的传统预后评估。然后概述了计算机辅助的预后评估,包括图像采集、图像预处理、感兴趣区域检测及对象分割、特征提取,以及计算机辅助的预后。最后总结了计算机辅助的乳腺癌预后研究所面临的主要挑战和未来的发展方向。

应用免疫激活磁珠分选技术CD45去除方法富集——免疫细胞化学联合苏木素-伊红染色检测肝癌患者循环肿瘤细胞

目的 探讨免疫激活磁珠分选（MACS） CD45去除方法富集后,以细胞角蛋白（CK）为标记联合苏木素-伊红（HE）染色检测肝癌患者外周血肿瘤细胞（CTC）的价值.方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测18种上皮肿瘤细胞株的CK（CK8、CK18、CK19）表达;采集健康志愿者、肝癌患者外周血,以MACS技术CD45去除方法对外周血单个核细胞（PBMC）进行富集,以CK为标记,采用免疫组织化学染色联合HE染色检测肿瘤细胞.结果 在18种上皮性肿瘤细胞株中CK8、CK18、CK19表达率分别为72.22％、83.33％和66.67％;9种肝癌细胞株中CK阳性表达占绝对多数;在MACS技术CD45去除富集肿瘤细胞基础上,应用免疫细胞化学和HE染色结果显示,肝癌患者外周血存在完整肿瘤细胞,检出率为63.15％ （12/19）,健康志愿者未检测到肿瘤细胞.结论 CK可作为检测外周血肝癌细胞标志物;MACS技术CD45去除方法富集后,CK免疫细胞化学和HE染色同步检测方法有助于检测肝癌患者外周血肿瘤细胞.

胆囊组织的显微傅立叶变换红外光谱与苏木素-伊红染色相关性研究

目的 研究不同生理病理状态胆囊组织的显微傅立叶变换红外光谱(Mic-FTIR)表现与苏木素-伊红(HE)染色组织切片特征的相关性。方法 应用FTIR和显微FTIR技术对8例正常胆囊组织、10例炎性胆囊组织和10例胆囊癌组织及冰冻切片进行检测,结合常规HE染色病理结果分析总结胆囊组织的Mic-FTIR光谱与HE染色的相关性。结果 胆囊正常、炎性和癌组织具有不同的FTIR光谱表现,和正常组织相比较,癌组织具有较强的核酸吸收谱带,I1080/I1550在正常组织中为 0.62,癌组织中为 0.87;3种组织中炎性组织具有最强的水吸收峰。同一切片不同区域的FTIR光谱表现不尽相同,腺体内区域具有较强的脂肪和糖原的吸收峰,间质区具有较强的胶原吸收峰而脂肪和糖原的吸收峰相对较弱。结论 不同胆囊组织具有不同的FTIR光谱特征,胆囊组织的Mic-FTIR光谱可以很好地反映出HE染色下的组织特征。

表没食子儿茶素没食子酸酯对X线照射大鼠肺损伤病理形态、MMP-1及TIMP-1蛋白表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对放射性肺损伤大鼠肺组织病理形态及MMP-1和TIMP-1蛋白表达的影响,评价EGCG对放射性肺损伤的防治作用。方法将雄性Wistar大鼠108只随机分为6组,即正常对照组,放射模型组,大、中、小剂量儿茶素组和泼尼松组。除正常对照组外,其余组均给予X线照射,单次30 Gy。每组分别于照后第14天、30天、60天随机处死大鼠,取左肺组织常规方法制成石蜡切片,苏木素-伊红（HE）染色观察病理形态变化,采集右肺中叶组织,免疫组化法观察肺组织MMP-1和TIMP-1蛋白的表达。结果 HE染色显示,大、中剂量儿茶素组肺泡充血、渗出、出血及炎性细胞浸润程度均轻于放射模型组。免疫组化结果显示,与正常对照组比较,14-60 d放射模型组肺组织MMP-1和TIMP-1蛋白表达相应增高,MMP-1/TIMP-1比例增大。与放射模型组比较,中、大剂量儿茶素组MMP-1和TIMP-1蛋白表达明显减少（P〈0.05）,MMP-2/TIMP-2始终处于相对平衡状态,小剂量儿茶素组MMP-1和TIMP-1蛋白表达增多,与放射模型组比较无明显差异（P〉0.05）。结论放射性肺损伤的病理变化与MMP-1和TIMP-1表达的平衡失调有关,EGCG对放射性肺损伤大鼠有保护作用,其机制可能为通过抑制MMP-1和TIMP-1蛋白表达,从而维持MMP-1/TIMP-1比例的平衡。

葛根素对小肠缺血-再灌注损伤保护机制的实验研究

目的:探讨葛根素对小肠缺血再灌注损伤(ischemiareperfusioninjury,IRI)的保护作用。方法:采用肠系膜上动脉(SMA)夹闭松夹闭方式造成小肠缺血再灌注模型。将25只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和葛根素治疗组。假手术对照组分离SMA但不夹闭。其余2组分别于缺血即刻(C0)、缺血再灌注1h(R1)2个时点应用免疫组织化学的方法观察小肠ICAM1表达,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,同时检测小肠组织含水量,并进行苏木素伊红(HE)染色,在光镜下观察小肠组织的病理形态学变化。结果:缺血再灌注组肠缺血再灌注1h,免疫组织化学显示ICAM1蛋白表达较假手术组、葛根素治疗组增多(P<0.05),葛根素治疗组大鼠血MDA含量显著下降(P<0.05)。HE染色显示,I/R损伤后,葛根素治疗组肠屏障功能损伤较缺血再灌注组减轻。结论:肠缺血再灌注时肠血管内皮细胞ICAM1表达增加,血MDA含量显著升高,由此介导的中性粒细胞在局部聚集、活化,从而导致肠粘膜上皮损伤,其通透性增加。葛根素通过清除自由基、抑制ICAM1的表达,对肠缺血再灌注损伤有保护作用。

微小RNA-141-3p在脑出血患者血清中的表达及其作用机制

目的分析微小RNA-141-3p(miR-141-3p)在脑出血(ICH)患者中的表达水平,并探讨miR-141-3p对大鼠脑出血损伤的作用及其机制。方法以40例脑出血患者和40例体检健康对照者为研究对象,采用Real-time PCR方法检测血清中miR-141-3p的含量。采用生物信息学预测miR-141-3p的靶标基因,双荧光素酶报告分析验证miR-141-3p对核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)的调控作用。在大鼠脑出血模型侧脑室注射miR-141-3p激动剂(agonist)或者激动剂对照(agonist NC),治疗7 d后进行神经功能评分。麻醉处死大鼠后取出脑组织,HE染色观察脑组织病理改变。干湿重法测定脑组织含水量,并采用Real-time PCR测定miR-141-3p和NLRP3的表达,通过Western blotting方法测定白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-18的表达。结果与健康对照组(0.520±0.028)相比,脑出血患者血清中miR-141-3p的表达水平(0.068±0.038)显著下调(t=15.93,P<0.001),且与血肿周围水肿严重程度成负相关(r=-0.8948,-0.9434~-0.8087,P<0.001)。miR-141-3p靶向调控NLRP3基因表达。miR-141-3p的表达水平在miR-141-3p agonist组中明显高于agonist NC组(P<0.001),炎症小体NLRP3和炎症因子IL-1β、IL-6和IL-18表达水平明显低于agonist NC组(P<0.001)。与agonist NC组相比,agonist组miR-141-3p在ICH术后7 d脑水肿减轻,神经功能评分明显降低(P<0.001)。HE染色结果表明,ICH大鼠注射miR-141-3p激动剂后血肿周围水肿明显缩小。结论miR-141-3p通过靶向NLRP3降低炎症反应,减轻对脑出血后血肿周围脑组织的损伤。

恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan的病理学观察

目的:前人的研究证实大脑内存在降解Aβ关键酶neprilysin(NEP),注射NEP的抑制剂thiorphan能够在啮齿类诱发神经元淀粉样蛋白水平升高。但是没有注射thiorphan后对啮齿类大脑病理学观察的报道,更加没有恒河猴身上这方面的实验数据。本课题组拟用该法建立AD模型,就建立AD模型而言需要获得病理学方面的数据,因此,本实验观察Aβ1-42和thiorphan对恒河猴大脑皮质,基底核等部位的毒性影响,为注射thiorphan和Aβ建立恒河猴AD模型提供数据准备。方法:开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色法观察大脑上述部位的形态学改变。结果:实验组以注射位点为中心呈阶梯状,越靠近注射位点神经元的消失就越严重。局部液化坏死,呈筛孔状改变,神经元丢失。可见萎缩神经细胞,大量小胶质细胞增生,噬神经元现象显著。结论:Aβ1-42和Thiorphan联合颅内给药后引起神经元丢失及小胶质细胞增生。