冬季苏木素-伊红染色常见问题与处理

苏木素-伊红（HE）染色制片是病理科工作中的一项最基本、最重要的技术。由于HE染色制片是多步骤、多因素决定的方法,因此在制片过程中存在很多影响因素,尤其是在冬季室温较低的情况下,常会出现不理想的染色结果。本文就冬季HE染色制片过程中需注意的问题进行分析和讨论如下。

酸脱钙组织苏木素-伊红染色前处理改良方案

目的研究牙、骨等硬组织酸脱钙标本苏木素-伊红(HE)染色前处理方法,改善硬组织因酸脱钙后pH变化而引起的切片质量欠佳及HE染色组织结构不清的现象。方法 20例含硬组织的口腔病理标本硝酸脱钙后分别进行常规处理、浓氨水浸泡处理、饱和碳酸锂溶液浸泡处理,比较不同处理方法下切片质量及HE染色效果。结果与常规处理相比,饱和碳酸锂溶液处理标本切片完整,苏木素着色强、胞核染色清晰,胞浆染色鲜艳。结论酸脱钙标本在脱水包埋之前,经饱和碳酸锂溶液浸泡处理能中和脱钙组织酸性环境,切片质量及HE染色效果较好,适用于口腔病理酸脱钙组织样本的苏木素-伊红染色前处理。

巴氏染色与苏木素-伊红染色在液基细胞涂片中应用研究

我院2005年7月开始引进和应用液基薄层细胞制片（TCT）技术，采用新柏液基薄层细胞检测，为了比较苏木素-伊红（HE）染色法与巴氏染色法在液基细胞中的区别，

苏木素-伊红染色中常见问题原因分析

苏木素-伊红染色（HE染色）是病理切片的一种常规染色方法,操作方法简单,但在染色过程中易受组织固定、脱水、温度等因素的影响,导致染色质量下降.笔者就染色中常出现问题的原因进行了分析,以提高病理切片染色质量.

二次分化法在苏木素-伊红染色中的应用及探讨

一张优质的切片要求切片完整,厚薄均匀,无刀痕,无皱褶,还要求染色清晰,核质分明,对比度好。在苏木素-伊红（HE）染色中,分化是关键,笔者对2万余张常规组织切片进行了深染重退对比染色;发现经2次或2次以上分化组织染色的切片,无论是色彩鲜艳度、细胞清晰度,还是核质对比度，都优于1次分化染出的组织切片，具体方法如下。

苏木素-伊红染色细胞核发灰的补救方法

病理技术工作主要是利用技术手段为病理诊断提供必要条件，而一张优质的病理切片，细胞核和细胞质的对比染色必须是清晰的，在日常病理外检工作中，有时一些人为因素，比如脱水时间不够，固定不及时，会出现细胞核发灰现象，即细胞核内染色质和核仁不清，给诊断带来一定的困难，苏木素．伊红（HE）染色是最经典的常规染色方法，笔者主要针对脱水浸蜡时间不够，引起细胞核发灰，进行实践探索，并找到一种行之有效的补救方法。

应用免疫激活磁珠分选技术CD45去除方法富集——免疫细胞化学联合苏木素-伊红染色检测肝癌患者循环肿瘤细胞

目的 探讨免疫激活磁珠分选（MACS） CD45去除方法富集后,以细胞角蛋白（CK）为标记联合苏木素-伊红（HE）染色检测肝癌患者外周血肿瘤细胞（CTC）的价值.方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测18种上皮肿瘤细胞株的CK（CK8、CK18、CK19）表达;采集健康志愿者、肝癌患者外周血,以MACS技术CD45去除方法对外周血单个核细胞（PBMC）进行富集,以CK为标记,采用免疫组织化学染色联合HE染色检测肿瘤细胞.结果 在18种上皮性肿瘤细胞株中CK8、CK18、CK19表达率分别为72.22％、83.33％和66.67％;9种肝癌细胞株中CK阳性表达占绝对多数;在MACS技术CD45去除富集肿瘤细胞基础上,应用免疫细胞化学和HE染色结果显示,肝癌患者外周血存在完整肿瘤细胞,检出率为63.15％ （12/19）,健康志愿者未检测到肿瘤细胞.结论 CK可作为检测外周血肝癌细胞标志物;MACS技术CD45去除方法富集后,CK免疫细胞化学和HE染色同步检测方法有助于检测肝癌患者外周血肿瘤细胞.

胆囊组织的显微傅立叶变换红外光谱与苏木素-伊红染色相关性研究

目的 研究不同生理病理状态胆囊组织的显微傅立叶变换红外光谱(Mic-FTIR)表现与苏木素-伊红(HE)染色组织切片特征的相关性。方法 应用FTIR和显微FTIR技术对8例正常胆囊组织、10例炎性胆囊组织和10例胆囊癌组织及冰冻切片进行检测,结合常规HE染色病理结果分析总结胆囊组织的Mic-FTIR光谱与HE染色的相关性。结果 胆囊正常、炎性和癌组织具有不同的FTIR光谱表现,和正常组织相比较,癌组织具有较强的核酸吸收谱带,I1080/I1550在正常组织中为 0.62,癌组织中为 0.87;3种组织中炎性组织具有最强的水吸收峰。同一切片不同区域的FTIR光谱表现不尽相同,腺体内区域具有较强的脂肪和糖原的吸收峰,间质区具有较强的胶原吸收峰而脂肪和糖原的吸收峰相对较弱。结论 不同胆囊组织具有不同的FTIR光谱特征,胆囊组织的Mic-FTIR光谱可以很好地反映出HE染色下的组织特征。

表没食子儿茶素没食子酸酯对X线照射大鼠肺损伤病理形态、MMP-1及TIMP-1蛋白表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对放射性肺损伤大鼠肺组织病理形态及MMP-1和TIMP-1蛋白表达的影响,评价EGCG对放射性肺损伤的防治作用。方法将雄性Wistar大鼠108只随机分为6组,即正常对照组,放射模型组,大、中、小剂量儿茶素组和泼尼松组。除正常对照组外,其余组均给予X线照射,单次30 Gy。每组分别于照后第14天、30天、60天随机处死大鼠,取左肺组织常规方法制成石蜡切片,苏木素-伊红（HE）染色观察病理形态变化,采集右肺中叶组织,免疫组化法观察肺组织MMP-1和TIMP-1蛋白的表达。结果 HE染色显示,大、中剂量儿茶素组肺泡充血、渗出、出血及炎性细胞浸润程度均轻于放射模型组。免疫组化结果显示,与正常对照组比较,14-60 d放射模型组肺组织MMP-1和TIMP-1蛋白表达相应增高,MMP-1/TIMP-1比例增大。与放射模型组比较,中、大剂量儿茶素组MMP-1和TIMP-1蛋白表达明显减少（P〈0.05）,MMP-2/TIMP-2始终处于相对平衡状态,小剂量儿茶素组MMP-1和TIMP-1蛋白表达增多,与放射模型组比较无明显差异（P〉0.05）。结论放射性肺损伤的病理变化与MMP-1和TIMP-1表达的平衡失调有关,EGCG对放射性肺损伤大鼠有保护作用,其机制可能为通过抑制MMP-1和TIMP-1蛋白表达,从而维持MMP-1/TIMP-1比例的平衡。

微小RNA-141-3p在脑出血患者血清中的表达及其作用机制

目的分析微小RNA-141-3p(miR-141-3p)在脑出血(ICH)患者中的表达水平,并探讨miR-141-3p对大鼠脑出血损伤的作用及其机制。方法以40例脑出血患者和40例体检健康对照者为研究对象,采用Real-time PCR方法检测血清中miR-141-3p的含量。采用生物信息学预测miR-141-3p的靶标基因,双荧光素酶报告分析验证miR-141-3p对核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)的调控作用。在大鼠脑出血模型侧脑室注射miR-141-3p激动剂(agonist)或者激动剂对照(agonist NC),治疗7 d后进行神经功能评分。麻醉处死大鼠后取出脑组织,HE染色观察脑组织病理改变。干湿重法测定脑组织含水量,并采用Real-time PCR测定miR-141-3p和NLRP3的表达,通过Western blotting方法测定白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-18的表达。结果与健康对照组(0.520±0.028)相比,脑出血患者血清中miR-141-3p的表达水平(0.068±0.038)显著下调(t=15.93,P<0.001),且与血肿周围水肿严重程度成负相关(r=-0.8948,-0.9434~-0.8087,P<0.001)。miR-141-3p靶向调控NLRP3基因表达。miR-141-3p的表达水平在miR-141-3p agonist组中明显高于agonist NC组(P<0.001),炎症小体NLRP3和炎症因子IL-1β、IL-6和IL-18表达水平明显低于agonist NC组(P<0.001)。与agonist NC组相比,agonist组miR-141-3p在ICH术后7 d脑水肿减轻,神经功能评分明显降低(P<0.001)。HE染色结果表明,ICH大鼠注射miR-141-3p激动剂后血肿周围水肿明显缩小。结论miR-141-3p通过靶向NLRP3降低炎症反应,减轻对脑出血后血肿周围脑组织的损伤。

组织化学染色技术在超薄生物塑化标本中的应用

目的探讨组织化学染色技术是否可以应用于塑化标本并验证染色塑化标本是否具有自发荧光。方法选取1个手掌标本经超薄生物塑化技术做成组织块,进行连续切片,切片数量56张,并按切片顺序进行染色处理:原始切片,苏木素-伊红染色,凡尔霍夫-酸性品红染色,亚甲蓝-天青Ⅱ号染色,在扫描仪、光学显微镜和激光扫描共焦显微镜下观察染色效果和组织结构特点并进行比较。结果 3种染色技术都可应用于塑化切片染色。苏木素-伊红染色显示肌肉、结缔组织呈红色或紫红色,骨质呈紫蓝色或蓝色。凡尔霍夫-酸性品红染色显示弹力纤维呈黑色,胶原呈红色,其他组织为黄色或棕黄色。亚甲蓝-天青Ⅱ号染色显示肌腱呈紫红色,骨质呈粉红色,软骨呈紫罗兰,其他组织呈紫色。但细胞内结构的染色效果并不理想。在激光扫描共焦显微镜下,胶原纤维、弹力纤维和肌肉纤维具有自发荧光,结构清晰可辨。结论常用的组织化学染色技术适合于超薄塑化切片染色,染色切片的各种组织结构比未染色的观察效果好。染色后,塑化切片中具有自发荧光的结构在激光扫描共焦显微镜下亦可清晰显影。

恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan的病理学观察

目的:前人的研究证实大脑内存在降解Aβ关键酶neprilysin(NEP),注射NEP的抑制剂thiorphan能够在啮齿类诱发神经元淀粉样蛋白水平升高。但是没有注射thiorphan后对啮齿类大脑病理学观察的报道,更加没有恒河猴身上这方面的实验数据。本课题组拟用该法建立AD模型,就建立AD模型而言需要获得病理学方面的数据,因此,本实验观察Aβ1-42和thiorphan对恒河猴大脑皮质,基底核等部位的毒性影响,为注射thiorphan和Aβ建立恒河猴AD模型提供数据准备。方法:开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色法观察大脑上述部位的形态学改变。结果:实验组以注射位点为中心呈阶梯状,越靠近注射位点神经元的消失就越严重。局部液化坏死,呈筛孔状改变,神经元丢失。可见萎缩神经细胞,大量小胶质细胞增生,噬神经元现象显著。结论:Aβ1-42和Thiorphan联合颅内给药后引起神经元丢失及小胶质细胞增生。

介绍一种观察凋亡细胞形态学特征的染色方法——苏木素伊红染色法(HE染色法)

就苏木素 伊红染色法用于观察与鉴别细胞凋亡与细胞坏死作了较详细的介绍。此染色法对凋亡细胞的形态学特征检测 ,既方便又可靠 ,在一般普通光学显微镜下就可进行观察与检测。此法不失于研究细胞凋亡的一种检测观察凋亡细胞形态学特征的简便方法。

棒曲霉素对KM小鼠肾脏的毒性效应

该研究以KM小鼠作为实验动物,研究2.5、5.0、7.5、10、15μmol/L五个浓度梯度下棒曲霉素对小鼠体重、肾脏系数等的影响,并通过各项肾脏切片染色试验验证PAT对肾脏的毒性损伤。其中PAT浓度对体重增长率基本无影响,两者之间几乎无相关关系;而随着PAT浓度增大,肾脏系数有逐渐增大的趋势,其中7.5μmol/L和10μmol/L PAT处理的差异显著(p<0.05);随着PAT浓度增加,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后可观察到大片细胞基质和胞外基质,蓝紫色细胞核逐渐减少且细胞核密度逐渐降低,此外PAT浓度较高时出现了长条状空白;Masson染色后肾小球发生明显的纤维硬化情况,且胞间充血;过碘酸雪夫(Periodic Acid-Schiff,PAS)染色后出现了少量糖原,可知糖原没有被正常降解。因此,PAT浓度的增加会导致核密度降低、肾脏细胞皱缩、胶原纤维增加、糖原分解被抑制等问题,从而对KM小鼠肾脏造成严重损伤。研究结果将为进一步研究棒曲霉素对肾脏的损伤提供理论支持。

生长激素对大鼠牙齿移动及牙周组织影响的研究

目的研究生长激素(growth hormone,GH)对大鼠牙周膜、牙槽骨和正畸牙齿移动的影响。方法 40只7周龄Wistar雄性大鼠,随机分成对照组(C)和实验组(E),每组20只。实验组每只大鼠每天接受腹部皮下注射GH0.15 IU/(kg·d);对照组每天接受等量的生理盐水注射。所有大鼠的上切牙和左侧上颌第一磨牙间放置一力值0.49 N镍钛拉簧,以使第一磨牙向近中移动。加力后3、7、10和14 d处死大鼠。游标卡尺测量第一磨牙移动的距离。上颌骨切片做HE染色。结果10 d和14 d时,实验组和对照组相比,牙齿移动距离有显著差异(P<0.05)。与对照组相比,实验组在7 d有更多的破骨细胞,同时在7和10 d表现出更多的血管。结论短期注射GH会影响骨改建及加快正畸牙齿移动,缩短治疗时间。

日本血吸虫尾蚴不同染色方法的比较研究

目的探索不同化学染色法对日本血吸虫尾蚴的染色效果,并对其形态结构进行分析,为血吸虫研究和教学提供参考。方法 采用自然逸出法从阳性钉螺获取尾蚴,涂片法制作尾蚴玻片标本,分别采用苏木素-伊红(HE)染液、瑞氏-姬姆萨染液、尼氏(Nissl)染液、0.4%台盼蓝、考马斯亮蓝R-250染液、丽春红染液、0.1%茜素红染液、刚果红染液等化学染料进行染色,在光学显微镜下观察和评价尾蚴形态结构,比较各方法的染色效果。结果形态学测量的结果显示获取的尾蚴为成熟期尾蚴,8种染色方法均能使血吸虫尾蚴呈不同程度的着色,但在尾蚴形态结构显示上有相似性,亦有不同之处。HE染色、瑞氏-姬姆萨染色、台盼蓝和尼氏染色等对尾蚴头部和尾部结构均能较好显示。考马斯亮蓝和丽春红染色对尾蚴头部微细结构均显示欠佳,但考马斯亮蓝可显示尾部排泄管,丽春红可显示尾部部分结构。茜素红、刚果红染色效果类似,对头部和尾部结构均能部分显示。结论 HE染色能将尾蚴各部位器官显示清楚,对比明显,可在教学科研中广泛使用。其余染色方法应根据研究目的不同,选取不同的方法。

荧光染色法对组织病理诊断棘阿米巴性角膜炎价值的研究

目的:将荧光染色技术应用于组织病理诊断棘阿米巴性角膜炎(AK),并将阅片结果与HE染色和PAS染色的阅片结果进行比较,分析这3种染色方法的敏感性与特异性,探究荧光染色技术在角膜组织活检中检测阿米巴病原体的应用价值。方法:回顾性研究。收集2015-05/2020-06于山东第一医科大学附属眼科医院就诊的感染性角膜炎患者的手术切除标本74例75眼。根据角膜刮片、培养和组织病理诊断结果,将感染性角膜标本分为AK组和非棘阿米巴性角膜炎(NAK)组。将连续切片的组织分别行HE染色、PAS染色和荧光染色,分析3种染色方法对AK诊断的敏感性与特异性,使用受试者工作特征(ROC)曲线计算曲线下面积(AUC),并进一步分析在同一部位相同倍率视野下,计数三种染色方法找到棘阿米巴病原体的数量,明确荧光染色法对AK的诊断价值。结果:HE染色的敏感性为69%(27/39)、特异性为92%,PAS染色的敏感性为62%(24/39)、特异性为97%,荧光染色的敏感性为95%(37/39)、特异性为97%,3种染色方法对AK诊断的敏感性存在差异(χ^(2)=19.857,P<0.001);进行两两比较发现,HE染色、PAS染色与荧光染色诊断AK的敏感性有差异(P=0.003、<0.001),HE染色与PAS染色诊断AK的敏感性没有差异(P=0.978);AUC最大为荧光染色(0.960),其次分别为HE染色(0.804),PAS染色(0.794)。计数在同一部位相同倍率视野下,HE染色、PAS染色和荧光染色查见棘阿米巴包囊数量的中位数分别为4(0,11)、2(0,9)、12(3,33)个(χ^(2)=56.561,P<0.001);进行两两比较发现,HE染色和荧光染色、PAS染色和荧光染色找到棘阿米巴包囊的数量有差异(P<0.001),HE和PAS两种染色方法找到棘阿米巴包囊的数量没有差异(P=0.210),荧光染色的组织病理切片更容易辨别阿米巴病原体。结论:荧光染色技术应用于组织病理诊断AK的敏感性比HE染色和PAS染色高,可显著提高阿米巴病原体检测的阳性率。

病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析

目的研究病理技术苏木素-伊红(HE)染色在病理诊断中的价值,并分析提高其应用效果的方法。方法 8000例进行病理诊断的患者作为研究对象,对其样本均采用HE染色进行病理诊断,统计样本合格率和不合格率,并分析样品不合格的主要原因。结果在本次研究中,样本合格率为99.00%(7920/8000),样本不合格率为1.00%(80/8000)。样本不合格的主要原因包括:组织切片脱落26.25%(21/80)、染色不均匀21.25%(17/80)、染色模糊16.25%(13/80)、切片污染18.75%(15/80)、染色困难17.50%(14/80)。结论病理技术HE染色在病理诊断中应用效果较好,其样品合格率较高,但是在进行染色的过程中,需要进行更加细致的操作,针对影响样本合格的各种因素进行有效规避,以降低样本被污染的几率,防止出现不合格样本,进而提高诊断效率。通过上述保障,病理技术HE染色值得在临床病理诊断中推广。

在宫颈癌筛查中液基细胞学制片方法及染色方法探讨

目的:探讨沉降式液基细胞学制片联合苏木素-伊红染色用于宫颈癌筛查中的临床价值。方法:以2018年1月至2018年12月为时限,择取于本院行宫颈癌筛查的10500名受检者,取宫颈细胞样本为研究对象,分别接受液基细胞学检查(研究组)与宫颈涂片检查(对照组)。研究组采用泰普沉降式制片,行苏木素-伊红染色;对照组制成传统涂片,行巴氏染色。镜下观察,评价两组制片质量,比较两组细胞学检查结果。结果:研究组制片满意度(98.62%)高于对照组(87.05%),宫颈上皮异常检出率(6.05%)高于对照组(4.05%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:沉降式液基细胞学制片联合苏木素-伊红染色能有效提高涂片质量及宫颈上皮异常检出率,在宫颈癌筛查中具有重要应用价值。

3种组织固定液对大菱鲆肝脏切片质量影响和效果比较

为查明3种组织固定液对大菱鲆肝脏石蜡切片质量的影响,筛选效果最佳的固定液。本实验选用波恩氏(Bouin)、戴维森氏(Davidson)和4%多聚甲醛(Paraformaldehyde, PFA)3种组织固定液,对大菱鲆的肝脏进行固定,制作石蜡切片,通过苏木素-伊红(H-E)和免疫组织化学(Immunohistochemistry)染色,观察组织细胞形态学特征,利用统计学方法分析细胞完整度和免疫组化阳性率情况。结果发现,3种固定液对大菱鲆肝组织石蜡切片固定效果存在显著差异,Bouin固定液组织H-E染色细胞结构清晰、形态完整,Davidson固定液H-E染色组织溶解、细胞结构不清晰,但能分辨出核质界线,4%多聚甲醛组H-E染色鲜艳,但核质分界不清晰。完整肝细胞比例,4%PFA显著低于Bouin和Davidson固定液(P<0.05),且Bouin和Davidson固定液无显著差异(P>0.05)。肝组织增殖细胞核抗原(proliefrating cell nuclear antigen, PCNA)免疫组化染色阳性率3种固定液存在显著差异,Bouin固定液显著高于4%PFA和Davidson(P<0.05)。综上,使用Bouin固定液对肝脏固定,进行H-E染色或免疫组化染色能观察到更为完整的组织细胞结构和细胞增殖情况,效果最佳。